專利名稱：：黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本技術(shù)屬水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防控
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種養(yǎng)殖甲殼類免疫增強(qiáng)劑的制備和應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
：海水經(jīng)濟(jì)蟹類是我國(guó)海水養(yǎng)殖的重要組成部分，我國(guó)養(yǎng)殖的海水蟹類主要品種為鋸緣青蟹(^c;^hserrateForskal)和梭子蟹(尸0rto/7"s邵)，屬甲殼綱(fr"Wac朋)、十足目("ec，w/s)、梭子蟹科(尸or^/77jVae)，廣泛分布于我國(guó)東部沿海各省及日本、印度、東南亞、澳大利亞、南非等海域，是我國(guó)重要的海洋經(jīng)濟(jì)蟹類，也是重要的出口創(chuàng)匯品種。近年來，我國(guó)海水蟹類養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展，2006年我國(guó)鋸緣青蟹和梭子蟹養(yǎng)殖面積達(dá)76，277萬公頃，占海水蟹養(yǎng)殖面積的95%以上，兩者總產(chǎn)量達(dá)22萬噸左右。其中鋸緣青蟹產(chǎn)量達(dá)到10.85萬噸，占世界總養(yǎng)殖產(chǎn)量的88.14%，是世界第一青蟹養(yǎng)殖大國(guó)。此外，我國(guó)的凡納濱對(duì)虹(&^/e/7aei^ra/M，eie)(俗稱南美白對(duì)蝦)和脊尾白蝦(firo/ah/^/cari"ca〃^Holthuis)(又稱小白蟲下)是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖蟲下類，其中南美白對(duì)蝦的養(yǎng)殖產(chǎn)量為全部經(jīng)濟(jì)甲殼類養(yǎng)殖之首，脊尾白蝦在沿海養(yǎng)殖中占有重要的地位。隨著海水蟹養(yǎng)殖的規(guī)模化發(fā)展，病害日益成為養(yǎng)殖發(fā)展的主要障礙。近年來，青蟹和梭子蟹先后發(fā)生了較為嚴(yán)重的疾病，其中養(yǎng)殖青蟹平均發(fā)病率為13.77%左右，平均死亡率5.43%，每年造成2億余元的經(jīng)濟(jì)損失。疾病也給養(yǎng)殖梭子蟹造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。目前病害控制上，主要采用藥物為主的控制手段，費(fèi)用較高，抗菌藥物的大量使用還導(dǎo)致養(yǎng)殖蟹藥物殘留、耐藥菌株產(chǎn)生等一系列問題，極大地影響了養(yǎng)殖蟹蝦的品質(zhì)。
發(fā)明內(nèi)容為了解決上述的水產(chǎn)養(yǎng)殖中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，其不僅具有良好的殺蟲作用，還可以大幅提高青蟹對(duì)弧菌感染的抵抗水平，增強(qiáng)甲殼動(dòng)物的免疫力。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供上述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供上述的黃岑復(fù)合免疫增強(qiáng)劑制成的新劑型。為了實(shí)現(xiàn)上述的第一個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，該復(fù)合免疫增強(qiáng)劑包括黃芩提取物或黃芩苷與左旋咪唑，黃芩提取物或黃芩苷與左旋咪唑的重量份數(shù)如下黃芩提取物或黃芩苷24份"左旋咪唑2.55份。作為最優(yōu)選，黃芩提取物或黃芩苷與左旋咪唑的重量份數(shù)如下黃芩提取物或黃芩苷2.5份左旋咪唑3份。上述的黃芩苷(Baicalin)別名黃芩甙，購(gòu)自國(guó)內(nèi)廠家，產(chǎn)品的黃芩苷含量不低于95%，其余特征符合中國(guó)藥典2005版(I部)的要求。上述的黃芩提取物可以采用以下的方法①取炒黃芩，充分粉碎后，加蒸餾水浸泡過夜；②煎煮沸騰30min,補(bǔ)水，再煎煮沸騰30min，用紗布濾去藥渣，取上清液；③補(bǔ)水，同步驟②煎煮和濾去藥渣，再煎煮兩兩次；④將3次煮出的藥液進(jìn)一步煎煮濃縮，過濾除去顆粒，取澄清濾出液；⑤加入NaOH，再加3倍體積95%乙醇，劇烈振蕩；⑥靜置后，8000r/min離心15min，得褐色沉淀；⑦加入水重新溶解沉淀，離心除去不溶物，再加NaOH及3倍體積95%乙醇，同歩驟，重復(fù)兩次，干燥得黃芩提取物制品。當(dāng)然，黃芩提取物的制備方法應(yīng)不限于與上述方案，對(duì)于現(xiàn)有中藥提取的方法，本發(fā)明均可以適用。為了實(shí)現(xiàn)上述的第二個(gè)目的，本發(fā)明的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法，取黃芩提取物或黃芩苷和左旋咪唑用攪拌機(jī)充分混合，陰涼避光處保存。為了實(shí)現(xiàn)上述的第三個(gè)目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案一、黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)注射劑，該注射劑采用上述任意一個(gè)技術(shù)方案所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，加入蒸餾水溶解，再加入Na2C03溶液助溶，攪拌或振蕩，然后用生理鹽水稀釋，所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑占總重量百分比濃度為0.5°/。4.0%，優(yōu)選的濃度為1%4.0%。二、黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)飼料，該飼料包括上述任意一個(gè)技術(shù)方案所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑和面粉，黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑采用Na2C03溶液助溶后與面粉或面粉和餌料魚混合，所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑占總重量百分比為4.5%10.0%;或者，按每噸飼料加入0.2kg1.0kg所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的用量制成顆粒伺料。本發(fā)明的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑用于制備預(yù)防或治療養(yǎng)殖甲売類傳染性疾病的藥物或飼料中的應(yīng)用；或者，本發(fā)明的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑用于制備提高養(yǎng)殖甲殼類免疫力的藥物或伺料中的應(yīng)用。作為優(yōu)選，所述的傳染性疾病為病原性傳染性疾病。優(yōu)選的病原性疾病為白斑綜合征病毒感染、血卵渦鞭蟲感染以及其他纖毛蟲、弧菌的感染引起的病原性疾病。優(yōu)選的養(yǎng)殖甲殼類為青蟹、梭子蟹、南美白對(duì)蝦或脊尾白蝦。發(fā)明人在中草藥免疫增強(qiáng)劑的廣泛篩選基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)黃芩提取物對(duì)青蟹有較好的免疫增強(qiáng)作用，可全面增強(qiáng)青蟹血清主要免疫指標(biāo)，提高青蟹血清對(duì)弧菌的殺滅能力。青蟹體內(nèi)測(cè)定表明黃芩提取物對(duì)青蟹血清酚氧化酶、超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶等免疫相關(guān)酶類有良好的增強(qiáng)作用，可增強(qiáng)青蟹血清的抗弧菌水平，增強(qiáng)青蟹血細(xì)胞吞噬率，并可大幅提高青蟹對(duì)弧菌感染的抵抗水平。生產(chǎn)性試驗(yàn)表明黃芩提取物可提高青蟹抗病力，減少秋季和越冬期青蟹發(fā)病高峰的青蟹死亡率，通過注射和投喂均可達(dá)到較好的效果，其中注射適合于越冬階段青蟹增強(qiáng)免疫力和疾病預(yù)防，而添加到飼料中比較適合于養(yǎng)殖過程中發(fā)病高峰的疾病控制?？紤]到目前大部分地區(qū)的海水蟹類養(yǎng)殖多采用自然海區(qū)捕獲的魚蝦等鮮活餌料，因此發(fā)明者設(shè)計(jì)分別建立了鮮活餌料和顆粒飼料中添加免疫增強(qiáng)劑的方法。發(fā)明人在對(duì)黃芩提取物的研究中發(fā)現(xiàn)，黃芩提取物的主要成份是黃芩苷，實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)性應(yīng)用試驗(yàn)表明市售黃芩苷對(duì)青蟹有同樣的免疫增強(qiáng)作用。研究闡明了黃芩提取物的主要活性成份，并使免疫增強(qiáng)劑的規(guī)?；a(chǎn)和應(yīng)用成為可能。此外，對(duì)蝦白斑綜合征病毒(WSSV)和血卵渦鞭蟲是青蟹、梭子蟹病害的主要病原，而左旋咪唑不但是一種重要的殺蟲藥物，還有增強(qiáng)甲殼動(dòng)物的免疫力。發(fā)明者的研究表明左旋咪唑與黃芩苷在促進(jìn)酚氧化酶活性方面還有一定的協(xié)同作用。發(fā)明者確定了黃芩提取物的主要活性成份是黃芩苷，并確定了黃岑苷與左旋咪唑?qū)η嘈返拿庖呒せ顒┝?，確定了黃芩與左旋咪唑的最佳配比濃度。并根據(jù)青蟹養(yǎng)殖生產(chǎn)現(xiàn)狀建立了注射法、拌料法和顆粒飼料加工法等三種免疫增強(qiáng)劑'使用途徑，分別適用于不同養(yǎng)殖時(shí)期的青蟹。試驗(yàn)還表明，該免疫增強(qiáng)劑還可添加到飼料中，應(yīng)用于南美白對(duì)蝦和脊尾白蝦的用于南美白對(duì)蝦和脊尾白蝦的疾病預(yù)防和控制。本發(fā)明的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑可用于以下幾個(gè)方面的疾病控制1)養(yǎng)殖塘青蟹的疾病預(yù)防和控制引起青蟹發(fā)病死亡的主要原因有白斑綜合征病毒(WSSV)感染、血卵渦鞭蟲感染以及其他纖毛蟲、弧菌的繼發(fā)感染等，疾病高發(fā)季節(jié)為每年9-10月，這期間水溫適合水體病原菌的繁殖，加上雨水、晝夜氣溫變化等造成青蟹較大的應(yīng)激反應(yīng)，自身抵抗力較差。本發(fā)明的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑對(duì)這一時(shí)期青蟹疾病有良好的預(yù)防和控制作用。由于這一期間養(yǎng)殖青蟹上多投喂鮮活餌料，可采用復(fù)合免疫增強(qiáng)劑與鮮活餌料拌勻后投喂方法。在發(fā)病高峰前，可以投喂添加復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的顆粒餌料，連續(xù)投喂3-5天，有良好的防病效果。2)越冬期青蟹病害的預(yù)防和控制越冬期是青蟹死亡的另一高峰，這一時(shí)期青蟹進(jìn)食較少，在青蟹放養(yǎng)前采用肌肉注射復(fù)合免疫增強(qiáng)劑是一個(gè)可以考慮的方法。也可在青蟹進(jìn)越冬池前將復(fù)合免疫增強(qiáng)劑添加飼料連續(xù)投喂青蟹3-4天，以提高越冬青蟹的抗病力。3)南美白對(duì)蝦和脊尾白蝦疾病的預(yù)防控制南美白對(duì)蝦和脊尾白蝦疾病的主要疾病是白斑綜合征病毒(wssv)和各類弧菌等，水質(zhì)惡化也可成為疾病發(fā)生的誘因。研究表明復(fù)合免疫增強(qiáng)劑對(duì)南美白對(duì)蝦和脊尾白蝦有較好的疾病預(yù)防和控制效果，采用復(fù)合免疫增強(qiáng)劑添加的顆粒飼料投喂養(yǎng)殖蝦，可取得良好的控制效果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l一、黃芩提取物從中藥材炒黃芩中提取，具體制備方法如下①?gòu)闹兴幍曩?gòu)買炒黃苓，取炒黃芩100g，充分粉碎后，加蒸餾水500mL4°C浸泡過夜；②將黃芩浸泡物用煎煮沸騰30min，補(bǔ)水250mL，再煎煮沸騰30min，用紗布濾去藥渣，取上清液；③濾出藥渣加水250ml，同②煎煮和濾去藥渣，再煎煮兩次；將3次煮出的藥液合并，進(jìn)一步煎煮濃縮至100mL，過濾除去顆粒，取澄清濾液；⑤在澄清濾出液中加入O.5MNaOH2mL，再加3倍體積95%乙醇，劇烈振蕩；靜置4h后，8000r/min離心15min，得褐色沉淀；⑦加入50mL水重新溶解沉淀，離心除去不溶物，再加O.5MNaOHlmL及3倍體積95%乙醇，同⑤離心沉淀，重復(fù)兩次，干燥得黃芩提取物制品。賣施例2黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法取上實(shí)施例l中制備的黃芩提取物干品2.5份，左旋咪唑3份，用攪拌機(jī)充分混合，陰涼避光處保存。左旋咪唑?yàn)楂F用鹽酸左旋咪唑(levamisolehydrochloride),購(gòu)自國(guó)內(nèi)廠家，其特征符合中國(guó)獸藥典2005版(I部)的要求。實(shí)施例3鑒于黃芩提取物主要成份為黃芩苷，故也可用黃芩替代黃芩提取物。黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法取黃芩苷2.5份，左旋咪唑3份，用攪拌機(jī)充分混合，陰涼避光處保存。黃芩苷(Baicalin)別名黃芩甙，購(gòu)自國(guó)內(nèi)廠家，產(chǎn)品的黃芩苷含量不低于95%，其余特征符合中國(guó)藥典2005版(I部)的要求。實(shí)施例4黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法取上實(shí)施例l中制備的黃芩提取物干品4.0份，左旋咪唑2份，用攪拌機(jī)充分混合，陰涼避光處保存。實(shí)施例5黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法取黃芩苷4.0份，左旋咪唑2份，用攪拌機(jī)充分混合，陰涼避光處保存。實(shí)施例6復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的肌肉注射對(duì)青蟹和其他蟹類的肌肉注射按下述方法進(jìn)行1)取實(shí)施例27制備得到的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑12g，用20mL蒸餾水溶解，加入lmL0.1M的Na2C03溶液，攪拌或振蕩至基本溶解，補(bǔ)水至IOOmL;2)將溶解免疫增強(qiáng)劑用0.2"m滅菌過濾器過濾除菌，無菌保存于4"C備用；3)使用前，應(yīng)將免疫增強(qiáng)劑溶液用25。C水浴預(yù)熱，用25'C水浴預(yù)熱的生理鹽水將免疫增強(qiáng)劑溶液稀釋5倍；注射劑量按青蟹得蟹的平均體重。按100g青蟹0.2mL劑量注射青蟹步足基部，注射前后注射部分均用酒精棉消毒；4)注射完畢后將青蟹暫養(yǎng)觀察O.5-lh，無異常后可放回養(yǎng)殖池中。實(shí)施例7復(fù)合免疫增強(qiáng)劑與鮮活餌料拌勻后投喂取實(shí)施例27制備得到免疫增強(qiáng)劑50g，用水100mL溶解，加入O.5mL0.1MNa2C03溶液助溶，與餌料魚100kg混合，加入面粉0.51kg充分混勻，投喂青蟹。實(shí)施例8復(fù)合免疫增強(qiáng)劑顆粒詞料制備方法按每噸飼料添加0.5kg實(shí)施例27制備得到免疫增強(qiáng)劑的用量制成顆粒飼料，可根據(jù)投喂對(duì)象分別采用青蟹、南美白對(duì)蝦或脊尾白蝦的基礎(chǔ)飼料，分別用于青蟹、南美白對(duì)蝦、脊尾白蟲下的疾病預(yù)防中。試驗(yàn)例l:越冬期鋸緣青蟹的疾病預(yù)防控制試驗(yàn)本實(shí)施方案與結(jié)果取自發(fā)明者越冬試驗(yàn)數(shù)據(jù)，試驗(yàn)方法和結(jié)果簡(jiǎn)述如下1)試驗(yàn)設(shè)復(fù)合黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑組和對(duì)照組，分別注射復(fù)合黃芩增強(qiáng)劑10組(實(shí)施例2)和生理鹽水，劑量按
發(fā)明內(nèi)容3肌肉注射法進(jìn)行。根據(jù)蟹的體重不同，各組在步足與背面交界處注射免疫多糖O.15—0.3mL，每組注射30只青蟹，注射后將青蟹放養(yǎng)于300cmX200cmX150cm網(wǎng)箱中；試驗(yàn)期間水溫為10±2°C，鹽度為19.5%。。注射后8、16、24、32d取樣3只，抽取青蟹血淋巴液，測(cè)定青蟹血清的相關(guān)免疫指標(biāo)。2)結(jié)果表明青蟹注射黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑后，血清堿性磷酸酶(ALP)和超氧化物歧化酶(SOD)活力均顯著高于對(duì)照組，其中ALP水平32d后未見明顯下降，S0D活力可維持16d，血清氧化酶(POD)和酚氧化酶(PO)活力也顯著升高，其中P0比對(duì)照提高了176。/。，表明免疫增強(qiáng)劑有顯著的免疫增強(qiáng)作用。統(tǒng)計(jì)使用免疫增強(qiáng)劑組和對(duì)照組的成活率，結(jié)果見表l。由表可見，養(yǎng)殖45d后免疫增強(qiáng)劑組的成活率為82%，對(duì)照組為61%，免疫組比對(duì)照組有顯著提高。表1免疫增強(qiáng)劑對(duì)鋸緣青蟹存活率的影響存活情況(45d)免疫增強(qiáng)劑組對(duì)照組~"宛亡個(gè)數(shù)/只^~~^存活個(gè)數(shù)/只2518存活率82%61%試驗(yàn)例2越冬期鋸緣青蟹的疾病預(yù)防控制生產(chǎn)性試驗(yàn)本實(shí)施方案與結(jié)果取自發(fā)明者越冬生產(chǎn)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)，試驗(yàn)方法和結(jié)果簡(jiǎn)述如下試驗(yàn)在蛇蟠島振華養(yǎng)殖公司進(jìn)行，該公司為大規(guī)模越冬養(yǎng)殖應(yīng)用試點(diǎn)，采用室內(nèi)水泥池養(yǎng)殖模式，試驗(yàn)期間水溫為15±2°C，鹽度為19.5%。。試驗(yàn)組注射黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑(實(shí)施例2)，對(duì)照不注射，養(yǎng)殖注射15d后測(cè)定相關(guān)免疫指標(biāo)，統(tǒng)計(jì)養(yǎng)殖30d各組青蟹的存活率。結(jié)果見表2。表2免疫增強(qiáng)劑在鋸緣青蟹生產(chǎn)性越冬池中的應(yīng)用結(jié)果免疫指標(biāo)CIS-2對(duì)照ALP/U/mL0.420.30PO/U/mL62.7819.80SOD/U,/mL1612.001140.90蛋白含量mg/mL121.60103.10SOD比活U/mgprot13.2611.07抗菌活力/U/mL0.140.14存活率88%59%由表可見，注射黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑組，15d后血清各免疫指標(biāo)比對(duì)照組有明顯提高，其中以血清中酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)和堿性磷酸酶(ALP)最為明顯，注射30d后免疫增強(qiáng)劑組青蟹存活率88。/。，對(duì)照組的存活率僅為59°/。。表明免疫增強(qiáng)劑可顯著提高青蟹越冬的成活率。^驗(yàn)例3黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑在青蟹和脊尾白蝦疾病預(yù)防控制中的效果本實(shí)施結(jié)果取自發(fā)明者制備免疫增強(qiáng)劑添加顆粒飼料結(jié)果。試驗(yàn)方法和結(jié)果簡(jiǎn)述如下取黃芩苷2.5份、左旋咪唑3份混合而成的復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，按每噸飼料0.5kg添加量添加至飼料中，基礎(chǔ)詞料采用南美白對(duì)蝦料配方，制備為顆粒飼料。生產(chǎn)使用量為每20畝大小蟹塘發(fā)病高峰前投喂飼料20kg，于早上投喂，連續(xù)投喂3-5d。調(diào)査使用者的效果。結(jié)果見表3。表3免疫增強(qiáng)劑詞料在秋季發(fā)病高峰青蟹或脊尾白蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用結(jié)果編號(hào)養(yǎng)殖種類效果簡(jiǎn)述有效性l上市青蟹存活提高SI~"2青蟹、脊尾白蟲下混養(yǎng)白蝦、青蟹發(fā)病減少有效3青蟹、脊尾白蝦混養(yǎng)白蝦、青蟹發(fā)病減少有效<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注下午投料。由表可見，投喂黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑飼料后，7個(gè)養(yǎng)殖點(diǎn)的青蟹或脊尾白蝦死亡有明顯減少，捕捉上市青蟹的活力也明顯增強(qiáng)。由于試驗(yàn)池前期，除一青蟹單養(yǎng)池外，均以投喂魚蟲下等鮮活餌料為主，為增加養(yǎng)殖品種的攝食，要求養(yǎng)殖戶在早上投喂飼料，下午投喂鮮活餌料。其中一個(gè)失敗的養(yǎng)殖戶，可能原因?yàn)榍捌诩好黠@發(fā)病，又錯(cuò)在下午投料，養(yǎng)殖品種不能及時(shí)進(jìn)食免疫增強(qiáng)飼料，反而造成殘餌污染水體，加劇了疾病。由本試驗(yàn)可以認(rèn)為，添加免疫增強(qiáng)劑的顆粒飼料可用于青蟹和脊尾白蝦發(fā)病高峰時(shí)候的疾病預(yù)防和控制。4青蟹、脊尾白蝦混養(yǎng)5青蟹、脊尾白蝦混養(yǎng)6青蟹單養(yǎng)7脊尾白蝦為主小計(jì)一權(quán)利要求1.黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，其特征在于該復(fù)合免疫增強(qiáng)劑包括黃芩提取物或黃芩苷與左旋咪唑，黃芩提取物或黃芩苷與左旋咪唑的重量份數(shù)如下黃芩提取物或黃芩苷2～4份左旋咪唑2.5～5份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，其特征在于黃芩提取物或黃苓苷與左旋咪唑的重量份數(shù)如下黃芩提取物或黃芩苷2.5份左旋咪唑3份。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，其特征在于黃苓提取物的'制備方法如下①取炒黃芩，充分粉碎后，加蒸餾水浸泡過夜；②煎煮沸騰30min，補(bǔ)水，再煎煮沸騰30min，用紗布濾去藥渣，取上清液；③補(bǔ)水，同步驟②煎煮和濾去藥渣，再煎煮兩兩次；④將3次煮出的藥液進(jìn)一步煎煮濃縮，過濾除去顆粒，取澄清濾出液；⑤加入NaOH，再加3倍體積95%乙醇，劇烈振蕩；靜置后，8000r/min離心15min，得褐色沉淀；⑦加入水重新溶解沉淀，離心除去不溶物，再加NaOH及3倍體積95X乙醇，'同步驟⑤離心沉淀，重復(fù)兩次，干燥得黃苓提取物制品。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃岑復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于該方法如下取黃芩提取物或黃芩苷和左旋咪唑用攪拌機(jī)充分混合，陰涼避光處保存。5.黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)注射劑，其特征在于該注射劑采用權(quán)利要求1或2所述的黃岑復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，加入蒸餾水溶解，再加入Na2C03溶液助溶，攪拌或振蕩，然后用生理鹽水稀釋，所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑占總重量百分比濃度為0.5%4.0%。6.黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)飼料，其特征在于該詞料包括權(quán)利要求1或2所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑和面粉或面粉、餌料魚，黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑采用Na2C03溶液助溶后與面粉或面粉、餌料魚混合，所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑占總重量百分比為4.5%10.0%;或者，按每噸飼料加入0.2kgL0kg權(quán)利要求1或2或3所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑的用量制成顆粒詞料。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑用于制備預(yù)防或治療養(yǎng)殖甲殼類傳染性疾病的藥物或飼料中的應(yīng)用。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑用于制備預(yù)防或治療養(yǎng)殖甲殼類病原性疾病的藥物或飼料中的應(yīng)用，其特征在于所述的傳染性疾病為病原性傳染性疾病。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑用于制備預(yù)防或治療養(yǎng)殖甲殼類病原性疾病的藥物或飼料中的應(yīng)用，其特征在于所述的傳染性疾病為白斑綜合征病毒感染、血卵渦鞭蟲感染以及其他纖毛蟲、弧菌的感染引起的病原性疾病。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑用于制備預(yù)防或治療養(yǎng)殖甲殼類傳染性疾病的藥物或飼料中的應(yīng)用，其特征在于所述的養(yǎng)殖甲殼類為青蟹、梭子蟹、南美白對(duì)蝦或脊尾白蝦。全文摘要本技術(shù)屬水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防控
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種養(yǎng)殖甲殼類免疫增強(qiáng)劑的制備和應(yīng)用方法。黃芩復(fù)合免疫增強(qiáng)劑，該復(fù)合免疫增強(qiáng)劑包括2～4份黃芩提取物或黃芩苷與2.5～5份左旋咪唑。該復(fù)合免疫增強(qiáng)劑可有效增強(qiáng)養(yǎng)殖青蟹非特異性免疫力，提高青蟹血清酚氧化酶、超氧化物歧化酶和堿性磷酸酶活力，提高青蟹對(duì)白斑綜合征病毒、弧菌和血卵渦鞭蟲等常見病原的抗病力。本復(fù)合免疫增強(qiáng)劑可通過注射或添加到青蟹鮮活餌料、顆粒飼料中應(yīng)用于青蟹養(yǎng)殖中，用于青蟹發(fā)病高峰期的疾病預(yù)防和控制，降低青蟹發(fā)病率和死亡率。本免疫增強(qiáng)劑添加到飼料中用于南美白對(duì)蝦和脊尾白蝦的疾病預(yù)防和控制。文檔編號(hào)A61K36/539GK101642488SQ20091010157公開日2010年2月10日申請(qǐng)日期2009年8月17日優(yōu)先權(quán)日2009年8月17日發(fā)明者問劉,潘清清,邱慶連,冬錢申請(qǐng)人:浙江省淡水水產(chǎn)研究所