專利名稱：一種雞胚多糖的片劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種從雞胚中提取出的多糖的片劑。
背景技術(shù)：
世界衛(wèi)生組織報告顯示，2008年全世界約有1270萬癌癥新增患者，760萬死于癌癥，尤其在發(fā)展中國家，癌癥新增例數(shù)達(dá)56%，據(jù)推測到2020年前，全球癌癥發(fā)病率將增加50%，即每年將新增1500萬癌癥患者。不僅如此，癌癥的死亡人數(shù)也在全球迅猛上升，2030年這個數(shù)字可能會增至1320萬。因此，癌癥治療藥物的研究關(guān)系到肝癌患者和全社會切身利益，一直是醫(yī)藥行業(yè)的·研究熱點，具有重要的社會意義。從治療手段上來說，癌癥的治療主要是外科治療、放射、化療、生物與綜合治療等。癌癥外科主要是癌切除、局部栓塞治療等。切除和栓塞的治療方法適用于界限清楚、遠(yuǎn)離大血管的腫瘤，而且手術(shù)切除的預(yù)后差、五年存活率低。移植需要解決的主要問題在于免疫排斥反應(yīng)，后者往往成為患者和社會重大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，成功率也只有50%左右，5年存活率也很低。放療和化療對正常細(xì)胞也有殺傷作用，其特點是專一性差、副作用巨大，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時也極大地干擾機(jī)體的正常功能，不利于長期用藥。正由于癌癥缺乏有效控制方法，患者的預(yù)后極差。平均5年存活率低。因此，尋找腫瘤細(xì)胞特異性的藥物是科學(xué)界始終關(guān)注的焦點。腫瘤免疫治療的方法有非特異性免疫治療和特異性免疫治療。過去，人們在腫瘤免疫研究中過于強(qiáng)調(diào)特異性抗原和特異性免疫系統(tǒng)，免疫學(xué)的進(jìn)展加深了人們對免疫系統(tǒng)抗腫瘤功能及免疫治療作用重要性的認(rèn)識。近年的研究表明，非特異性免疫系統(tǒng)的重要性開始得到了認(rèn)同?，F(xiàn)在，人們認(rèn)識到，與不能對自身組織產(chǎn)生良好免疫應(yīng)答的特異性免疫系統(tǒng)形成鮮明對照的是，非特異性免疫系統(tǒng)具有很強(qiáng)的能力來消除單個畸變的自身細(xì)胞。這意味著非特異性免疫系統(tǒng)具有在單個細(xì)胞水平消除可能發(fā)展成為腫瘤細(xì)胞的早期遺傳變異的潛能。迪威立克抗腫瘤作用主要是通過對單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)強(qiáng)大而持久的刺激，引起巨噬細(xì)胞(Mcp)增生、活化、吞噬功能增強(qiáng)、誘導(dǎo)分泌腫瘤壞死因子(TNF-a)、干擾素(IFN-y)、白細(xì)胞介素(IL-2)、活性氧(H202、N0)等癌細(xì)胞殺傷因子及增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性，達(dá)到抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞及病原微生物的目的，且可通過促進(jìn)造血多能干細(xì)胞分化為單核巨噬細(xì)胞，進(jìn)一步調(diào)動機(jī)體免疫系統(tǒng)蘊(yùn)藏抗癌、殺菌潛力。由于免疫調(diào)節(jié)的全身作用強(qiáng)，副作用少且輕特異性強(qiáng)的特點，適用范圍逐漸增加，安全性較其他類別的藥物具備明顯的提聞。本發(fā)明研制的雞胚尿囊液和雞胚提取的多糖屬于免疫調(diào)節(jié)類產(chǎn)品。免疫調(diào)節(jié)是指在免疫反應(yīng)中，各種免疫細(xì)胞及其亞群間，細(xì)胞與各種細(xì)胞因子間存在著的刺激與抑制，或正相與負(fù)相兩方面作用構(gòu)成的互相制約的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，完成對抗原的識別和反應(yīng)。這種調(diào)節(jié)作用對維護(hù)機(jī)體免疫功能的穩(wěn)定和動態(tài)平衡十分重要。本發(fā)明的申請人申請了一種抗腫瘤生物多糖(申請?zhí)?01310093593.6)，公開了雞胚多糖的制備方法，為了使雞胚多糖更好的應(yīng)用于臨床，并最大限度保持多糖的生物活性，本發(fā)明公開了一種雞胚多糖的片劑及其片劑的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為使雞胚多糖滿足臨床應(yīng)用和大規(guī)模生產(chǎn)的需要，公開了一種雞胚多糖的片劑，及其制備方法，通過所述方法可以得到方便服用、劑量準(zhǔn)確、質(zhì)量穩(wěn)定的片劑。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，雞胚多糖片劑，主要由下列重量份的原料配制而成，活性成分:雞胚多糖1-2份，輔料:微晶纖維素或低取代羥丙基纖維素15-30份，硬質(zhì)酸鈉10-30份，碳酸鈉50-70 份。本發(fā)明所述的雞胚多糖片劑，主要由下列重量份的原料配制而成，活性成分:雞胚多糖1.5份，輔料:微晶纖維素或低取代羥丙基纖維素15份，硬質(zhì)酸鈉23.5份，碳酸鈉60份。本發(fā) 明所述的雞胚多糖片劑，由下述重量份的原料制成咀嚼片，活性成分:雞胚多糖1-2份，輔料:微晶纖維素或低取代羥丙基纖維素15-30份，硬質(zhì)酸鈉10-30份，碳酸鈉50-70份，乳糖或蔗糖或糖粉5-10份，山梨醇或甘露醇10-15份。本發(fā)明雞胚多糖片劑的制備方法，包括以下步驟:步驟一雞胚多糖的提取:I)將SPF雞胚在溫度為36_38°C的恒溫條件下培養(yǎng)9_13天。2)收獲后的雞胚燈檢，標(biāo)記尿囊腔的位置，在溫度為4°C _18°C的環(huán)境下，放置8-48小時，然后提取活雞胚的(死雞胚顏色變黑，活雞胚顏色發(fā)紅)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物。3)將上一步得到的尿囊液或雞胚培養(yǎng)物使用如下的純化工藝提取:A)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的澄清處理:使用20mM IOOmM磷酸鹽緩沖液稀釋尿囊液或雞胚培養(yǎng)物混合均勻，其中磷酸鹽緩沖液與尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的體積比為
2-10: l，8000g-12000g，18°C以下，離心10-60分鐘，收集上清液，棄去沉淀;B)上清液的進(jìn)一步澄清處理:用0.22um的微孔濾膜過濾上清液；C)向濾膜濾過的上清液中添加固體硫酸氨，上清:固體硫酸氨的質(zhì)量比為5-20: I，混勻后放置于4°C _18°C儲存，時間不低于6小時；D) 8000g-12000g, 18°C 以下，離心 10-60 分鐘，取上清液；E)用10-30KD的超濾膜以0.1-0.5mol的NaCl對上清液進(jìn)行超濾，取濾過液；F)用IKD的超濾膜進(jìn)行過濾，取截流液；G)取F)步得到的截流液，于36_38°C干燥。步驟二各組分原料粉碎、混勻、壓片:取各組分原料，分別粉碎，過篩60目，得到的均勻粉末分別置潔凈容器中，按重量比取各組分混分，取混勻的樣品檢測雞胚多糖含量的測定，干法壓片即得雞胚多糖的片劑。上述雞胚多糖含量的測定是通過葸酮法測定，其原理是糖類遇濃硫酸脫水生成糖醛或其衍生物，糠醛或羥甲基糠醛進(jìn)一步與蒽酮試劑縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色物質(zhì)，其在可見光區(qū)6200nm波長處有最大吸收，且其光吸收值在一定范圍內(nèi)與糖的含量成正比關(guān)系。此法可用于單糖、寡糖和多糖的含量測定，操作方法如下:
I)樣品準(zhǔn)備:精確量取Iml的供試品于試管中，平行測定2份，立即加入蒽酮試劑
4.0ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，混勻，80°C水浴30分鐘，管口加蓋，防止蒸發(fā)。水浴結(jié)束后取出試管置于冰水中冷卻至室溫，波長620nm處測定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線2)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精確量取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(lOOyg/mlhCK空白對照)、0.1、0.2,0.3,0.4,0.6,0.8ml分別置于試管中，補(bǔ)純化水至1.0ml，其余操作同供試品。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)(X)，以相應(yīng)濃度的吸收度為縱坐標(biāo)(Y)作圖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)結(jié)果計算:(I)將供試品OD值代入回歸方程中，計算出稀釋后供試品的多糖含量；(2)根據(jù)供試品的稀釋倍數(shù)計算出供試品的多糖含量；多糖含量(ug/ml)=供試品稀釋倍數(shù)X稀釋供試品多糖濃度。上述雞胚多糖的含量測定還可以通過高效液相法測定。本發(fā)明制備的片劑，一天服用1-2片，即可達(dá)到治療劑量含雞胚多糖2mg的要求。本發(fā)明具有以下優(yōu)點及有益效果:1、雞胚多糖的臨床用藥提供了方便的片劑劑型。2、本發(fā)明雞胚多糖的提取使用鹽析和膜技術(shù)相結(jié)合的方法來提取生物多糖，大幅度提高雞胚尿囊液和 雞胚多糖中具備生物活性的多糖分離純化后的純度和回收率。3、本發(fā)明雞胚多糖的提取過程中，沒有使用有機(jī)溶劑，不存在生物危害性，更有利于環(huán)保。4、本發(fā)明公開的雞胚多糖片劑的制備方法獲得的片劑，具有劑量準(zhǔn)確、質(zhì)量穩(wěn)定、純度高，服用方便等優(yōu)點。
具體實施例方式通過參閱下述實施例可以更容易地了解本發(fā)明的內(nèi)容，這些實施例只是為進(jìn)一步說明本發(fā)明，并不意味著限定本發(fā)明的范圍。實施例1雞胚多糖內(nèi)服片的制備片劑規(guī)格:0.1g/片，配制數(shù)量10000片；稱取雞胚多糖IOg,微晶纖維素300g,硬質(zhì)酸鈉190g,碳酸鈉500g。制備方法如下:步驟一雞胚多糖的提取:I)將SPF雞胚在溫度為36_38°C的恒溫條件下培養(yǎng)9_13天。2)收獲后的雞胚燈檢，標(biāo)記尿囊腔的位置，在溫度為4°C的環(huán)境下，放置16小時，然后提取活雞胚的(死雞胚顏色變黑，活雞胚顏色發(fā)紅)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物。3)將第2)步得到的尿囊液或雞胚培養(yǎng)物使用如下的純化工藝提取:A)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的澄清處理:使用40mM磷酸鹽緩沖液稀釋尿囊液或雞胚培養(yǎng)物混合均勻，其中磷酸鹽緩沖液與尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的體積比為5: l，12000g，18°C以下，離心10分鐘，收集上清液，棄去沉淀；B)上清液的進(jìn)一步澄清處理:用0.22um的微孔濾膜過濾上清液；C)向濾膜濾過的上清液中添加固體硫酸氨，比例為10: I (上清:固體硫酸氨)，混勻后放置于4°C儲存，時間不低于6小時；D) 12000g, 18°C以下，離心10分鐘，取上清液；E)用10-30KD的超濾膜以0.2mol的NaCl對上清液進(jìn)行超濾，取濾過液；F)用IKD的超濾膜進(jìn)行過濾，取截流液；G)取F)步得到的截流液，于36_38°C干燥。步驟二雞胚多糖內(nèi)服片的制備:I)取各雞胚多糖，微晶纖維素，硬質(zhì)酸鈉，碳酸鈉，分別粉碎，過篩60目；2)將上一步得到的均勻粉末置于混合機(jī)中混勻20min分鐘；3)用葸酮法抽樣測定樣品檢測雞胚多糖的含量:A、樣品準(zhǔn)備:精確量取Iml的供試品于試管中，平行測定2份，立即加入蒽酮試劑4.0ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，混勻，80°C水浴30分鐘，管口加蓋，防止蒸發(fā)。水浴結(jié)束后取出試管置于冰水中冷卻至室溫，波長620nm處測定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線B、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精確量取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(100iig/ml)，0(空白對照)、0.1、0.2,0.3,0.4,0.6,0.8ml分別置于試管中，補(bǔ)純化水至1.0ml，其余操作同供試品。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)(X)，以相應(yīng)濃度的吸收度為縱坐標(biāo)(Y)作圖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。C、結(jié)果計算:將供試品OD值代入回歸方程中，計算出稀釋后供試品的多糖含量；根據(jù)供試品的稀釋倍數(shù)計算出供試品`的多糖含量；多糖含量(ug/ml)=供試品稀釋倍數(shù)X稀釋供試品多糖濃度。4)計算應(yīng)壓片質(zhì)量，干法壓片即得雞胚多糖片劑。實施例2雞胚多糖內(nèi)服片的制備:片劑規(guī)格:0.1g/片，配制數(shù)量10000片；稱取雞胚多糖15g,微晶纖維素150g,硬質(zhì)酸鈉235g,碳酸鈉600g。制備方法如下:步驟一雞胚多糖的提取:I)將SPF雞胚在溫度為36_38°C的恒溫條件下培養(yǎng)12天。2)收獲后的雞胚燈檢，標(biāo)記尿囊腔的位置，在溫度為4°C的環(huán)境下，放置18小時，然后提取活雞胚的(死雞胚顏色變黑，活雞胚顏色發(fā)紅)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物。3)將第2)步得到的尿囊液或雞胚培養(yǎng)物使用如下的純化工藝提取:A)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的澄清處理:使用30mM磷酸鹽緩沖液稀釋尿囊液或雞胚培養(yǎng)物混合均勻，其中磷酸鹽緩沖液與尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的體積比為5: l，12000g，4°C，離心10分鐘，收集上清液，棄去沉淀；B)上清液的進(jìn)一步澄清處理:用0.22um的微孔濾膜過濾上清液；C)向濾膜濾過的上清液中添加固體硫酸氨，比例為8:1 (上清:固體硫酸氨)，混勻后放置于4°C儲存，時間不低于6小時；D) 12000g, 18°C以下，離心10分鐘，取上清液；E)用10-30KD的超濾膜以0.2mol的NaCl對上清液進(jìn)行超濾，取濾過液；F)用IKD的超濾膜進(jìn)行過濾，取截流液；G)取F)步得到的截流液，于36_38°C干燥。
步驟二雞胚多糖內(nèi)服片的制備:I)取各雞胚多糖，微晶纖維素，硬質(zhì)酸鈉，碳酸鈉，分別粉碎，過篩60目；2)將上一步得到的均勻粉末置于混合機(jī)中混勻15min分鐘；3)用葸酮法抽樣測定樣品檢測雞胚多糖的含量:A、樣品準(zhǔn)備:精確量取Iml的供試品于試管中，平行測定2份，立即加入蒽酮試劑
4.0ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，混勻，80°C水浴30分鐘，管口加蓋，防止蒸發(fā)。水浴結(jié)束后取出試管置于冰水中冷卻至室溫，波長620nm處測定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線B、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精確量取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(100iig/ml)，0(空白對照)、0.1、
0.2,0.3,0.4,0.6,0.8ml分別置于試管中，補(bǔ)純化水至1.0ml，其余操作同供試品。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)(X)，以相應(yīng)濃度的吸收度為縱坐標(biāo)(Y)作圖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。C、結(jié)果計算:將供試品OD值代入回歸方程中，計算出稀釋后供試品的多糖含量；根據(jù)供試品的稀釋倍數(shù)計算出供試品的多糖含量；多糖含量(ug/ml)=供試品稀釋倍數(shù)X稀釋供試品多糖濃度。4)計算應(yīng)壓片質(zhì)量，干法壓片即得雞胚多糖片劑。實施例3雞胚多糖咀嚼片的制備片劑規(guī)格:0.1g/片，配制數(shù)量10000片；稱取雞胚多糖20g， 低取代羥丙基纖維素150g，硬質(zhì)酸鈉130g，碳酸鈉500g，蔗糖IOOg,山梨醇 IOOgo步驟一雞胚多糖的提取:I)將SPF雞胚在溫度為36_38°C的恒溫條件下培養(yǎng)12天。2)收獲后的雞胚燈檢，標(biāo)記尿囊腔的位置，在溫度為4°C的環(huán)境下，放置18小時，然后提取活雞胚的(死雞胚顏色變黑，活雞胚顏色發(fā)紅)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物。3)將第2)步得到的尿囊液或雞胚培養(yǎng)物使用如下的純化工藝提取:A)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的澄清處理:使用20mM磷酸鹽緩沖液稀釋尿囊液或雞胚培養(yǎng)物混合均勻，其中磷酸鹽緩沖液與尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的體積比為5: l，12000g，4°C，離心10分鐘，收集上清液，棄去沉淀；B)上清液的進(jìn)一步澄清處理:用0.22um的微孔濾膜過濾上清液；C)向濾膜濾過的上清液中添加固體硫酸氨，比例為10: I (上清:固體硫酸氨)，混勻后放置于4°C儲存，時間不低于6小時；D) 12000g，18°C以下，離心10分鐘，取上清液；E)用10-30KD的超濾膜以0.2mol的NaCl對上清液進(jìn)行超濾，取濾過液；F)用IKD的超濾膜進(jìn)行過濾，取截流液；G)取F)步得到的截流液，于36_38°C干燥。步驟二雞胚多糖內(nèi)服片的制備:I)雞胚多糖、低取代羥丙基纖維素、硬質(zhì)酸鈉、碳酸鈉、蔗糖、山梨醇，分別粉碎，過篩60目；2)將上一步得到的均勻粉末置于混合機(jī)中混勻25min分鐘；3)用葸酮法抽樣測定樣品檢測雞胚多糖的含量，方法同實施例3。
權(quán)利要求
1.一種雞胚多糖的片劑，主要由下列重量份的原料制成， 活性成分:雞胚多糖1-2份， 輔料:微晶纖維素或低取代羥丙基纖維素15-30份，硬質(zhì)酸鈉10-30份，碳酸鈉50-70份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多糖片劑，主要由下列重量份的原料制成， 活性成分:雞胚多糖1.5份， 輔料:微晶纖維素或低取代羥丙基纖維素15份，硬質(zhì)酸鈉23.5份，碳酸鈉60份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞胚多糖片劑，還包括下述重量份的原料制成咀嚼片，輔料:乳糖或蔗糖或糖粉5-10份，山梨醇或甘露醇10-15份。
4.一種制備如權(quán)利要求1所述的雞胚多糖片劑的方法，包括以下步驟: 步驟一雞胚多糖的提取: 1)將SPF雞胚在溫度為36-38°C的恒溫條件下培養(yǎng)9-13天。
2)收獲后的雞胚燈檢，標(biāo)記尿囊腔的位置，在溫度為4°C_18°C的環(huán)境下，放置8-48小時，然后提取活雞胚的(死雞胚顏色變黑，活雞胚顏色發(fā)紅)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物。
3)將上一步得到的尿囊液或雞胚培養(yǎng)物使用如下的純化工藝提取: A)尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的澄清處理:使用20mM IOOmM磷酸鹽緩沖液稀釋尿囊液或雞胚培養(yǎng)物混合均勻，其中磷酸鹽緩沖液與尿囊液或雞胚培養(yǎng)物的體積比為2-10: 1，8000g-12000g, 18°C以下，離心10-60分鐘，收集上清液，棄去沉淀； B)上清液的進(jìn)一步澄清處理:用0.22 ii m的微孔濾膜過濾上清液； C)向濾膜濾過的上清液中添加固體硫酸氨，比例為5-20: 1(上清:固體硫酸氨)，混勻后放置于4°C _18°C儲存，時間不低于6小時； D)8000g-12000g, 18°C以下，離心10-60分鐘，取上清液； E)用10-30KD的超濾膜以0.1-0.5mol的NaCl對上清液進(jìn)行超濾，取濾過液； F)用IKD的超濾膜進(jìn)行過濾，取截流液； G)取F)步得到的截流液，于36-38°C干燥。
步驟二各組分原料粉碎、混勻、壓片: 取各組分原料，分別粉碎，過篩60目，得到的均勻粉末分別置潔凈容器中，按重量比取各組分混勻，取混勻的樣品檢測雞胚多糖含量的測定，干法壓片即得雞胚多糖的片劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的雞胚多糖含量的測定具體方法為: 1)樣品準(zhǔn)備:精確量取Iml的供試品于試管中，平行測定2份，立即加入蒽酮試劑·4.0ml，迅速浸于冰水浴中冷卻，混勻，80°C水浴30分鐘，管口加蓋，防止蒸發(fā)。水浴結(jié)束后取出試管置于冰水中冷卻至室溫，波長620nm處測定吸光度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線 2)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精確量取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(10011§/1111)，0(空白對照)、0.1、0.2、·0.3,0.4,0.6,0.8ml分別置于試管中，補(bǔ)純化水至1.0ml，其余操作同供試品。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)(X)，以相應(yīng)濃度的吸收度為縱坐標(biāo)(Y)作圖，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3)結(jié)果計算: (1)將供試品OD值代入回歸方程中，計算出稀釋后供試品的多糖含量； (2)根據(jù)供試品的稀釋倍數(shù)計算出供試品的多糖含量；多糖含量(ug/ml)=供 試品稀釋倍數(shù)X稀釋供試品多糖濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞胚多糖的片劑，所述的片劑主要由下列重量份的原料配制而成，活性成分雞胚多糖1-2份；輔料微晶纖維素或低取代羥丙基纖維素15-30份，硬質(zhì)酸鈉10-30份，碳酸鈉50-70份。本發(fā)明還公開了上述多糖片劑的制備方法，通過本發(fā)明所述的方法制備的雞胚多糖片劑，具有劑量準(zhǔn)確、質(zhì)量穩(wěn)定、純度高，服用方便等優(yōu)點。
文檔編號A61P35/00GK103142528SQ20131010376
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月28日
發(fā)明者喬民, 金蓮英 申請人:喬民, 金蓮英