專利名稱：一種啟動哺乳動物干細胞的方法及二氧化氯在制備用于啟動哺乳動物干細胞的藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及啟動哺乳動物體內(nèi)干細胞増殖、遷移和分化的方法，以及ニ氧化氯在制備用于啟動干細胞増殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人類的疾病大致可分為器質(zhì)性疾病和功能性疾病。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中，內(nèi)科治療主要針對功能性疾病，而外科治療和內(nèi)科治療都可以用于器質(zhì)性疾病。然而，大多數(shù)內(nèi)科治療是對癥治療，很多情況下不能根治疾病。此外，外科治療更多的是侵害性治療方法，其通過摘除全部或者部分損傷的器官進行，從而導(dǎo)致器官功能的部分或者完全喪失。另ー方面，器官移植和人工器官被作為外科治療的重要替代醫(yī)療方法。然而，器官移植存在很多問題，例如技術(shù)問題，比如用于抑制排斥反應(yīng)的免疫抑制劑引起的副作用，以及諸如供體捐獻者嚴(yán)重短缺和醫(yī)療衛(wèi)生費用增加等 無法替代的普遍問題。此外，在使用人工器官治療中也存在諸多問題，其中包括技術(shù)問題，比如不能代替該器官功能和生物相容性，以及諸如醫(yī)療衛(wèi)生費用増加等社會問題或經(jīng)濟問題。再生醫(yī)學(xué)作為解決這些問題的新的治療方法在現(xiàn)在引起關(guān)注。再生醫(yī)學(xué)是指積極利用干細胞、對因疾病或意外事故引起功能失?；蚬δ苷系K的器官或組織進行結(jié)構(gòu)再生和功能恢復(fù)的治療方法。根據(jù)利用干細胞的方式，再生醫(yī)學(xué)大致分為以下三種類型(I)從捐獻者收集胚胎干細胞、胎盤血液來源單個核細胞、血液來源單個核細胞或者骨髄來源單個核細胞，在體外培養(yǎng)誘導(dǎo)細胞増殖或/和分化，并通過移植所選的未分化的干細胞或/和已分化的細胞導(dǎo)入患者身體；(2)從該患者身體收集成體干細胞、血液來源單個核細胞或者骨髓來源單個核細胞，在體外培養(yǎng)誘導(dǎo)細胞増殖或/和分化，并通過移植將所選的未分化的干細胞或/和已分化的細胞導(dǎo)入患者自己的身體；和(3)刺激患者的身體(例如，通過給藥、身體鍛煉或者物理療法等)以啟動(initiate)存在于該患者損傷器官或組織原位的干細胞(干細胞沒有損傷)，和/或患者的血液來源或者骨髄來源干細胞，而不在體外培養(yǎng)誘導(dǎo)干細胞的増殖或/和分化。將該方法定義為“原位組織再生”。當(dāng)前再生醫(yī)學(xué)的主流的研究方向為涉及通過細胞移植從外部導(dǎo)入患者身體的方法(即上述第(I)和(2)類的方法)，但在實踐中，仍未大規(guī)模開展，并且第(I)類方法中會涉及到醫(yī)學(xué)倫理問題。其中將已分化的細胞從外部導(dǎo)入患者身體的方法用于皮膚病學(xué)、眼科學(xué)和整形外科領(lǐng)域，其目標(biāo)組織或器官為由ー種或極其有限種類細胞所構(gòu)建的組織或器官(例如，皮膚、骨、軟骨、角膜和肌肉組織)。然而，關(guān)于由多種類型的細胞所構(gòu)建的實體器官(例如，心臟、肝、肺、腎和腦)，適宜地調(diào)控這些多種類型的已分化細胞行為的技術(shù)還沒有達到實用水平。
另ー方面，以下方法為已知的將未分化的細胞從患者身體外部導(dǎo)入的方法I)血管新生(angiogenesis)的治療方法，其涉及在嚴(yán)重的缺血性疾病和心血管病中從患者身體外部導(dǎo)入干細胞以促進血管新生，并形成新的血管(Weissman丄L: Translating stem and progenitor ceil bilology to theclinic:Barriers andopportunities. Science. 287:1442-1446，2000)。2)血管形成(vasculogenesis)的方法,其利用從患者身體外部導(dǎo)入胚胎干細胞(ES 細胞)(McCloskey KE 等人Use of embryonic stem cel 1-derivedendothe Iialcells as a cell source to generate vessel structures in vitro.TissueEng. 11:497-505,2005)。該方法還沒有達到實際應(yīng)用水平，因為培養(yǎng)ES細胞、誘導(dǎo)細胞分化和獲得已分化細胞等方法還沒有充分建立，并且會涉及到醫(yī)學(xué)倫理問題。3)自體骨髄移植的方法，其利用從患者身體骨髓分離的骨髄來源單個核細胞，并直接將細胞導(dǎo)入病變部位來形成新的血管(Sato Y等人，Can a bonemarrow cellcontribute to organ regeneration In vivo analysis usmgtransgenic rats withreporter genes. Transplantation Proceedings. 37:273-275，2005)。該方法存在諸如只能得到少量干細胞、以及因要通過全身麻酔收集大量的骨髓對患者存在身體負擔(dān)和危險等問題，再者，在調(diào)控移植細胞的分化過程中也存在較大的困難。此外，在使用有關(guān)從患者身體外部導(dǎo)入干細胞的方法的再生醫(yī)學(xué)中，ー個共同的問題是發(fā)生并發(fā)癥的危險，該并發(fā)癥可歸因于移植細胞的過度再生或/和過度修復(fù)，當(dāng)然免疫排斥也是引起并發(fā)癥的ー個主要因素。相對而言，利用“原位組織再生”的方法，即刺激本來存在于患者(這里患者的定義為需要一定的醫(yī)學(xué)手段以達至期望目標(biāo)的人，比如美容的目標(biāo)，并非意味著在醫(yī)學(xué)上達到患病標(biāo)準(zhǔn)的人)身體內(nèi)部的干細胞(即，身體內(nèi)部原有的干細胞，和/或來自患者自身血液來源或骨髄來源干細胞)増殖、遷移和分`化，再生損傷器官或/和組織從而可恢復(fù)其功能。已有文獻的研究表明具有再生能力的干細胞存在于肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)(尤其中樞神經(jīng)系統(tǒng)如腦)、皮膚、脂肪組織、視網(wǎng)膜、角膜、骨骼肌甚至是心臟中(Garry DJ等人Ponce de Leon’ s iountain: stem cells and there generating heart.Am J Med Sc1. 329⑷190-201, 2005)。目前認(rèn)為內(nèi)在干細胞存在于所有器官和會IL 會只 43(ffeissman IL:Translating stem andprogenitor cell bilolgy to theclinic:Barriers and opportunities. Science. 287:1442-1446, 2000 ；Garry DJ 等人Ponce de Leon’ s fountain: stem cells and the regenerating heart. Am J MedSc1. 329 (4) : 190-201, 2005)。本領(lǐng)域技術(shù)人員基本可以觀察到，人體幾乎所有的器官或組織的小型傷ロ都能夠愈合，從這點也能基本判斷人體內(nèi)廣泛而均勻的分布著干細胞，這些干細胞隨時準(zhǔn)備修復(fù)周圍的傷ロ。當(dāng)然對于大型傷ロ(比如距離最短的傷ロ邊沿距離超過I厘米)，干細胞無法一次性完全修復(fù)，傷ロ愈合只能以部分疤痕代替(多次干細胞療法可以修復(fù)疤痕)。從下面的文獻已知內(nèi)在干細胞或/和血液來源或骨髄來源干細胞可分化成不同類型的組織細胞，細胞的分化類型取決于他們所在的不同誘導(dǎo)微環(huán)境(niche)條件。如不同類型的接觸細胞、細胞外基質(zhì)的內(nèi)容物、誘導(dǎo)微環(huán)境條件下所含的細胞因子和生長因子等。例如
( i)當(dāng)在神經(jīng)營養(yǎng)因子或者生長因子存在下培養(yǎng)神經(jīng)干細胞時，它們形成被稱為神經(jīng)球(neurosphere)的單個細胞來源的集落(即，自我復(fù)制(self-replication)),并且這些神經(jīng)球根據(jù)不同的誘導(dǎo)微環(huán)境分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞(即，多潛能性(multipotency))。此外，當(dāng)在體外傳代培養(yǎng)神經(jīng)球時,可以從神經(jīng)球來源的單個細胞形成另一個神經(jīng)球(Reynolds BA 和 Weiss S:Generation of neurons andastrocytesfrom isolated cells of the adult mammalian central nervous system.Science.255:1707-1710， 1992)；(ii)盡管當(dāng)從成年大鼠脊髄得到的神經(jīng)干細胞被移植到另一成年大鼠的脊髓中時，神經(jīng)干細胞只能分化成膠質(zhì)細胞，但他們被移植到海馬齒狀回時可分化成神經(jīng)兀(Shihabuddin LS 等人Adult spinal cord stem cellsgenerate neurons aftertransplantation in the adult dentate gyrus. TheJ Neuroscience. 20:8727-8735，2000)j(iii)將神經(jīng)干細胞與血管內(nèi)皮細胞一起培養(yǎng)時，可促進神經(jīng)干細胞的增值并分化成ネ申綜兀(Shen Q 等人Endothelial cells stimulate self-renewal and expandneurogenesis of neural stem cells.Science.304:1338-1440, 2004)；(iv)骨髓來源的間充質(zhì)干細胞(BM-MSCS)被注射在糖尿病小鼠的傷ロ周圍，BM-MSC能夠分化為表皮細胞、細胞角蛋白和腺體細胞，同時，促進血管新生增強毛細血管S 度(Yaojiong Wu 等人Mesenchymal Stem Cells Enhance WoundHealing ThroughDifferentiation and Angiogenesis. STEM CELLS. Volume25, Issue 10，26482659，October2007)。另ー方面，已知的以利用自身組織原有的干細胞再生的再生醫(yī)學(xué)為目的、用于增加內(nèi)在的干細胞，或/和血液來源或者骨髓來源干細胞的促進方法如下①對腦缺血模型 動物 給予EGF時，可促進神經(jīng)干細胞增殖，且梗塞區(qū)約 20% 的損失細胞得到再生( Teramoto T 等人EGF amplifies the replacementofparvalbumm-expressmg striatal interneurons after iscnemia.1he JClinical Investigation.1ll:1125-1132，2003);②當(dāng)對動脈硬化患者給予高血脂癥藥物斯達丁(Statin，3-羥基-3-甲基-戊ニ酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑)時，骨髓來源血液血管干細胞(hemangioblast)或內(nèi)皮袓細胞在血液中增加(Walter DH 等人Statintherapy accelerates reendothelialization: Anovel effect mvolvmgmobilization and incorporation of bone marrow-derIvedendothelial progenitor cells. Circulation. 105:3017-3024，2002);③除了上述EGF外，多種生長因子如VEGF、FGF (b-FGF)、PDGF. NGF和HGF，細胞因子如G-CSF、GM-CSF、促紅細胞生成素(EP0)，和其他生物活性物質(zhì)如雌激素和脂類等也被報道用于增加干細胞(Takeyama K，Ohto H:PBSCmobilization. TransfuseApherSCI 31:233-243，2004;Aicher A，Zeiher AM，Dimmeler S:Mobilizing endothelialprogenitor cells. Hypertension45:321-325, 2005)。然而，僅有兩、三種的上述物質(zhì)被開發(fā)成了藥物，如G-CSF和b-FGF。此外G-CSF具有致癌的危險，而b_FGF如在靜脈內(nèi)注射的過程中有血管閉塞這樣的副作用的危險。另外，考慮到歸因于生長因子靶向多種類型細胞而引起副作用的多祥性，VEGF和b-FGF作為具有靶向細胞類型少的生長因子被開發(fā)研究，但在臨床研究中還未有得到足夠的療效。此外，EPO具有包括血壓升高的副作用。公開號為CN101405021A的中國專利《神經(jīng)干細胞增殖試劑和神經(jīng)干細胞分化試劑的連續(xù)給藥方案》提到神經(jīng)干細胞增殖試劑例如hCG (人絨毛膜促性腺激素)、催乳素和EPO等在幾天內(nèi)以連續(xù)方式低劑量遞送給哺乳動物受試者的方法；④早期研究表明，在正常和再生骨髄侵出物中存在可溶性蛋白因子，他們可以或者抑制或者刺激干細胞增殖(綜述于=Lord和Wright,Blood Ce 11 s.6:581-593，1980;Wright 和 Lorimore, Cel I TissueKinet. 20:191-203，1987; Marshal I 和 Lord, Int Rev. Cyt. 167:185-261，1996)。但是，至今，尚未從按照Lord等所述制備的骨髄侵出物中純化候選出干細胞刺激劑；⑤公開號為CN101278045A的中國專利《干細胞和/或祖細胞的賦活劑》提到用類凝血酶(優(yōu)選為巴曲酶)作為原位組織干細胞或/和祖細胞的賦活劑，從實施例的表述中可以看出，巴曲酶對原位組織內(nèi)的干細胞有賦活作用。但是該發(fā)明僅限于細胞層面的賦活作用的公開，但缺乏理論依據(jù)，同時沒有看到有廣泛的疾病治療的臨床數(shù)據(jù)。顯然，臨床上需要能夠通過利用“原位組織再生”的方法，合理而方便的利用身體本身所具有的分布廣泛、遍布所有器官組織的干細胞，具體說就是能夠啟動這些干細胞增殖、遷移和分化的物質(zhì)，所述物質(zhì)具有很小或者無副作用，并且能夠根據(jù)該再生醫(yī)學(xué)所應(yīng)用的損傷器官或組織的進展?fàn)顟B(tài)及程度，快速并適度地發(fā)揮作用。干細胞在組織再生過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用易被本領(lǐng)域技術(shù)人員所公認(rèn)，除此之外，由干細胞主導(dǎo)的組織再生還具有免疫調(diào)節(jié)的作用，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員自然地推論出，利用干細胞能夠治療過敏反應(yīng)(Hypersensitivity)性疾病(包括過敏性疾病(Allergicdiseases)和自身免疫性疾病)。過敏反應(yīng)性疾病的發(fā)生機制十分復(fù)雜，臨床實踐所見往往為混合型，但以某一型為主，如I型和III型可以同 時出現(xiàn)，II型和III型也可同時出現(xiàn)，甚至I1、II1、IV型也可同時出現(xiàn)。過敏性疾病就是將外來抗原解讀為有害的物體(如細菌、病毒、花粉、灰塵等)而產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)，會使免疫細胞中的吞噬細胞開始活化，釋出組織胺與前列腺素，組織胺與前列腺素會出現(xiàn)微血管擴張、血管通透性増加、發(fā)癢、平滑肌收縮和反射作用等一連串的作用，小則皮膚出現(xiàn)紅斑麻疹，重則導(dǎo)致腫脹發(fā)熱等炎癥表征。過敏指的即是這些不正常的反應(yīng)，也叫I型過敏反應(yīng)(即Allergy)。I型過敏反應(yīng)往往不會發(fā)生組織或器官損傷，但是有些I型過敏反應(yīng)變化成慢性癥狀(即使進行脫敏治療也不改變癥狀)或者伴隨其他類型過敏反應(yīng)會造成組織或器官損傷，且不容易愈合。目前臨床上主要使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等藥物進行治療，如果該過敏反應(yīng)轉(zhuǎn)成慢性，一般的治療手段作用不大，需要更為有效的組織再生療法。自身免疫性疾病組織損傷大多由I1、II1、IV型過敏反應(yīng)所致自身抗體的作用；免疫復(fù)合物的作用；T細胞的作用；巨噬細胞、NK細胞的作用。自身免疫性疾病的共同特征存在自身抗體和(或)自身反應(yīng)性T細胞的量與嚴(yán)重程度平行；受累的范圍主要是自身抗體或致敏淋巴細胞所針對自身抗原分布部位；可被動轉(zhuǎn)移；多數(shù)自身免疫性疾病病因不明；病程遷延，發(fā)作和緩解交替；患者女性多見，發(fā)病率隨年齡增高，有遺傳傾向；疾病有重疊現(xiàn)象；用免疫抑制劑治療有一定的療效。
自身免疫性疾病指由錯誤指向機體健康細胞和/或組織的免疫細胞引起的任何疾病。自身免疫性疾病的特征為異常地靶向自身蛋白、自身多肽、自身肽和/或其他自身分子的T和B淋巴細胞造成體內(nèi)器官、組織或組織類型(例如，皮膚、胰腺、腦、甲狀腺或胃腸道)的損傷和/或機能失調(diào)，從而引起該疾病的臨床表現(xiàn)(Marrack et al. , Nat Med7，899-905，2001)。自身免疫性疾病包括影響特異組織和/或器官的疾病(器官特異性)和影響多組織和/或器官的疾病(非器官特異性疾病)。對于某些疾病而言，這可能部分取決于自身免疫反應(yīng)是指向局限于特定器官的抗原還是指向廣泛分布于機體的抗原。組織特異性自身免疫的表征為選擇性靶向單個組織或單一細胞類型。然而，靶向普遍存在的自身蛋白的某些自身免疫性疾病也能影響特異器官。例如，在多肌炎中，自身免疫反應(yīng)靶向廣泛存在的蛋白組氨酰基-tRNA合成酶，然而主要涉及的臨床表現(xiàn)為肌肉的自身免疫性破壞。機體免疫系統(tǒng)具有識別“自己”與“非己”抗原物質(zhì)的能力，在正常情況下，免疫系統(tǒng)對自身組織抗原不產(chǎn)生免疫應(yīng)答，或只產(chǎn)生極微弱的免疫應(yīng)答反應(yīng)，這種現(xiàn)象稱為自身耐受。自身耐受是由免疫系統(tǒng)通過多種機制主動調(diào)節(jié)來維持的，藉以保證自身組織細胞成分不致遭受免疫反應(yīng)的攻擊而造成損傷。在某些情況下，自身耐受性遭受破壞，免疫系統(tǒng)對自身組織成分產(chǎn)生了明顯的免疫應(yīng)答反應(yīng)，即在體內(nèi)產(chǎn)生了針對自身組織成分的抗體或致敏淋巴細胞，稱為自身免疫。自身耐受性遭受破壞的機制目前并不完全清楚，不過ー些比如病毒、細菌、毒素、某些化學(xué)物質(zhì)及藥物等外源性物質(zhì)引發(fā)具有遺傳傾向機體的免疫問題起到主要作用。自身免疫在許多情況下是屬于生理性的，因為在一定限度內(nèi)的自身免疫反應(yīng)有助于清除體內(nèi)衰老退變或畸變的自身細胞成分，并且對免疫應(yīng)答反應(yīng)起著調(diào)節(jié)作用。只是在自身免疫反應(yīng)超越了生理的限度或持續(xù)時間過久，才會造成自身組織損傷和相應(yīng)的功能障礙，導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。目前，自身免疫病的常用治療方法是利用糖皮質(zhì)激素或使用免疫抑制藥物來緩解因免疫系統(tǒng)攻擊組織所造成的炎癥反應(yīng)和抑制免疫系統(tǒng)的作用。然而，這些方法都會造成嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如出現(xiàn)嚴(yán)重的感染、骨髄抑制等，而且這些治療方法只能減緩病情的發(fā)展，而非根治疾病。1996年意大利Marmont首先報道用自體骨髄移植(ABMT)治療重癥紅斑狼瘡取得成功后，掀起世界多國應(yīng)用干細胞治療自身免疫病的研究熱潮，各種干細胞治療自身免疫病迅速開展起來。比如利用胎盤干細胞治療自身免疫性疾病(中國專利，公開號CN101657206A);利用人體脂肪來源的干細胞治療I型糖尿病(Vikash Chandra等人丄sIet-Like しel I Aggregates beneratedfrom Human Adipose Tissue Derived StemCells Ameliorate ExperimentalDiabetes in Mice. PLoS One. 2011;6(6):e20615. Epub2011Jun 7.);利用神經(jīng)袓細胞 治療免疫性疾病(Wei Cao等人！Leukemia InhibitoryFactorInhibits T Helper 17 Cell Differentiation and Confers TreatmentEffectsof Neural Progenitor Cell Therapy in AutoimmuneDiseasej Immunity, Volume35, Issue 2，273-284，11 August 2011);在腸道內(nèi)利用腸道袓細胞生成胰島素分泌細胞治療 I 型糖尿病(ChutimaTalchai 等人 -Generation of functional insulin-producingcells in thegut by Foxol ablation. Nature Genetics. 44，406 412 (2012));利用胳帶血干細胞治療 I 型糖尿病(Yong Zhao, Zhaoshun Jiang, Tingbao Zhao, MingliangYej Chengjin Huj Zhaohui Yin, et al :‘‘Reversal of type !diabetes via isletbeta cell regeneration following immune modulationby cord blood-derivedmultipotent stem cells. ”BMC Medicine 2012，10:3，10 January 2012.);通過靜脈注射骨髓間質(zhì)干細胞治療自身免疫性重癥肌無カ(Yu, J等人Intravenous Administrationof Bone MarrowMesencnymai Stem Cells Benefits Experimental AutoimmuneMyastheniaGravis Mice Through an ImmunomodulatoryAction,Scandinavian JournalofImmunology, 2010; 72 (3) :242);利用血源性的干細胞治療老年動物的多發(fā)硬化癥(JuliaM. RucKh 等人Rejuvenation of Regeneration in theAging Central Nervous System,Cell Stem Cell, Volume 10，Issue 1，96-103，6 January 2012);用骨髓間充質(zhì)干細胞治療系統(tǒng)性硬化癥，并探索干細胞的免疫調(diào)節(jié)機制(Kentaro Akiyama等人Mesenchymal_Stem-CeI1-1naucedImmunoreguIationInvolvesFAS-Ligand-/FAS-MediatedTCeIlApoptosis,Cell Stem Cell, Volume 10，Issue 5,544-555, 26 April 2012)。通過干細胞治療自身免疫性疾病主要利用了干細胞的兩個作用免疫調(diào)節(jié)作用和組織再生作用。就干細胞免疫調(diào)節(jié)作用來說，有研究指出，間充質(zhì)干細胞(MesenchymalStromal Cell)具有抑制T細胞與B細胞的增殖以實現(xiàn)調(diào)控機體自身免疫反應(yīng)的臨床效果，而這種免疫調(diào)節(jié)作用不似臨床中常用免疫抑制劑的單分子調(diào)控，MSCs是通過多分子參與、多途徑調(diào)控及其旁分泌作用實現(xiàn)，并且其免疫調(diào)節(jié)作用是與機體炎癥的微環(huán)境相互彳乍 M(Pittenger, M. F. , Martin, B. J. Mesenchymal stem cells and their potentialascardiac therapeutics. Circ. Res.，2004，95，9-20)。另外，干細胞發(fā)動的組織再生具有天然的免疫調(diào)節(jié)能力(因為機體免疫系統(tǒng)識別新組織為“自己”)。當(dāng)然，目前通過干細胞治療自身免疫性疾病的方式依然還是通過干細胞移植的方式，沒有利用原位組織中的干細胞。 ニ氧化氯是目前國際上公認(rèn)的新一代的高效、廣譜、安全的殺菌、保鮮劑，是氯制劑最理想的替代品，在世界發(fā)達國家已得到廣泛的應(yīng)用。美國、西歐、加拿大、日本等發(fā)達國家的有關(guān)組織如美國環(huán)境保護局、食品藥品管理局、美國農(nóng)業(yè)部均批準(zhǔn)和推薦ニ氧化氯用于食品、食品加工、制藥、醫(yī)院、公共環(huán)境等的消毒、防霉和食品的防腐保鮮等。世界衛(wèi)生組織(WHO)和世界糧食組織(FAO)也已將ニ氧化氯列為Al級安全高效消毒剤。為控制飲水中“三致物質(zhì)”(致癌、致畸、致突變)的產(chǎn)生，歐美發(fā)達國家已廣泛應(yīng)用ニ氧化氯替代氯氣進行飲用水的消毒。但ニ氧化氯作為藥品還未被市場所接受。然而，有部分專利涉及到利用ニ氧化氯治療部分疾病的用途(例如，CN102137651A、CN101641104A和CN1199633C)，這些專利仍然僅是利用ニ氧化氯的強氧化能力和殺滅皮膚病原微生物的抗感染能力。專利號為US5750108提到ニ氧化氯能夠刺激毛囊發(fā)育新發(fā),但是由于濃度較低,未發(fā)揮ニ氧化氯的最大能力，因此未見明顯生發(fā)效果；公開號為CN102441006A的專利提供了ー種包含ニ氧化氯的外用生發(fā)溶液，能夠短期內(nèi)刺激脫發(fā)區(qū)域長出新發(fā)，并提供了可治愈的案例，但是該專利仍然沒有發(fā)現(xiàn)ニ氧化氯潛在的啟動干細胞的作用機理。

發(fā)明內(nèi)容
在對現(xiàn)有技術(shù)研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明的ー個目的是提供一種啟動哺乳動物體內(nèi)干細胞増殖、遷移和分化的方法，采用該方法能快速、且適度地啟動干細胞的増殖、遷移和分化，并且該方法副作用很小或者無副作用，井能持續(xù)地發(fā)揮啟動干細胞増殖、遷移和分化的作用。本發(fā)明的另ー個目的是提供ニ氧化氯在制備用于啟動干細胞増殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用。根據(jù)該應(yīng)用，用于啟動干細胞増殖、遷移和分化的藥物中有含ニ氧化氯的干細胞啟動劑，該藥物能夠啟動患者體內(nèi)本來存在的干細胞的増殖、遷移和分化，能快速而適度地發(fā)揮作用，井能持續(xù)起到促進作用，且具有很小的副作用或者無副作用，對患者的負擔(dān)較輕。為達到以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種啟動哺乳動物干細胞増殖、遷移和分化的方法，該方法包括制備含ニ氧化氯的干細胞啟動劑以及對哺乳動物目標(biāo)組織給予所述干細胞啟動劑的步驟，其中所述干細胞啟動劑被給予哺乳動物目標(biāo)組織時提供有效
量的ニ氧化氯。進ー步，制備含ニ氧化氯的干細胞啟動劑的方法為將ニ氧化氯氣體溶于含酸性pH調(diào)節(jié)劑的pH值為1. 5 6. 5的酸性溶液A中，制備500 2900ppm的ニ氧化氯溶液。進ー步，制備含ニ氧化氯的干細胞啟動劑的方法為將ニ氧化氯前體溶解于水中制備成1% 40%的水溶液，向該水溶液中加入含有酸性pH調(diào)節(jié)劑的酸性溶液B，調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為1. 5 6. 5。進ー步，制備含ニ氧化氯的干細胞啟動劑的方法為將ニ氧化氯前體溶解于水中，制成濃度為1% 40%的水溶液C ;將酸性pH調(diào)節(jié)劑溶于水中制備出酸性溶液D ;使用前混合溶液C、D，調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為1. 5 6. 5。再進ー步，ニ氧化氯前體為亞氯酸鈉、亞氯酸鉀、亞氯酸鋰、亞氯酸鈣、亞氯酸鎂和亞氯酸鋇。再進一歩，酸性pH調(diào)節(jié)劑為檸檬酸、こ酸或磷酸ニ氫鈉。
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進一歩，干細胞啟動劑通過動脈注射、肌肉注射、皮下注射、心內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、穿刺注射、直腸給藥、鼻腔給藥、經(jīng)皮給藥或吸入給藥的方式直接給到損傷的器官或組織中。進ー步，干細胞啟動劑制成注射劑、軟膏劑、吸入劑、滴鼻劑、洗劑、栓劑、貼劑、糊齊U、片劑、ロ服液、膠囊劑、顆粒劑、沖劑、丸劑或糖漿劑。本發(fā)明提供了ニ氧化氯在制備用于啟動干細胞増殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其中，該藥物用于治療通過啟動干細胞増殖、遷移和分化的再生醫(yī)學(xué)所治療的疾病。進ー步，該藥物包含上述啟動哺乳動物干細胞増殖、遷移和分化的方法中所采用的干細胞啟動劑。進ー步，所述干細胞為應(yīng)用于利用原位組織再生的再生醫(yī)學(xué)中的細胞。再進ー步，該再生醫(yī)學(xué)是關(guān)于皮膚疾病、運動系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌疾病、呼吸疾病、泌尿科疾病、腸胃疾病、眼科疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、血管疾病治療時的損傷組織再生。更進一歩，皮膚疾病包括燒傷、皮膚潰瘍、褥瘡、干皮病、糖尿病性皮膚潰瘍、雄激素脫發(fā)、甲溝炎、胃腸黏膜糜爛、消化性潰瘍、角膜潰瘍、牙髓炎、復(fù)發(fā)性□瘡、口腔黏膜潰瘍；所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括中風(fēng)、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、脊髄炎、多發(fā)性外周神經(jīng)病、聽カ神經(jīng)損傷；所述心血管疾病包括心肌梗死、心絞痛、病毒性心肌炎、動脈粥樣硬化、瓣膜性心臟病、感染性心內(nèi)膜炎、心包炎；所述腸胃疾病包括慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、闌尾炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腸結(jié)核、病毒性肝炎、酒精性肝炎、胰腺炎；所述呼吸疾病包括細菌性支氣管炎、感染性肺炎、吸入性肺炎；所述泌尿科疾病包括膀胱炎、慢性腎炎綜合癥、原發(fā)性腎小球疾病、腎上腺炎、尿道炎、細菌和非細菌前列腺炎；所述運動系統(tǒng)疾病包括關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)外科顱骨切除術(shù)后的骨缺損、整形外科腫瘤切除術(shù)后的骨缺損、骨折后的骨缺損、軟骨炎、各種關(guān)節(jié)的軟骨缺損；所述血管疾病包括閉塞性動脈硬化、閉塞性血栓性動脈炎、血栓性靜脈炎、血栓形成、深部靜脈血栓形成、突發(fā)性聾、糖尿病周圍神經(jīng)病變；所述內(nèi)分泌疾病包括II型糖尿病和糖尿病性足；所述眼科疾病包括角膜炎、視網(wǎng)膜黃斑病變、青光眼、干眼癥、糖尿病性視網(wǎng)膜炎。進ー步，該再生醫(yī)學(xué)是關(guān)于美容整形中的組織再生、外科手術(shù)或意外組織損傷的傷ロ愈合、各種原因?qū)е碌难装Y性組織的再生、以及各種癌癥中的損傷組織的再生。進ー步，所述用于啟動干細胞増殖、遷移和分化的藥物應(yīng)用于利用干細胞的組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力治療的疾病。再進ー步，利用干細胞組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力治療的疾病為I型過敏反應(yīng)疾病和自身免疫性疾病。更進一歩，其中所述I型過敏反應(yīng)疾病包括過敏性鼻炎、過敏性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、過敏性外源性哮喘、風(fēng)疹 ；所述自身免疫性疾病包括血小板減少性紫癜、白血球減少癥、天皰疹、類天皰疹、Graves病、重癥肌無カ、蕁麻疹性血管炎、全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；多動脈炎、接觸性皮炎、盤狀紅斑狼瘡、脈管炎、I型糖尿病、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、硬皮病、腦脊髄炎、斑禿、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、強直性脊柱炎、自身免疫性蕁麻疹、大皰性類天皰瘡、慢性阻塞性肺病、瘢痕性類天皰瘡、皰疹性皮炎、皮肌炎、彌漫性皮膚系統(tǒng)性硬化癥、濕疹、過敏性紫癜、特發(fā)性炎性脫髓鞘疾病、神經(jīng)性皮炎、硬化性苔蘚、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、硬皮病、復(fù)發(fā)性風(fēng)濕病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、風(fēng)濕性多肌痛、干燥綜合征、白癜風(fēng)。進ー步,在治療上述疾病的過程中，ニ氧化氯用于清創(chuàng)和抗感染。本發(fā)明提供了ニ氧化氯的新用途，包括兩個方面一方面，本發(fā)明提供了ー種利用含ニ氧化氯的干細胞啟動劑啟動哺乳動物體內(nèi)干細胞的増殖、遷移和分化的方法，以及對哺乳動物目標(biāo)組織給予所述干細胞啟動劑的步驟；另ー方面，提供了ニ氧化氯在制備用于啟動干細胞増殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑能夠啟動干細胞的増殖、遷移和分化。因此本發(fā)明可以有利地用于再生醫(yī)學(xué)、特別是利用原位組織中的干細胞的再生醫(yī)學(xué)中。由于使用本發(fā)明中含ニ氧化氯的干細胞啟動劑進行的、利用原位組織中的干細胞的再生醫(yī)學(xué)是使用患者身體內(nèi)本來存在的干細胞，所以不需要從患者身體外部導(dǎo)入細胞。因此，不需要有對身體外部細胞的分離、培養(yǎng)等復(fù)雜過程，對患者的負擔(dān)較輕并且諸如細胞移植期間的感染的危險也不存在，結(jié)果使利用原位組織中的干細胞的再生醫(yī)學(xué)優(yōu)于從患者身體外部導(dǎo)入細胞的再生醫(yī)學(xué)。并且不涉及到醫(yī)學(xué)倫理問題。此外，在使用本發(fā)明中含ニ氧化氯的干細胞啟動劑進行的利用原位組織再生的再生醫(yī)學(xué)中，干細胞的啟動特異地發(fā)生于患者的患病部位(即損傷的器官和/或組織)中，并且該組織再生僅取決于所要求的程度而發(fā)生。因此，利用原位組織再生的再生醫(yī)學(xué)不會發(fā)生由患者身體外部導(dǎo)入細胞那樣的、傳統(tǒng)的再生醫(yī)學(xué)主流方法的細胞移植的過多再生和/或過度修復(fù)、或由于免疫排斥而引起的并發(fā)癥危險。再者，本發(fā)明中，含ニ氧化氯的干細胞啟動劑具有很小的副作用或者無副作用，能夠根據(jù)再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用的損傷器官和/或損傷組織的進展?fàn)顟B(tài)及程度，快速而適度地發(fā)揮作用，并且具有持續(xù)的干細胞増殖、遷移和分化的促進作用。因此，可以有利地用于再生醫(yī)學(xué)。所以，本發(fā)明能夠用于再生醫(yī)學(xué)、特別是利用原位組織再生的再生醫(yī)學(xué)中，具有高度的適用性。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進ー步描述。在描述本發(fā)明的具體實施方式
之前，首先對本發(fā)明所提供方法的機理進行描述。一份編號為NCT01341041的美國臨床試驗報告(《Chlorine DioxideVersusSaline for Wound Irrigation》,報告單位為Rhode Island Hospital)顯不，相對于生理鹽水，ニ氧化氯對于一般傷ロ有如下的作用加速傷ロ愈合，減少疤痕形成。在動物身體試驗方面，有報道認(rèn)為ニ氧化氯對于傷ロ有快速止血、加速傷ロ愈合的療效(金偉等，ニ氧化氯緩釋凝膠促進家兔創(chuàng)面愈合效果的試驗研究，《山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2011年42卷07期)。因此，可以肯定的是，傷ロ愈合是由干細胞發(fā)動的，如果組織丟失了干細胞，該組織的任何傷ロ都不可能愈合。正常的情況下，不需要任何的藥物刺激，人體組織的傷ロ將能得到正常的愈合，根本原因是該組織上的傷ロ附近存在干細胞，干細胞將通過增值、遷移和分化長出完整的新組織。一旦干細胞的數(shù)量或者分化能力不足就會導(dǎo)致傷ロ愈合過程中產(chǎn)生疤痕或者傷ロ較長時間不能愈合。比如，I度燒傷可以自然愈合不留疤痕；II度燒傷疤痕愈合；111度燒傷不能自然愈合。

成人干細胞(ASCs)被認(rèn)為是傷ロ愈合過程中新的組織的來源，包括皮膚傷ロ愈合、肝再生、肺再生、腎功能修復(fù)、角膜上皮愈合、神經(jīng)再生、心肌病和缺血性腦損傷組織的修復(fù)都是由原位組織中的干細胞増殖、遷移和分化來完成的。骨髄間充質(zhì)干細胞(BM-MSC)已被證明參與傷ロ愈合的各個階段(Katherine Lau等人，Exploring the role of stemcells in cutaneouswound healing， Experimental Dermatology, Volume 18，Issue11，pages921 - 933，November 2009)。本發(fā)明人也發(fā)現(xiàn)ニ氧化氯溶液對于皮膚傷ロ具有明顯的加速愈合能力，并且很少留有疤痕，比如較大炎癥性傷ロ愈合和糖尿病足的傷ロ愈合。人體組織有損傷后,會產(chǎn)生自適應(yīng)性疼痛(Adaptive pain),包括傷害性疼痛和炎癥性疼痛(Inflammatory pain)。傷害性疼痛(Nociceptive pain)具有保護機體免受外界的更為嚴(yán)重的傷害，起到保護機體的作用(Clifford J. Woolf, What is this thingcalled pain J Clin Invest. 2010 Novemberl; 120 (11) : 3742 - 3744);炎癥性疼痛扮演了促進損傷組織愈合的角色(Clifford J. Wool, Pain:Moving from Symptom Control towardMechanism-SpecificPharmacologic Management,Annals of InternalMedicine (2004),Volume: 140, Issue: 6，Pages: 441-451 )。因此疼痛對于組織損傷的修復(fù)是有好處的，而且應(yīng)該也是通過各種刺激因子促使干細胞分化以再生的方式應(yīng)對組織損傷。本發(fā)明人也發(fā)現(xiàn)ニ氧化氯溶液施用于器官組織上，具有對其產(chǎn)生微型傷ロ的作用，并且會引起短時間的疼痛感覺。本發(fā)明人認(rèn)為產(chǎn)生微型傷ロ，一方面具有清創(chuàng)作用，清除壞死組織；另一方面起到誘導(dǎo)干細胞發(fā)動的組織再生作用，而疼痛的刺激促進了這一作用。在觀察毛囊細胞再生的過程中，發(fā)現(xiàn)在一定程度上，皮膚傷ロ的恢復(fù)伴隨著干細胞以一種比較初期的模式分化，有如再生的組織更為年輕。(Katherine Lau等人！Exploring the role of stem cells in cutaneouswound healing, Experimenta丄Dermatology, Volume 18，Issue 11, pages921 - 933, November 2009)。在對于小鼠的研究中，人為的傷ロ愈合過程產(chǎn)生新的毛囊干細胞群落并且能產(chǎn)生新的毛發(fā)，同時毛囊干細胞和表皮干細胞都參與傷ロ愈合過程中的細胞(包括毛囊細胞、皮脂腺細胞等)的形成，其中有干細胞増殖、遷移和分化的過程，這其中wnt信號起到了主要作用(ItoM，等人ffnt-dependent de novo hair iollicle regeneration in adult mouseskm afterwounding. Nature. 2007May 17;447 (7142):316-20)。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)合適濃度的ニ氧化氯溶液用于脫發(fā)區(qū)域，具有如下的現(xiàn)象每天外涂ニ氧化氯溶液，第3 5天左右時間，在抹藥區(qū)域有傷ロ狀的紅斑出現(xiàn)，在仍然有頭發(fā)的脫發(fā)區(qū)域長出新頭發(fā)，而在20天左右時間，在全光的脫發(fā)區(qū)域有新頭發(fā)出現(xiàn)。唯有干細胞的再生組織能力可以解釋這ー現(xiàn)象?！ぬ旱膫硌杆儆锨覠o疤痕，而成年人傷ロ愈合難度隨著年齡而增加，這可能代表了干細胞的功能狀態(tài)的變化(Cecilia Roh等人Cutaneous StemCells and WoundHealing, Pediatric Research (2006). 59, 100R-103R)。這同時也說明干細胞再生能力有衰老的可能。干細胞的“微環(huán)境”(niche)在衰老導(dǎo)致的干細胞喪失中充當(dāng)關(guān)鍵角色，干細胞定位在其他細胞的微環(huán)境中，眾所周知微環(huán)境對于干細胞的功能起重要作用。在對果蠅生殖干細胞自我更新的分子機制的研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)隨著干細胞微環(huán)境變化，細胞生成了ー種在RNA翻譯成蛋白質(zhì)中起負性調(diào)控作用的mRNA分子let_7，let-7表達增高將會減少微環(huán)境中的活性干細胞數(shù)目(Hila Toledano等人，Thelet-7 -1mp axis regulatesageing of the Drosophila testis stem-cellniche, Nature(2012), Published online23May 2012)。可見，至少在一定程度上，干細胞再生能力的衰老，表現(xiàn)在干細胞數(shù)量的減少，而其中微環(huán)境所傳達的信號起著至關(guān)重要的作用。本發(fā)明人也發(fā)現(xiàn)，同樣的傷ロ(面積和深度相同)，都用ニ氧化氯溶液處理，60歲以上的人的愈合能力要顯著低于30歲以下的人。說明ニ氧化氯對干細胞的作用與上述理論預(yù)測的結(jié)果基本一致。根據(jù)以上理論及實踐的觀察，從傷ロ愈合的角度判斷，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)ニ氧化氯溶液對組織修復(fù)具有明顯的促進作用，并且可以看出，新生的組織更為年輕化。ニ氧化氯得到5個電子的氧化還原電位為1. 5，超過氧氣的1. 2，由于獲得電子能力強，屬于強氧化劑。本發(fā)明人認(rèn)為ニ氧化氯能夠促進哺乳動物體內(nèi)干細胞増殖、遷移和分化依賴兩個路徑ニ氧化氯依靠強氧化能力將破壞普通細胞，類似能夠在組織上造成傷ロ或者清除壞死組織，并產(chǎn)生疼痛，身體將會自動啟動干細胞對傷ロ進行愈合；ニ氧化氯是ー種可以溶于水的氣體，和一氧化氮(NO)和硫化氫(H2S) —祥，ニ氧化氯可以作為信號分子，當(dāng)進入或滲入機體組織后，發(fā)揮氣體信號分子的特殊能力，啟動干細胞進行増殖、遷移和分化來完成組織再生。
較多研究支持一氧化氮能夠促進傷ロ愈合(MajidaRizk等人，NitricOxide andWound Healing. World Journal of Surgery. Volume 28,Number3(2004), 301-306,),特別是類似糖尿病患者的慢性傷ロ愈合(M. B. Witte等人，Nitric oxide enhancesexperimental wound healing mdiabetes.British Journal of burgery. Volume89, Issue 12，pagesl594 - 1601, December 2002)。一氧化氮在酸性條件下得到兩個電子的氧化還原電位為1. 6，和ニ氧化氯接近，而且兩者均溶于水(前者微溶)。本發(fā)明人猜想，區(qū)別于ー氧化氮這類內(nèi)源性的信號分子，ニ氧化氯可以作為外源性的信號分子作用于身體，并且可以作為原位組織再生中的干細胞啟動劑。本發(fā)明人猜想，本發(fā)明中的含ニ氧化氯的制劑以合適的方式用于人體原位組織再生，其作用機理包括如下幾個方面第一、本發(fā)明中的含ニ氧化氯制劑可以清除損傷組織中的壞死部分，為干細胞發(fā)動并完成組織修復(fù)提供了空間，同時由于存在著豐富的空間和組織特異性暗示，也刺激了身體自動修復(fù)損傷組織。另外，如公開號為CN101641104A的中國專利《感染性皮膚和黏膜疾病治療藥》利用ニ氧化氯具備的廣譜的病原性微生物殺滅作用，用于部分致病微生物引起的皮膚病治療，本發(fā)明中的ニ氧化氯制劑可以高效的殺滅病原微生物，具備清創(chuàng)、防止感染、清除過敏原等外源性物質(zhì)(本身確是為、和/或被免疫系統(tǒng)視為)的作用。第二、本發(fā)明中的含ニ氧化氯制劑可以在損傷組織中產(chǎn)生分布均勻的微型傷ロ，并且引起疼痛刺激身體發(fā)動各種因子和細胞修復(fù)傷ロ，并且是以比較初期的模式進行修復(fù)，使修復(fù)的組織能恢復(fù)如新，并更為年輕化，包括恢復(fù)被免疫系統(tǒng)識別為“自己”的新組織，即具備免疫調(diào)節(jié)能力；第三、本發(fā)明中的含ニ氧化氯制劑，其中的ニ氧化氯作為外源性的氣體信號分子，提高干細胞的活性，通過啟動干細胞增值、遷移和分化的方式，促進對損傷組織的修復(fù)エ作。除了啟動干細胞發(fā)動組織再生，ニ氧化氯作為氣體信號分子還具備直接或通過干細胞而間接發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。其中二氧化氯制劑所起的作用應(yīng)該是復(fù)雜而綜合的。本發(fā)明是基于以上的研究結(jié)果，因此本發(fā)明中的含ニ氧化氯制劑作為干細胞啟動劑不僅可以利用干細胞發(fā)動的組織再生能力治療疾病，而且可以利用干細胞組織再生過程伴隨的免疫調(diào)節(jié)能力治療疾病，同時利用了ニ氧化氯清除壞死組織起到的清創(chuàng)作用和殺滅病原微生物的抗感染作用。學(xué)術(shù)研究也明確了ニ氧化氯可以安全的用于人體，其中，施來順和謝朝仁(《穩(wěn)定性ニ氧化氯的急性毒性及刺激性試驗觀察》，《中國消毒學(xué)雜志》，1999年16卷01期)得出的試驗結(jié)論穩(wěn)定性ニ氧化氯對小鼠經(jīng)ロ LD50 > 10000mg/kg,屬實際無毒物質(zhì)。其含ニ氧化氯9. 7 11. 4mg/L對皮膚和眼睛黏膜48h刺激積分為0，屬無刺激性物質(zhì)。黃君禮等(《水中二氧化氯及副產(chǎn)物亞氯酸鹽和氯酸鹽一般毒性研究》，《化工標(biāo)準(zhǔn).計量.質(zhì)量》2001年03期)得出的試驗結(jié)論276. 5mg/L的ClO2水溶液，200mg/L的NaClO2和NaClO3水溶液以及總濃度為553mg/L的ClO2混合水溶液均為實際無毒水溶液；276. 5mg/L的C102、200mg/L的NaClO2和NaClO3水溶液也是 無明顯蓄積性毒性的水溶液；C102混合液對大鼠體重增長和食物利用率沒有產(chǎn)生顯著性影響(P〈0. 05);對大鼠血液學(xué)指標(biāo)，如白細胞計數(shù)(WBC)、血紅蛋白(Hb)均未產(chǎn)生影響(p〈0. 05);對谷-丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和球蛋白(GLO)的檢測表明，其對照組和高劑量組雌雄相比無顯著性差異(p〈0. 05);各試驗組和對照組的大鼠肝體比(％)和腎體比(％)經(jīng)方差分析，各組之間均無明顯差別(P〈0. 05);病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，各試驗組和對照組其肝、腎組織均未見病變。盡管本發(fā)明中的目標(biāo)干細胞的定義在相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域中還沒有完全標(biāo)準(zhǔn)化，但是在本說明書中根據(jù)已獲得共識的概念，將干細胞以下面的形式進行定義。干細胞是具有自我復(fù)制(或更新)能力(self-replication)和分化為多種細胞的多潛能性(multipotency)的未分化細胞。干細胞的具體實例包括胚胎干細胞(ES細胞)、胚胎生埴細胞(EG細胞)、成體干細胞、血液血管干細胞(hemangioblast)、神經(jīng)干細胞、造血干細胞、間充質(zhì)干細胞和其他細胞的干細胞(包括骨細胞、軟骨細胞、肌細胞、心急細胞、ネ申經(jīng)元、腱細胞、脂肪細胞、胰腺細胞(pancreocyte)、肝細胞、腎元細胞和毛囊細胞等)。本發(fā)明中的干細胞啟動劑，其中的分化啟動階段包含由干細胞向下分化至終末期分化細胞的整個過程，即包括了干細胞分化為祖細胞(祖細胞被定義為干細胞的子代細胞，其分化潛能或自我復(fù)制能力或二者均更加受限)，也包括祖細胞分化為已分化細胞，再到終末期分化細胞的整個過程，或者其中的某ー階段。整個階段代表了干細胞修復(fù)損傷組織的ー個通用模式。干細胞在機體內(nèi)，主導(dǎo)著對于組織的維護(maintenance)和修復(fù)(repair)的功能，為了完成這樣的功能，其生命周期內(nèi)運轉(zhuǎn)模式可分為增殖(Proliferation)、遷移(migration)和分化(differentiation)。為了維持機體的正常組織功能,干細胞自我更新和克隆行為的模式相應(yīng)的表現(xiàn)為三種對稱分裂，干細胞實現(xiàn)増殖；相鄰組織中的干細胞對稱分裂并遷移；不對稱分裂，干細胞自我更新并且向子代細胞分化(Allon M-Klei等人！Universal patterns of s tem cell late in cycling adult tissues, Development,August 1，2011，138，3103-3111)。本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑，其中“啟動”包含了啟動干細胞増殖、遷移和分化等一套維護和修復(fù)組織的整個過程，并且不局限于其中某一具體過程。研究表明，已經(jīng)分化了的細胞或者組織特異性干細胞(tissue-specificstem cell)能夠改變其原有表型，顯現(xiàn)出其他組織細胞的功能特征，這就是轉(zhuǎn)分化。本發(fā)明將干細胞的轉(zhuǎn)分化定義為組織特異性干細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌V系的細胞。如果某ー組織特異性干細胞已經(jīng)失去了再生該組織的能力，那么要想再生該組織就需要臨近的干細胞的轉(zhuǎn)分化。機體組織內(nèi)，存在著少量的干細胞轉(zhuǎn)分化現(xiàn)象，本發(fā)明將該轉(zhuǎn)分化定義包括在干細胞分化的定義之中。存在于成人身體中的干細胞可以根據(jù)他們的起源和位置分成內(nèi)在干細胞、血液來源干細胞和骨髄來源干細胞。將內(nèi)在干細胞定義為本來存在于特定器官或組織中的具有自我復(fù)制能力和多潛能性的細胞，所述器官或組織受到損傷的情況下，所述細胞有助于該器官或組織的再生。這些內(nèi)在的干細胞的具體實例包括角膜干細胞、心臟干細胞、神經(jīng)干細胞、血管EPC等。從之前的描述中，本領(lǐng)域技術(shù)人員亦可以輕易了解到，在人體，幾乎所有的器官或組織內(nèi)均廣泛分布著內(nèi)在干細胞，并且可以用于原位組織再生。將血液來源的干細胞定義為存在于循環(huán)血液中的具有自我復(fù)制能力和多潛能性的細胞。在器官或組織受到損傷的情況下，所述細胞通過遷移并蓄積在所述器官或組織中，從而有助于該器官或組織的再生。在這種情況下的血液包括外周血液、胎盤血液、動脈血液、靜脈血液、來自心臟的血液或者來自眼底的血液。血液來源干細胞的具體實例包括血管EPC、間充質(zhì)干細胞等。
將骨髓來源干細胞定義為本來存在于骨髓中的具有自我復(fù)制能力和多潛能性的細胞，在所述器官或組織受到損傷的情況下，所述細胞通過經(jīng)由血液循環(huán)遷移并蓄積到所述器官或組織中，從而有助于該器官或組織的再生。骨髄來源干細胞的具體事例包括血管EPC、間充質(zhì)干細胞等。本發(fā)明中的干細胞啟動劑能夠啟動這些內(nèi)在干細胞、血液來源干細胞和骨髄來源干細胞的每ー種的増殖、遷移和分化。此外，干細胞可以分成活化狀態(tài)細胞(處在該狀態(tài)的細胞正在進行増殖、遷移和分化)和非活化狀態(tài)細胞(處在該狀態(tài)的細胞不在進行増殖、遷移和分化)。但本發(fā)明中的干細胞啟動劑能夠促進活化狀態(tài)和非活化狀態(tài)的干細胞進行増殖、遷移和分化。本發(fā)明中的干細胞啟動劑能夠促進干細胞對損傷組織進行修復(fù)，并實現(xiàn)再生。這里，將“啟動”定義為下面所指的三種作用(a)啟動(initiate)或動員(activate)干細胞進行增埴。(b)啟動(initiate)或動員(activate)干細胞進行遷移。將遷移定義為干細胞從骨髓、器官或組織移動到循環(huán)血液中；從循環(huán)血液積蓄到損傷的器官或組織中；或者在器官或組織內(nèi)部移動。(C)啟動(initiate)或動員(activate)干細胞的分化,包括轉(zhuǎn)分化。

本發(fā)明所述的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑可以單獨包含ニ氧化氯的單ー劑型或者包含ニ氧化氯前體的若干份組合。其中単獨包含ニ氧化氯的單ー劑型可以如下地制成方法1:向水中添加PH調(diào)節(jié)劑，制成PH值為1. 5 6. 5的酸性水溶液。通過合乎規(guī)范，并且濃度在99. 9%以上ニ氧化氯氣體的制備方式(優(yōu)選為亞氯酸鹽與酸反應(yīng))產(chǎn)生ニ氧化氯氣體。通過將該ニ氧化氯氣體向上述酸性水溶液中鼓泡并溶解從而制備500 2900ppm的ニ氧化氯溶液。該溶液在使用于本發(fā)明所述疾病治療之前，應(yīng)當(dāng)避光密閉保存，并一直保存于4°C 15°C較低溫狀態(tài)下。該制備含ニ氧化氯制劑的方法并不要求一定是水溶液，唯有保證在施用于目標(biāo)組織時能夠在目標(biāo)組織中發(fā)揮作用的物質(zhì)主要為ニ氧化氯。方法2 :將ニ氧化氯前體溶解于水中制備1% 40%的水溶液。向該水溶液中加入含有PH調(diào)節(jié)劑的酸性溶液(優(yōu)選為2% 50%的檸檬酸溶液)，調(diào)節(jié)混合溶液的PH值為1. 5 6.5。該溶液在使用于本發(fā)明所述疾病治療之前，應(yīng)當(dāng)避光密閉保存，并一直保存于4°C 15°C較低溫狀態(tài)下。該制備含ニ氧化氯制劑的方法并不要求一定是水溶液，唯有保證在施用于目標(biāo)組織時能夠在目標(biāo)組織中發(fā)揮作用的物質(zhì)主要為ニ氧化氯。包含ニ氧化氯前體的若干份組合可以如下地制成將ニ氧化氯前體溶解于水中制備1% 40%的水溶液，這是第一份溶液；用PH調(diào)節(jié)劑制備出酸性溶液(優(yōu)選為2% 50%的檸檬酸溶液)，這是第二份溶液。在使用于本發(fā)明所述疾病治療之前，現(xiàn)場混合以上溶液，最終混合溶液的PH值調(diào)整為1. 5 6. 5，待反應(yīng)產(chǎn)生ニ氧化氯后，將該溶液施用于目標(biāo)組織。該制備含ニ氧化氯制劑的方法并不要求一定是水溶液，唯有保證在施用于目標(biāo)組織時能夠在目標(biāo)組織中發(fā)揮作用的物質(zhì)主要為ニ氧化氯。作為能在本發(fā)明中使用的ニ氧化氯前體，可以舉出例如亞氯酸堿金屬鹽、亞氯酸堿土類金屬鹽。作為亞氯酸堿金屬鹽，可以舉出例如亞氯酸鈉、亞氯酸鉀、亞氯酸鋰；作為亞氯酸堿土類金屬鹽，可以舉出例如亞氯酸鈣、亞氯酸鎂、亞氯酸鋇。其中，不僅從獲得容易的理由，而且從ニ氧化氯活性的持續(xù)性優(yōu)異的觀點出發(fā)，優(yōu)選亞氯酸鈉、亞氯酸鉀，更優(yōu)選亞氯酸鈉。作為能在本發(fā)明中使用的PH調(diào)節(jié)劑，只要是具有緩沖性的酸就可以很好的使用。作為有機酸或其鹽可以舉出甲酸、こ酸、丙酸、丁酸、乳酸、丙酮酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、葡糖酸、こ醇酸、富馬酸、丙ニ酸、馬來酸、草酸、琥珀酸、丙烯酸、巴豆酸、戊ニ酸及他們的鹽。作為無機酸可以舉出磷、硼酸、偏磷酸、焦磷酸、氨基磺酸等。作為無機酸鹽，例如可以舉出磷酸ニ氫鹽(鈉鹽、鉀鹽，下同)、磷酸ニ氫鹽與磷酸氫鹽的混合物等、PH調(diào)節(jié)劑可以單獨使用I種，也可以并用2種以上。從使用于人體安全方面的考慮，PH調(diào)節(jié)劑優(yōu)選為檸檬酸、こ酸和磷酸ニ氫鈉，更優(yōu)選為朽1檬酸。另外，ニ氧化氯液劑的最終PH值優(yōu)選為1. 5 5. 5，更優(yōu)選為1. 5 3. 5.本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑優(yōu)選為液劑。本發(fā)明中的干細胞啟動劑的藥劑量因患者的年齡、體重、疾病性質(zhì)和狀況而變化。但是在成人的情況下，例如為每日I毫克至5000毫克的ニ氧化氯，優(yōu)選為每日I毫克至1000毫克的ニ氧化氯。本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑可以通過多種方式給藥。含ニ氧化氯的干細胞啟動劑可以全身性地給藥，如通過靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥；也可以局部患處的直接給藥，該方法可以通過透皮、穿刺等方法直達患處給藥。本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干`細胞啟動劑的給藥方式，可以通過任何ー種能到達預(yù)期組織的途徑給藥，比如，可以經(jīng)由靜脈點滴、靜脈注射、動脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射、心內(nèi)注射、腹腔注射、鞘內(nèi)注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、穿刺注射、直腸給藥、舌下給藥、鼻腔給藥、經(jīng)皮給藥、吸入或者局部給藥到損傷的器官或組織等，但不限于這些。通過以上方式給藥時，因目標(biāo)組織的大小，本發(fā)明中的干細胞啟動劑的有效量范圍為每日0.1 500mg/kg ニ氧化氯，有時候目標(biāo)組織用面積更容易表述，則本發(fā)明中的干細胞啟動劑的有效范圍為每日0.1 500mg/100cm2 ニ氧化氯，按所述劑量給藥時，至少10天后有效。無論如何，本發(fā)明所述的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑，唯有保證在適用于目標(biāo)有效劑量的ニ氧化氯以合適方式進入目標(biāo)中，發(fā)揮干細胞啟動作用，而不限于任何的形式、方式和步驟，及其他輔助性物質(zhì)的幫助?！吨袊幍渲苿┩▌t》中的任何制劑都能夠作為本發(fā)明中的干細胞啟動劑的劑型。本發(fā)明方法中的干細胞啟動劑作為藥物的劑型的實例包括直接用于體內(nèi)的注射劑(包括混懸液、乳剤)；軟膏劑(包括油脂性軟膏、乳劑型軟膏(霜)、水溶性軟膏等)、吸入劑、液劑制劑(包括滴眼劑、滴鼻劑等)、栓齊IJ、貼劑、糊齊U、洗劑等外用劑；或片劑(包括糖衣、薄膜、膠衣)、液體制劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑(包括細粒級)、丸劑、糖漿劑、含片等。這些制劑可按照中國藥典制劑通則的方法進行制備。此外，本發(fā)明方法中的干細胞啟動劑給藥時還可以包括可藥用的固態(tài)或液態(tài)載體或介入治療材料。作為可藥用的固態(tài)或液態(tài)載體，可列舉溶劑、穩(wěn)定劑、助溶解劑、乳化剤、懸濁劑、緩沖劑、等滲劑、著色劑、基質(zhì)、增稠劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、包衣劑、矯味齊IJ、調(diào)理劑、發(fā)泡劑、高吸水性樹脂、表面活性剤、滲透促進劑和PH調(diào)節(jié)劑等，但并不限于這些。具體實例包括去離子水、乳糖、白糖、果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖醇等糖或糖醇；結(jié)晶纖維素、甲基纖維素、こ基纖維素、羥丙基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯ニ甲酸酷、醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酷、羥甲基纖維素、羥甲基纖維素鈣、羥甲基纖維素鈉、交聯(lián)羥甲基纖維素鈉、羥甲基こ基纖維素、こ酸鄰苯ニ酸纖維素等纖維素及其相關(guān)衍生物；玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、環(huán)糊精、支鏈淀粉等點功夫及其相關(guān)衍生物；瓊脂、藻酸鈉、阿拉伯膠、明膠、膠原、蟲膠、黃薯膠、黃原膠等天熱高分子(海藻類、植物粘質(zhì)、蛋白質(zhì)等)；聚こ烯吡咯烷酮、氨基烷基甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、羥基こ烯基共聚物、聚こ烯醇、ニ甲基聚硅氧烷等合成高分子；橄欖油、可可油、巴西棕櫚蠟、牛油、硬化油、大豆油、芝麻油、山茶油、亞麻籽油、石蠟、液體石蠟、黃蜂蠟、白色凡士林、椰子油、微晶蠟等油脂類；硬脂酸、硬脂酸鋁、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、檸檬酸三こ酷、三こ酯甘油酷、中鏈脂肪酸三甘油酷、硬脂、肉豆蘧酸異丙酯等脂肪酸及其衍生物；こ醇、甘油、硬脂醇、鯨蠟醇、丙ニ醇、聚こニ醇等醇和多元醇；氧化鋅、磷酸氫鈣、沉降碳酸鈣、合成硅酸鋁、硅酸酐、高嶺土、干燥氫氧化鋁凝膠、合成水滑石、氧化鈦、滑石、膨潤土、硅酸鋁鎂、硫酸鋁鉀、次沒食子酸鉍、次水楊酸鉍、乳酸鈣、檸檬酸鈉、氯化鈉、碳酸氫鈉等無機物質(zhì)和金屬鹽化合物；蔗糖脂肪酸酷、硬脂酸聚烴氧酷、氫化蓖麻油聚氧こ烯醚、聚氧こ烯聚氧丙烯ニ醇、倍伴油酸脫水山梨醇酯、三油酸脫水山梨醇酯、單硬脂酸脫水山梨醇酷、但棕櫚酸脫水山梨醇酯、單月桂酸脫水山梨醇酯、聚山梨醇酯、單硬脂酸甘油酷、十二烷基硫酸鈉、聚桂醇等表面活性剤；ニ甲基亞砜及其類似物、氮酮類化合物、吡咯酮衍生物、醇類化合物及脂肪酸類化合物等滲透促進劑；色素；香料等。但并不限于這些。介入治療材料的實例包括注射器、支架、人工血管、穿刺注射器、導(dǎo)管、球囊等，但并不限于這些。 本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑在給藥前，可以依據(jù)給藥方式而施用麻酔齊U，如巴比妥酸鹽等注射型麻醉劑、ー氧化ニ氮等吸入型麻醉劑、利多卡因等表面麻醉劑等，但不限于這些。本發(fā)明中的干細胞啟動劑可以應(yīng)用于具有干細胞的哺乳動物，哺乳動物的具體實例包括人、猴、狗、豬、貓、 兔、大鼠和小鼠。其中，人是優(yōu)選者。身體系統(tǒng)中的絕大多數(shù)終末期細胞是短命的，必須在生命期間連續(xù)更換，這其中，干細胞起到最重要的發(fā)動作用(通過已分化細胞的増殖，不需要干細胞，也可以達到這樣的效果，但是不可能長期持續(xù)下去)；除了身體內(nèi)正常的細胞更換，其他意外或偶發(fā)性的組織創(chuàng)傷，都需要干細胞發(fā)動的組織再生來彌補，這ー過程能夠被損傷過程誘導(dǎo)。然而，在生長中的或成年的哺乳動物體中，在很大程度上失去了構(gòu)造出或者在組織受損的情況下再生出在結(jié)構(gòu)和功能上完整的組織的能力。這就是疾病產(chǎn)生的最主要原因。再生醫(yī)學(xué)的主要目標(biāo)，就是利用干細胞的増殖、遷移和分化來使組織再生以達到修復(fù)受損的組織和器官，特別是針對那些通過自然再生過程不足以有效修復(fù)的組織和器官。目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，哺乳動物身體中，包括神經(jīng)組織和心臟組織在內(nèi)的所有組織和器官均分布存在著各類干細胞。即可以說，目前認(rèn)為內(nèi)在干細胞存在于所有器
矛ロ組織中(Weissman IL:Translating stem andprogenitor cell bilolgy to theclinic:Barriers and opportunities. Science. 287:1442-1446, 2000 ；Garry DJ 等人Ponce de Leon’ s fountain: stem cells and the regenerating heart. Am J MedSc1. 329(4) :190-201, 2005)。在應(yīng)用干細胞療法的再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中，幾乎身體所有的組織均有得以再生的案例(Stem Cell Antholgy, Edited by Bruce M. Carlson, 2010, ElsevierInc.)。本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要花費創(chuàng)造性的勞動就可以概括出，如果能夠啟動(initiate)或動員(activate)身體內(nèi)的干細胞進行增值、遷移和分化，在損傷組織特異性環(huán)境的誘導(dǎo)下，可以再生出幾乎所有的身體組織(依受損組織程度而言)，因而可以治愈幾乎所有的組織損傷或功能性障礙的疾病。本發(fā)明的直接目的是提供一種啟動干細胞的増殖、遷移和分化的方法，因而可以間接地用于治療需要利用干細胞的組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力進行治療的疾病，所述疾病包括以下兩個類型第一、單純利用干細胞的組織再生能力的可治療疾??；ニ、利用干細胞的組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力的可治療疾病。特別說明的是，在治療上述兩類疾病的過程中，也利用到了本發(fā)明中的干細胞啟動劑的特有性質(zhì)(比如ニ氧化氯強氧化性所起到的殺滅微生物和清除壞死組織的作用)，并且在說明本發(fā)明中的干細胞啟動劑作為藥物的使用范圍中存在上述兩類疾病的重復(fù)。以下說明第一類疾病(單純利用干細胞的組織再生能力的可治療疾病)的類型。對于該類疾病，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要花費創(chuàng)造性的勞動就可以概括出，應(yīng)用干細胞療法的再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，所述疾病均可以治療，并且治療機理均為啟動損傷組織中的正常干細胞(包括內(nèi)在干細胞、血液來源干細胞和骨髄來源干細胞)増殖、遷移和分化以再生功能如新的組織，從而實現(xiàn)修復(fù)病變組織和器官。對于再生醫(yī)學(xué)所應(yīng)用疾病(損傷的器官或組織)的原因、類型或程度沒有具體限制。下面是這些疾病的具體實例(在具體疾病歸類上有部分重復(fù))。皮膚疾病創(chuàng)傷、燒傷、放 射損傷、凍瘡、紫外線損傷、電休克、外傷、皮膚潰瘍、褥瘡、接觸性皮炎、大皰性皮炎、干皮病、糖尿病性皮膚潰瘍、自體致敏性皮炎、大皰性表皮松解癥、光照性皮膚病、慢性色素性紫癜(Schamberg氏病)、口腔黏膜損傷、口炎、ロ周皮炎、皮膚老化癥狀、雄激素脫發(fā)、甲溝炎、嵌甲(unguis incarnates)、胃腸黏膜糜爛、消化性潰瘍、角膜糜爛、角膜潰瘍、齲齒、牙髓炎、邊緣性牙周炎、各種慢性鼻炎、花粉病、復(fù)發(fā)性ロ瘡、內(nèi)ロロ瘡、口臭、口腔黏膜咬傷、舌咬傷、口腔黏膜灼傷和口腔黏膜潰瘍等，但不限于這些。神經(jīng)系統(tǒng)疾病中風(fēng)、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、各種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病(例如，脊髄炎)、各種外周神經(jīng)疾病(例如，多發(fā)性外周神經(jīng)病)、各種原因造成的神經(jīng)損傷疾病(例如，聽カ神經(jīng)損傷)、脊髄病和各種類型的腦炎等，但不限于這些。心血管疾病心肌梗死、心絞痛、不穩(wěn)定心絞痛、各種類型的心肌炎(例如，病毒性心肌炎)、急性心機能不全、慢性心機能不全、動脈粥樣硬化、高血壓、類風(fēng)濕性心臟病、心律不齊、瓣膜性心臟病、感染性心內(nèi)膜炎、心包炎、經(jīng)皮冠狀動脈介入和PTCA后再狹窄和再阻塞等，但不限于這些。腸胃疾病
食管炎、急性胃炎、慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、闌尾炎、各種類型結(jié)腸炎(例如，潰瘍性結(jié)腸炎)、腸結(jié)核、病毒性肝炎、酒精性肝炎、藥物誘導(dǎo)的肝炎、脂肪肝、肝硬變、胰腺炎和各種類型的胃腸癌(例如，肝癌、結(jié)腸癌和胃癌)的外科手術(shù)引起的器官病癥等，但不限于這些。呼吸疾病各種類型的支氣管炎(例如，細菌性支氣管炎)、感染性肺炎、吸入性肺炎、肺栓塞、氣胸和肺功能不全等，但不限于這些。泌尿科疾病膀胱炎、各種類型的腎炎(例如，慢性腎炎綜合癥、原發(fā)性腎小球疾病)、腎上腺炎、尿道炎、細菌和非細菌前列腺炎、高血壓性腎病、糖尿病腎病和腎機能不全等，但不限于這些。運動系統(tǒng)疾病各種類型的關(guān)節(jié)炎(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、肌萎縮(例如，肌萎縮性側(cè)索硬化癥)、神經(jīng)外科顱骨切除術(shù)后的骨缺損、整形外科腫瘤切除術(shù)后的骨缺損、骨折后的骨缺損、牙科學(xué)領(lǐng)域牙周變性引起的骨缺損、軟骨炎、各種關(guān)節(jié)的軟骨缺損、各種損傷(例如、外傷或畸變)引起的腱損傷等，但不限于這些。血管疾病各種類型的動脈病(例如，閉塞性動脈硬化(AS0))、伯格氏病(閉塞性血栓性動脈炎(TA0))、各種類型的靜脈病(例如，血栓性靜脈炎)、血栓形成、循環(huán)障礙、深部靜脈血栓形成(DVT)、伴隨著外周循環(huán)障礙的`各種類型的疾病(例如，突發(fā)性聾和振動病)和血管成形術(shù)后的再狹窄和再阻塞等，但不限于這些。內(nèi)分泌疾病糖尿病及其并發(fā)癥(例如，糖尿病周圍神經(jīng)病變、糖尿病性足和糖尿病性潰瘍)、高脂血癥、甲狀腺炎和肥胖癥等，但不限于這些。眼科疾病各種類型的角膜炎(例如，堿性或者酸性化合物引起的角膜炎和外傷性角膜炎)、各種視網(wǎng)膜病癥(例如，視網(wǎng)膜黃斑病變)、視神經(jīng)損傷類疾病(例如，青光眼)、干眼癥和糖尿病性視網(wǎng)膜炎等，但不限于這些。其他疾病美容整形中的組織再生、外科手術(shù)或意外組織損傷的傷ロ愈合、各種原因?qū)е碌难装Y性組織的再生、以及各種癌癥中的損傷組織的再生。本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑作為藥物可以優(yōu)選應(yīng)用于患有皮膚疾病、運動系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌疾病、呼吸疾病、泌尿科疾病、胃腸疾病、眼科疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病和血管疾病治療時的組織再生。以下說明第二類疾病(利用干細胞的組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力的可治療疾病)的類型。對于該類疾病，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要花費創(chuàng)造性的勞動就可以概括出，應(yīng)用干細胞療法的再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，所述疾病均可以治療，并且治療機理均為啟動損傷組織中的正常干細胞(包括內(nèi)在干細胞、血液來源干細胞和骨髄來源干細胞)増殖、遷移和分化以再生功能如新的組織，并實現(xiàn)對免疫系統(tǒng)的耐受，從而實現(xiàn)修復(fù)病變組織和器官。
本發(fā)明人非常意外地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑對過敏反應(yīng)性疾病，特別是自身免疫性疾病具有肯定的療效。在本發(fā)明的具體適用范圍中，過敏反應(yīng)疾病包括I型過敏反應(yīng)疾病、II型過敏反應(yīng)疾病、III型過敏反應(yīng)疾病、IV型過敏反應(yīng)疾病。I型過敏反應(yīng)疾病又名速發(fā)型過敏反應(yīng)。I型過敏反應(yīng)由IgE介導(dǎo)。速發(fā)型過敏反應(yīng)是由抗原與IgE在肥大細胞或嗜堿性粒細胞上結(jié)合引起的。特應(yīng)性疾病在I型過敏反應(yīng)疾病的意義內(nèi)，例如，但不限于過敏性鼻炎、過敏性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、過敏性外源性哮喘、風(fēng)疹、全身性過敏癥等、由I型過敏反應(yīng)引起的過敏癥是嚴(yán)重的過敏反應(yīng)，危及生命。II型過敏反應(yīng)或細胞毒性過敏反應(yīng)涉及由抗體、補體和/或細胞機制介導(dǎo)的細胞溶解作用?？辜毎Y(jié)合抗原的抗體通過激活補體或促進噬菌作用而破壞細胞。本發(fā)明適用范圍中的II型過敏反應(yīng)疾病包括例如庫姆氏陽性溶血性貧血、抗體誘導(dǎo)的血小板減少性紫癜、白血球減少癥、天皰疹、類天皰疹、古德帕斯切綜合征和惡性貧血。另外包括冷凝集素綜合征、Graves病、重癥肌無力、嗜睡癥、德維奇綜合征、神經(jīng)性肌強直、風(fēng)濕熱、蕁麻疹性血管炎、熊貓癥候群、胎兒成紅細胞增多癥。III型過敏反應(yīng)疾病涉及其中抗體與抗原形成免疫復(fù)合物的反應(yīng)。循環(huán)復(fù)合物激活補體，黏附在血紅球細胞上，紅血球細胞再在脾中被吞噬，之后復(fù)合物離開循環(huán)系統(tǒng)，觸發(fā)組織間腺發(fā)炎。這種反應(yīng)稱 為Arthus反應(yīng)。另ー種情況是復(fù)合物被遞呈抗原的巨噬細胞所吞噬，釋放出細胞因子，激活B和T細胞。IgE、IgA、IgG和IgM都與抗原形成復(fù)合物。III型過敏反應(yīng)通常因免疫復(fù)合物沉積于組織、特別是沉積于皮膚、關(guān)節(jié)和腎上所致。人腎小球性腎炎大部分病例是慢性免疫復(fù)合物腎炎。本發(fā)明適用范圍中的III型過敏反應(yīng)疾病包括例如由血清、藥物或病毒性肝炎抗原引起的血清病、全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多動脈炎、冷球蛋白血癥、過敏性肺炎、支氣管肺曲菌病、急性腎小球性腎炎、慢性膜增生性腎小球性腎炎。另外還包括接觸性皮炎、盤狀紅斑狼瘡、美尼爾氏癥、亞急性細菌性心內(nèi)膜炎、脈管炎。IV型過敏反應(yīng)疾病涉及細胞介導(dǎo)的反應(yīng)，一般要12小時或以上的時間才發(fā)生。IV型過敏反應(yīng)疾病可包括炎癥，結(jié)果可能是慢性炎癥疾病。IV型過敏反應(yīng)又名遲發(fā)型過敏反應(yīng)或DTH。一旦T細胞經(jīng)過首次接觸被致敏后，進行第二次攻擊就會發(fā)生遲發(fā)型過敏反應(yīng)。這個反應(yīng)是ー種局部炎癥反應(yīng)，在臨床上需要2 3天才發(fā)生。本發(fā)明適用范圍中的IV型過敏反應(yīng)疾病包括腹腔疾病、I型糖尿病、格林-巴利綜合征(GBS)、橋本氏腦病、橋本氏甲狀腺炎、多發(fā)性硬化癥、斜視眼陣攣-肌陣攣綜合征(0MS)、副腫瘤性小腦變性、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)痿、硬皮病、巨細胞動脈炎、潰瘍性結(jié)腸炎。過敏反應(yīng)性疾病的發(fā)生機制十分復(fù)雜。臨床實踐所見往往為混合型，但以某一型為主，如I型和III型可以同時出現(xiàn)，II型和III型也可同時出現(xiàn)，甚至I1、II1、IV型也可同時出現(xiàn)。另外，自身免疫性疾病又涵蓋了大部分過敏反應(yīng)性疾病，并且包括了ー些臨床上病因不明的類似過敏反應(yīng)疾病。在本發(fā)明中，將無法歸類于某ー類型的過敏反應(yīng)疾病或者病因不明的類似過敏反應(yīng)的臨床疾病歸類于其他自身免疫性疾病，都包括在本發(fā)明適用范圍內(nèi)。本發(fā)明適用范圍中其他自身免疫性疾病包括腦脊髄炎、阿狄森氏病、丙種球蛋白血癥、斑禿、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、強直性脊柱炎、抗磷脂綜合征、抗合成酶抗體綜合征、自身免疫性再生障礙性貧血、自身免疫性心肌病、自身免疫性腸病、自身免疫性肝炎、自身免疫性內(nèi)耳病、自身免疫性淋巴增生綜合征、自身免疫性周圍神經(jīng)病、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性多內(nèi)分泌腺病綜合征、自身免疫性黃體酮皮炎、自身免疫性蕁麻疹、自身免疫性蕁麻疹、BALO同心圓硬化、白塞氏病、血栓閉塞性脈管炎、比克斯塔夫腦炎、布勞綜合征、大皰性類天皰瘡、Castleman病、南美錐蟲病、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病、慢性復(fù)發(fā)性多灶性骨髄炎、慢性阻塞性肺病、Churg-Strauss綜合征、瘢痕性類天皰瘡、科根綜合征、補體成分缺乏癥、顱動脈炎、CREST綜合征、庫欣綜合征、皮膚白細胞脈管炎、惡性萎縮性丘疹病、Dercum氏病、皰疹性皮炎、皮肌炎、彌漫性皮膚系統(tǒng)性硬化癥、德雷斯勒氏綜合征、藥物性狼瘡、濕疹、子宮內(nèi)膜異位癥、附著點炎相關(guān)的關(guān)節(jié)炎、嗜酸性筋膜炎、嗜酸細胞性胃腸炎、獲得性大皰性表皮松解、結(jié)節(jié)性紅斑、冷球蛋白血癥、埃文氏綜合征、纖維化性肺泡炎、胃炎、胃腸類天皰瘡、巨細胞動脈炎、過敏性紫癜、妊娠性類天皰瘡、化膿性汗腺炎、Hughes-Stovin綜合征、免疫球蛋白低下、特發(fā)性炎性脫髓鞘疾病、包涵體肌炎、慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病、間質(zhì)性膀胱炎、幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、蘭伯持-伊頓肌無カ綜合征、川崎綜合征、白細胞脈管炎、扁平苔蘚、神經(jīng)性皮炎、硬化性苔蘚、線狀I(lǐng)gA病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、馬吉德綜合征、混合性結(jié)締組織病、硬皮病、微觀結(jié)節(jié)性多動脈炎、格林-巴利綜合征、玫瑰苔蘚等痘蚧、肌炎、Ord氏甲狀腺炎、復(fù)發(fā)性風(fēng)濕病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、帕里伯格綜合征、急性臂叢神經(jīng)病變、中間葡萄膜炎、靜脈周腦脊髄炎、POEMS綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎、風(fēng)濕性多肌痛、多發(fā)性肌炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、進炎癥病變、壞疽性膿皮病、純紅細胞再生障礙、慢性局灶性腦炎、雷諾氏現(xiàn)象、復(fù)發(fā)性多軟骨、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、腹膜后纖維化、不寧腿綜合征、自身免疫性多內(nèi)分泌腺病綜合征2型、施尼茨勒綜合征、鞏膜炎、干燥綜合征、僵人綜合征、交感性眼炎、大動脈炎、Susac綜合征、西德納姆氏舞蹈病、Sweet綜合征、Tolosa-H unt綜合征、橫貫性脊髄炎、未分化結(jié)締組織病、白癜風(fēng)、韋格納肉芽腫。 本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑作為藥物可以優(yōu)選應(yīng)用于引起器官損傷的I型過敏反應(yīng)疾病和自身免疫性疾病的治療。除了上面列出的兩類疾病外，用于能夠通過啟動干細胞増殖、遷移和分化治療疾病的再生醫(yī)學(xué)(即，再生損傷器官和損傷組織)中的干細胞也是本發(fā)明方法中含ニ氧化氯的干細胞啟動劑作為藥物的使用対象。此外，對于再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用疾病的進展?fàn)顟B(tài)也沒有具體限制。此外，本發(fā)明中的干細胞啟動劑作為藥物能夠根據(jù)再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用的損傷器官和/或損傷組織的進展?fàn)顩r及程度、快速而適度地發(fā)揮作用。再者，本發(fā)明中的干細胞啟動劑作為藥物治療相關(guān)疾病時的副作用很小或者無副作用。此外，本發(fā)明中的含ニ氧化氯的干細胞啟動劑對原位組織再生中的干細胞能夠持續(xù)地發(fā)揮作用。本發(fā)明中的干細胞啟動劑作為藥物治療相關(guān)疾病時，可以利用ニ氧化氯清除壞死組織的清創(chuàng)作用和殺滅病原微生物的抗感染作用。本發(fā)明相關(guān)的實施例描述如下。
在大部分情況下，可使用可選的技木。這些實施例用來詳細說明本發(fā)明，但是本發(fā)明不局限于這些實施例。實施例1本實施例用于說明含ニ氧化氯的干細胞啟動劑作為藥物用于治療雄激素脫發(fā)。藥物制備用去離子水配置濃度為7. 47%亞氯酸鈉和1. 59%氯化鈉的混合溶液，制備出第一份溶液；用去離子水配置濃度為16. 7%的檸檬酸溶液，制備出第二份溶液。用法用量分別從不同份溶液的容器中取出相同體積的溶液，放入事先準(zhǔn)備好的大小合適的玻璃或塑料杯中，等待溶液混合靜止3 5分鐘，再用0. 22 的雙層濾膜過濾，用棉簽沾液涂抹脫發(fā)區(qū)域，再等待I 2小時后，用水清洗頭部，一天一次。按照療程使用，第一個療程15 25天，停藥2 5個月，然后開始第二個療程，自第二個療程開始用藥10 15天，再停藥2 5個月，再用下ー個療程。有42位男性脫發(fā)患者和I名女性脫發(fā)患者(年齡分布為22 68歲)作為自愿者使用該藥物(以下簡稱為用藥)，情況如表I所示。表I
權(quán)利要求
1.一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，該方法包括制備含二氧化氯的干細胞啟動劑以及對哺乳動物目標(biāo)組織給予所述干細胞啟動劑的步驟；其中所述干細胞啟動劑被給予哺乳動物目標(biāo)組織時提供有效量的二氧化氯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，制備含二氧化氯的干細胞啟動劑的方法為將二氧化氯氣體溶于含酸性PH調(diào)節(jié)劑的pH值為1. 5 6. 5的酸性溶液A中，制備500 2900ppm的二氧化氯溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，制備含二氧化氯的干細胞啟動劑的方法為將二氧化氯前體溶解于水中制備成1% 40%的水溶液，向該水溶液中加入含有酸性pH調(diào)節(jié)劑的酸性溶液B，調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為1. 5 6. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，制備含二氧化氯的干細胞啟動劑的方法為將二氧化氯前體溶解于水中，制成濃度為1% 40%的水溶液C ;將酸性pH調(diào)節(jié)劑溶于水中制備出酸性溶液D ;使用前混合溶液C、D，調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為1. 5 6. 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，二氧化氯前體為亞氯酸鈉、亞氯酸鉀、亞氯酸鋰、亞氯酸鈣、亞氯酸鎂和亞氯酸鋇。
6.根據(jù)權(quán)利要求2、3或4所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，酸性pH調(diào)節(jié)劑為檸檬酸、乙酸或磷酸二氫鈉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，干細胞啟動劑通過動脈注射、肌肉注射、皮下注射、心內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射、關(guān)節(jié)內(nèi)注射、穿刺注射、直腸給藥、鼻腔給藥、經(jīng)皮給藥或吸入給藥的方式直接給到損傷的器官或組織中。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法，其特征在于，干細胞啟動劑制成注射劑、軟膏劑、吸入劑、滴鼻劑、洗劑、栓劑、貼劑、糊劑、片劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑、沖劑、丸劑或糖漿劑。
9.二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其中，該藥物用于治療通過啟動干細胞增殖、遷移和分化的再生醫(yī)學(xué)所治療的疾病。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，該藥物包含權(quán)利要求1-8中任一項所述的一種啟動哺乳動物干細胞增殖、遷移和分化的方法所采用的干細胞啟動劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述干細胞為應(yīng)用于利用原位組織再生的再生醫(yī)學(xué)中的細胞。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，該再生醫(yī)學(xué)是關(guān)于皮膚疾病、運動系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌疾病、呼吸疾病、泌尿科疾病、胃腸疾病、眼科疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病或血管疾病治療時的損傷組織再生。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于 所述皮膚疾病包括燒傷、皮膚潰瘍、褥瘡、干皮病、糖尿病性皮膚潰瘍、雄激素脫發(fā)、甲溝炎、胃腸黏膜糜爛、消化性潰瘍、角膜潰瘍、牙髓炎、復(fù)發(fā)性口瘡、口腔黏膜潰瘍； 所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括中風(fēng)、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、脊髓炎、多發(fā)性外周神經(jīng)病、聽力神經(jīng)損傷； 所述心血管疾病包括心肌梗死、心絞痛、病毒性心肌炎、動脈粥樣硬化、瓣膜性心臟病、感染性心內(nèi)膜炎、心包炎； 所述腸胃疾病包括慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、闌尾炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腸結(jié)核、病毒性肝炎、酒精性肝炎、胰腺炎； 所述呼吸疾病包括細菌性支氣管炎、感染性肺炎、吸入性肺炎； 所述泌尿科疾病包括膀胱炎、慢性腎炎綜合癥、原發(fā)性腎小球疾病、腎上腺炎、尿道炎、細菌和非細菌前列腺炎； 所述運動系統(tǒng)疾病包括關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)外科顱骨切除術(shù)后的骨缺損、整形外科腫瘤切除術(shù)后的骨缺損、骨折后的骨缺損、軟骨炎、軟骨缺損； 所述血管疾病包括閉塞性動脈硬化、閉塞性血栓性動脈炎、血栓性靜脈炎、血栓形成、深部靜脈血栓形成、突發(fā)性聾、糖尿病周圍神經(jīng)病變； 所述內(nèi)分泌疾病包括II型糖尿病和糖尿病性足； 所述眼科疾病包括角膜炎、視網(wǎng)膜黃斑病變、青光眼、干眼癥、糖尿病性視網(wǎng)膜炎。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，該再生醫(yī)學(xué)是關(guān)于美容整形中的組織再生、外科手術(shù)或意外組織損傷的傷口愈合、各種原因?qū)е碌难装Y性組織的再生、以及各種癌癥中的損傷組織的再生。
15.根據(jù)權(quán)利要求9所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物是應(yīng)用于利用干細胞的組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力所治療的疾病。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，利用干細胞組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力治療的疾病為I型過敏反應(yīng)疾病和自身免疫性疾病。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于 所述I型過敏反應(yīng)疾病包括過敏性鼻炎、過敏性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、過敏性外源性哮喘、風(fēng)疹； 所述自身免疫性疾病包括血小板減少性紫癜、白血球減少癥、天皰疹、類天皰疹、Graves病、重癥肌無力、蕁麻疫性血管炎、全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；多動脈炎、接觸性皮炎、盤狀紅斑狼瘡、脈管炎、I型糖尿病、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、硬皮病、腦脊髓炎、斑禿、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、強直性脊柱炎、自身免疫性蕁麻疹、大皰性類天皰瘡、慢性阻塞性肺病、瘢痕性類天皰瘡、皰疹性皮炎、皮肌炎、彌漫性皮膚系統(tǒng)性硬化癥、濕疹、過敏性紫癜、特發(fā)性炎性脫髓鞘疾病、神經(jīng)性皮炎、硬化性苔蘚、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、硬皮病、復(fù)發(fā)性風(fēng)濕病、結(jié)節(jié)性多動脈炎、風(fēng)濕性多肌痛、干燥綜合征、白癜風(fēng)。
18.根據(jù)權(quán)利要求9、12-17中任一所述的二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，該藥物在治療所述疾病的過程中，二氧化氯用于清創(chuàng)和抗感染。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種啟動哺乳動物體內(nèi)干細胞增殖、遷移和分化的方法，該方法包括制備含二氧化氯的干細胞啟動劑以及對哺乳動物目標(biāo)組織給予所述干細胞啟動劑的步驟，其中所述干細胞啟動劑被給予哺乳動物目標(biāo)組織時提供有效量的二氧化氯。本發(fā)明還提供了二氧化氯在制備用于啟動干細胞增殖、遷移和分化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的方法適用范圍廣，適用于各種需要利用干細胞組織再生能力和免疫調(diào)節(jié)能力治療疾病或促使損傷器官、組織再生的機體中干細胞的增殖、遷移和分化的啟動；此外，采用本發(fā)明的方法能快速、且適度地啟動干細胞的增殖、遷移和分化；本方法副作用很小或者無副作用，并能持續(xù)地發(fā)揮啟動干細胞增殖、遷移和分化的作用。
文檔編號A61P19/08GK103040860SQ201210499300
公開日2013年4月17日 申請日期2012年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月29日
發(fā)明者劉學(xué)武 申請人:劉學(xué)武