一種促瘺管修復(fù)材料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料及其制備方法，該促瘺管修復(fù)材料包括內(nèi)芯和包裹在內(nèi)芯表面的外膜；促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形；所述內(nèi)芯包括絲蛋白；內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。該修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，利于置于瘺管中，一次性植入瘺管中，外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有良好的生物相容性和生物降解性，能被人體細(xì)胞吸收降解，無需二次手術(shù)取出；外膜具有引流作用；內(nèi)芯包括絲蛋白，具有海綿結(jié)構(gòu)，作為生物支架，具有修復(fù)作用，因此修復(fù)材料具有修復(fù)作用且使用方便。該修復(fù)材料能夠誘導(dǎo)組織再生和重塑，促進(jìn)肛瘺愈合；具有優(yōu)良的力學(xué)性能和較高孔隙率；采用該修復(fù)材料具有復(fù)發(fā)率低、炎癥感染率低。
【專利說明】一種促瘺管修復(fù)材料及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于瘺管修復(fù)材料【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種促瘺管修復(fù)材料及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]肛瘺又稱“肛管直腸瘺”，一般由原發(fā)性內(nèi)口、瘺道和繼發(fā)性外口三部分組成，是肛腸外科領(lǐng)域中常見的多發(fā)疾病之一。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為絕大多數(shù)肛瘺是繼發(fā)于肛腺一般化膿性感染所引起的肛門直腸周圍膿腫，膿腫破潰后不愈而形成瘺道；少數(shù)由特異性感染所致，如結(jié)核、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎的腸外表現(xiàn)等。臨床上肛瘺常見的癥狀是肛門部腫脹、疼痛和排出膿液。由于其內(nèi)口和原發(fā)病灶的影響，加之多次重復(fù)感染使瘺道內(nèi)炎性肉芽組織增生，迂曲狹窄，引流不暢，導(dǎo)致肛瘺常反復(fù)發(fā)作，而經(jīng)久不愈的肛瘺有發(fā)生癌變的可能。肛瘺的特點(diǎn)是不能自愈，治療主要依靠外科手術(shù)，包括肛瘺切除術(shù)、掛線療法、瘺道曠置引流術(shù)等手術(shù)方式。治療肛瘺的原則是將瘺道切開，形成敞開的創(chuàng)面，促使愈合。
[0003]目前，治療肛瘺時(shí)常用的引流材料有橡膠條、紗布條和橡膠管等，這些引流材料表面粗糙或材質(zhì)偏硬，需要不斷反復(fù)放入病人體內(nèi)，置入后常給患者增加痛苦和不便，而且應(yīng)用這些引流材料需要二次手術(shù)取出；然后再注入纖維蛋白膠，以腸線縫合關(guān)閉兩端瘺口，使得治療過程較為復(fù)雜。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種促瘺管修復(fù)材料及其制備方法，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有修復(fù)作用，且使用方便。
[0005]本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料，包括內(nèi)芯和包裹在所述內(nèi)芯表面的外膜；
[0006]所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形；
[0007]所述內(nèi)芯包括絲蛋白；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；
[0008]所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。
[0009]優(yōu)選地，所述促瘺管修復(fù)材料的縱軸長度為5cm?15cm ；
[0010]所述促瘺管修復(fù)材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ；
[0011]所述促瘺管修復(fù)材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ；
[0012]所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
[0013]本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟:
[0014]將絲蛋白溶液第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液；
[0015]將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜；
[0016]將絲蛋白溶液第二濃縮后稀釋，得到絲蛋白內(nèi)芯溶液；
[0017]將所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內(nèi)芯；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；
[0018]將所述內(nèi)芯和外膜復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料；
[0019]所述促瘺管修復(fù)材料包括內(nèi)芯和包裹在所述內(nèi)芯表面的外膜；
[0020]所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形。
[0021]優(yōu)選地，所述促瘺管修復(fù)材料的縱軸長度為5cm?15cm ;
[0022]所述促瘺管修復(fù)材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ；
[0023]所述促瘺管修復(fù)材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ；
[0024]所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
[0025]優(yōu)選地，所述絲蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%?10%。
[0026]優(yōu)選地，所述絲蛋白溶液第一濃縮至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%?40% ；
[0027]所述絲蛋白溶液第二濃縮至質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%?40%。
[0028]優(yōu)選地，所述丙三醇和蠶絲的質(zhì)量比為20?80:100。
[0029]優(yōu)選地，所述絲蛋白溶液第一濃縮的溫度為40°C?90°C ;
[0030]所述絲蛋白溶液第一濃縮的時(shí)間為2天?5天。
[0031]優(yōu)選地，所述絲蛋白溶液第二濃縮的溫度為55°C?65°C ;
[0032]所述絲蛋白溶液第二濃縮的時(shí)間為2.5天?3.5天。
[0033]優(yōu)選地，所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后還包括:將干燥得到的內(nèi)芯半成品進(jìn)行醇處理或水處理，得到內(nèi)芯。
[0034]本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料，包括內(nèi)芯和包裹在內(nèi)芯表面的外膜；所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形；所述內(nèi)芯包括絲蛋白；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，有利于置于瘺管中，其一次性植入瘺管中，外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有良好的生物相容性和生物降解性，可以被人體細(xì)胞吸收降解，無需二次手術(shù)取出；所述外膜具有引流作用；所述內(nèi)芯包括絲蛋白，具有海綿結(jié)構(gòu)，內(nèi)芯作為生物支架，具有修復(fù)作用，因此，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有修復(fù)作用，且使用方便。另外，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料能夠誘導(dǎo)組織再生和重塑，有效地促進(jìn)肛瘺的愈合；該促瘺修復(fù)材料具有優(yōu)良的力學(xué)性能和較高的孔隙率，使其適用于臨床；采用本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有復(fù)發(fā)率低、炎癥感染率低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料的抗縫線拉力> 3N/針；所述促瘺管修復(fù)材料的孔隙率大于90%。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0035]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備的海綿材料的原子力顯微鏡圖；
[0036]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制備的內(nèi)芯的掃描電鏡圖；
[0037]圖3為本發(fā)明實(shí)施例1的HE染色7天時(shí)的結(jié)果；
[0038]圖4為本發(fā)明實(shí)施例1的HE染色14天時(shí)的結(jié)果；
[0039]圖5為本發(fā)明實(shí)施例1的HE染色30天時(shí)的結(jié)果；
[0040]圖6為本發(fā)明實(shí)施例1的免疫組化切片14天時(shí)的結(jié)果；
[0041]圖7為本發(fā)明實(shí)施例1的免疫組化切片30天時(shí)的結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0042]本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料，包括內(nèi)芯和包裹在內(nèi)芯表面的外膜；
[0043]所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形；
[0044]所述內(nèi)芯包括絲蛋白；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；
[0045]所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。
[0046]本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料，包括外膜。在本發(fā)明中，所述外膜的厚度優(yōu)選為0.03mm?0.1mm，優(yōu)選為0.05mm?0.09mm。在本發(fā)明中，所述外膜的制備方法優(yōu)選包括以下步驟:
[0047]將絲蛋白溶液進(jìn)行第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液；
[0048]將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜。
[0049]本發(fā)明將絲蛋白溶液進(jìn)行第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液。在本發(fā)明中，所述絲蛋白溶液優(yōu)選將蠶絲依次進(jìn)行脫膠、溶解和透析，得到絲蛋白溶液。本發(fā)明對所述蠶絲的來源沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的蠶絲即可。在本發(fā)明中，所述蠶絲選自江浙地區(qū)的家蠶成繭。本發(fā)明對所述脫膠的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的脫膠技術(shù)方案即可。在本發(fā)明中，所述脫膠即脫盡蠶絲外圍的絲膠。本發(fā)明優(yōu)選采用Na2CO3溶液進(jìn)行脫膠；所述Na 2C03溶液的質(zhì)量濃度為0.04%?0.06% ;所述Na2CO3溶液中碳酸鈉溶液的體積和蠶絲的質(zhì)量比優(yōu)選為(5.5?6.5)L?150g。本發(fā)明優(yōu)選將Na2CO3溶液煮沸進(jìn)行脫膠；優(yōu)選煮沸25min?35min，更優(yōu)選為30min。本發(fā)明優(yōu)選將脫膠過程重復(fù)3次。本發(fā)明優(yōu)選將脫膠產(chǎn)物進(jìn)行洗滌5?7次。本發(fā)明優(yōu)選將洗滌產(chǎn)物烘干，得到脫膠絲蛋白。
[0050]完成烘干后，本發(fā)明將得到的脫膠絲蛋白進(jìn)行溶解和透析，得到絲蛋白溶液。本發(fā)明優(yōu)選采用三元溶液或溴化鋰溶液進(jìn)行溶解；所述三元溶液由氯化鈣、水和乙醇混合制得；所述氯化鈣、水和乙醇的物質(zhì)的量比優(yōu)選為1: (7?9): (1.5?2.5)，更優(yōu)選為1:8:2 ;所述脫膠絲蛋白的質(zhì)量和三元溶液的體積比優(yōu)選為Ig: (8?12)mL，更優(yōu)選為lg:10mL。在本發(fā)明中，所述溴化鋰溶液的摩爾濃度優(yōu)選為9mol/L?9.3mol/Lo在本發(fā)明中，所述溶解的時(shí)間優(yōu)選為4h?6h。本發(fā)明優(yōu)選采用截留分子量為3500的透析袋進(jìn)行透析；所述透析的時(shí)間為2.5天?3.5天，透析過程中優(yōu)選每2h換一次水。本發(fā)明優(yōu)選將透析后得到的溶液進(jìn)行離心；所述離心優(yōu)選采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的離心機(jī)進(jìn)行離心；所述離心的速度優(yōu)選為8500rpm?9500rpm，更優(yōu)選為9000rpm ;所述離心的時(shí)間優(yōu)選為15min?25min，更優(yōu)選為20min ;本發(fā)明優(yōu)選進(jìn)行離心兩次。得到的絲蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)選為6%?10%。
[0051]本發(fā)明優(yōu)選將絲蛋白溶液第一濃縮至質(zhì)量分?jǐn)?shù)15 %?40 %，更優(yōu)選為20 %?35%。本發(fā)明優(yōu)選將絲蛋白溶液置于烘箱中或置于通風(fēng)處進(jìn)行第一濃縮；所述第一濃縮的溫度優(yōu)選為40°C?90°C，更優(yōu)選為50°C?85°C ;所述第一濃縮的時(shí)間優(yōu)選為2天?5天，更優(yōu)選為3天或5天。完成第一濃縮后，本發(fā)明將得到的第一濃縮產(chǎn)物和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液。本發(fā)明優(yōu)選在磁力攪拌器的攪拌下進(jìn)行混合。在本發(fā)明中，所述丙三醇和蠶絲的質(zhì)量比為20?80:100 ;更優(yōu)選為30?70:100 ;所述丙三醇和第一濃縮產(chǎn)物混合的時(shí)間優(yōu)選為2h?24h，更優(yōu)選為5h?20h。
[0052]得到絲蛋白外膜溶液后，本發(fā)明將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜。本發(fā)明優(yōu)選采用外膜模具將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型。在本發(fā)明中，所述外膜模具優(yōu)選為實(shí)心圓柱形狀物或?qū)嵭膱A臺形狀物；所述外膜模具的材質(zhì)優(yōu)選為316不銹鋼或聚四氟乙烯。在本發(fā)明中，所述外膜模具的縱軸長度優(yōu)選為5cm?15cm，頂面直徑優(yōu)選為0.5cm?1cm，底面直徑優(yōu)選為0.1cm?0.4cm。本發(fā)明優(yōu)選采用外膜模具蘸取絲蛋白外膜溶液，干燥后取下，得到外膜。在本發(fā)明中，外膜模具上蘸有的絲蛋白外膜溶液優(yōu)選在50°C?70°C的烘箱中進(jìn)行干燥；外膜模具上蘸有的絲蛋白外膜溶液干燥的時(shí)間優(yōu)選為8h?48h，更優(yōu)選為24h?48h。在本發(fā)明中，所述外膜的厚度優(yōu)選為0.03mm?0.1mm,更優(yōu)選為0.05mm ?0.09mm。
[0053]本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料包括內(nèi)芯，其外表面包裹有外膜。在本發(fā)明中，所述內(nèi)芯包括絲蛋白；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明中，所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)，內(nèi)芯作為生物支架，能夠誘導(dǎo)組織再生和重塑，對瘺管具有修復(fù)作用；所述內(nèi)芯為圓柱形或圓臺形。
[0054]在本發(fā)明中，所述內(nèi)芯的制備方法包括以下步驟:
[0055]將絲蛋白溶液第二濃縮和稀釋，得到絲蛋白內(nèi)芯溶液；
[0056]將所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內(nèi)芯；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)。
[0057]本發(fā)明將所述絲蛋白溶液第二濃縮和稀釋，得到絲蛋白內(nèi)芯溶液。在本發(fā)明中，制備內(nèi)芯時(shí)所用的絲蛋白溶液與上述技術(shù)方案所述絲蛋白溶液一致，在此不再贅述。本發(fā)明優(yōu)選將絲蛋白溶液第二濃縮至質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%?40%，更優(yōu)選為15%?35%。本發(fā)明優(yōu)選將絲蛋白溶液置于烘箱中進(jìn)行第二濃縮；所述第二濃縮的溫度優(yōu)選為55°C?65°C，更優(yōu)選為60°C ;所述第二濃縮的時(shí)間優(yōu)選為2.5天?3.5天，更優(yōu)選為3天。完成第二濃縮后，本發(fā)明將第二濃縮產(chǎn)物稀釋，得到絲蛋白內(nèi)芯溶液；所述絲蛋白內(nèi)芯溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)選為2%?6%。本發(fā)明優(yōu)選在絲蛋白內(nèi)芯溶液中加入等體積的明膠；所述明膠的質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)選為0.8%?1.2% ;所述明膠可用于組織修復(fù)、替代、止血，具有生物相容性和可降解性。
[0058]得到絲蛋白溶液后，本發(fā)明將所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內(nèi)芯，所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)。本發(fā)明優(yōu)選采用內(nèi)芯模具將所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型。在本發(fā)明中，所述內(nèi)芯模具包括空心管狀物和底座；所述空心管狀物和底座相連接；所述空心管狀物為圓柱形或圓臺形。所述空心管狀物插入底座的凹槽中，用來固定空心管狀物。本發(fā)明將絲蛋白內(nèi)芯溶液置于內(nèi)芯模具中后進(jìn)行冷凍。本發(fā)明優(yōu)選在-20°C下進(jìn)行冷凍；優(yōu)選冷凍4h?48h，更優(yōu)選冷凍12h?40h。冷凍結(jié)束后，本發(fā)明將冷凍產(chǎn)物進(jìn)行干燥，得到內(nèi)芯。本發(fā)明優(yōu)選采用真空干燥機(jī)進(jìn)行干燥。在本發(fā)明中，冷凍產(chǎn)物進(jìn)行干燥的溫度優(yōu)選為4h?25h，更優(yōu)選為15h?25h ;冷凍產(chǎn)物進(jìn)行干燥的時(shí)間優(yōu)選為48h?72h，更優(yōu)選為68h?72h。
[0059]干燥后，本發(fā)明將所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后優(yōu)選還包括:將干燥得到的內(nèi)芯半成品進(jìn)行醇處理或水處理。在本發(fā)明中，醇處理時(shí)所采用的醇類化合物優(yōu)選包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的一種或多種。在本發(fā)明中，所述水處理的方式優(yōu)選為真空水蒸氣處理；所述醇處理的方式優(yōu)選為浸泡或真空醇蒸汽處理。在本發(fā)明的實(shí)施例中，本發(fā)明采用真空水蒸氣處理干燥后的冷凍產(chǎn)物；優(yōu)選真空水處理0.5h?24h。本發(fā)明采用真空醇蒸汽處理干燥后的冷凍產(chǎn)物；優(yōu)選真空醇蒸氣處理0.5h?24h。本發(fā)明將干燥后的冷凍產(chǎn)物浸泡在醇類化合物中；優(yōu)選浸泡30min?12h。
[0060]在本發(fā)明中，所述促瘺管修復(fù)材料的縱軸長度優(yōu)選為5cm?15cm，更優(yōu)選為8cm?12cm ；
[0061]所述促瘺管修復(fù)材料的頂面直徑優(yōu)選為0.5cm?1cm，更優(yōu)選為0.6cm?0.9cm ;
[0062]所述促瘺管修復(fù)材料的底面直徑優(yōu)選為0.1cm?0.4cm，更優(yōu)選為0.15cm?
0.35cm。
[0063]本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟:
[0064]將絲蛋白溶液第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液；
[0065]將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜；
[0066]將絲蛋白溶液第二濃縮后稀釋，得到絲蛋白內(nèi)芯溶液；
[0067]將所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內(nèi)芯；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；
[0068]將所述內(nèi)芯和外膜復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料；
[0069]所述促瘺管修復(fù)材料包括內(nèi)芯和包裹在所述內(nèi)芯表面的外膜；
[0070]所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形。
[0071]在本發(fā)明中，所述絲蛋白溶液和上述技術(shù)方案所述絲蛋白溶液的種類和來源一致，在此不再贅述。
[0072]在本發(fā)明中，所述外膜和內(nèi)芯的制備過程與上述技術(shù)方案所述外膜和內(nèi)芯的制備過程一致，在此不再贅述。
[0073]本發(fā)明將所述內(nèi)芯和外膜復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料。在本發(fā)明中，所述內(nèi)芯和外膜組合的方式優(yōu)選為牽引或擠壓。本發(fā)明對所述牽引或擠壓的方法沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的牽引或擠壓的技術(shù)方案即可。
[0074]本發(fā)明以大鼠作為試驗(yàn)動物，其為上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供的SD大鼠；本發(fā)明通過建立簡單動物模型:從大鼠臀部開始貫穿直達(dá)以上肌肉層為止，制得試驗(yàn)大鼠。本發(fā)明采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的HE染色法和免疫組化切片對試驗(yàn)大鼠的組織細(xì)胞進(jìn)行炎癥感染反應(yīng)的測試。測試結(jié)果表明:巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量明顯減少50%以上；術(shù)后兩個周到一個月:應(yīng)用此修復(fù)材料的組織炎癥反應(yīng)消失，開始長入血管和膠原纖維，成纖維細(xì)胞與肉芽組織增殖與迀移。
[0075]本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料，包括內(nèi)芯和包裹在內(nèi)芯表面的外膜；所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形；所述內(nèi)芯包括絲蛋白；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，有利于置于瘺管中，其一次性植入瘺管中，外膜具有良好的生物相容性和生物降解性，可以被人體細(xì)胞吸收降解，無需二次手術(shù)取出；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有管狀結(jié)構(gòu)，具有引流作用；所述內(nèi)芯包括絲蛋白，具有海綿結(jié)構(gòu)，內(nèi)芯作為生物支架，具有修復(fù)作用，因此，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有修復(fù)作用，且使用方便。另外，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有可控的生物降解性和優(yōu)良的生物相容性，誘導(dǎo)組織再生和重塑，有效地促進(jìn)肛瘺的愈合；該促瘺修復(fù)材料具有優(yōu)良的力學(xué)性能和較高的孔隙率，使其適用于臨床；采用本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有復(fù)發(fā)率低、炎癥感染率低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料的抗縫線拉力> 3N/針；所述促瘺管修復(fù)材料的孔隙率大于90%。
[0076]為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的一種促瘺管修復(fù)材料及其制備方法進(jìn)行詳細(xì)地描述，但不能將它們理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0077]實(shí)施例1
[0078]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結(jié)束后洗滌7次，重復(fù)處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0079]稱取1g脫膠絲素蛋白溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，透析后的溶液高速離心機(jī)9000rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，兩次；得到絲蛋白溶液，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6% ;然后將溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到20%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質(zhì)量比20%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0080]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取上述絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，該外膜的抗縫線拉力> 3N/針，具有良好的力學(xué)性能。
[0081]稱取1g脫膠絲素蛋白溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，得到絲蛋白溶液，其濃度為6%，然后將溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到20 %，用去離子水稀釋到2 %，得到絲蛋白內(nèi)芯溶液；
[0082]利用定制的合金圓臺形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，低端直徑為
0.3cm，將上述稀釋后的絲蛋白內(nèi)芯溶液注入到此模具中，在-20°C的低溫條件下經(jīng)過24小時(shí)的冷凍過程，進(jìn)行冷凍處理獲得冷凍體；對冷凍結(jié)晶體進(jìn)行冷凍處理48小時(shí)，得到成孔性良好海綿材料，其原子力顯微鏡觀察見圖1，圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備的海綿材料的原子力顯微鏡圖；由圖1可以看出:此海綿材料中含有較多納米線，納米結(jié)構(gòu)的形成有利于提高支架的成孔率。
[0083]將此絲蛋白海綿材料放入底部加有50%甲醇的真空干燥器中，蒸汽處理4小時(shí)，然后在去離子水中浸泡8小時(shí)，將甲醇浸泡出來，再次冷凍干燥即得到二級結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的絲蛋白海綿材料，即內(nèi)芯；
[0084]本發(fā)明對所得的內(nèi)芯進(jìn)行掃描電鏡分析，如圖2所示，圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制備的內(nèi)芯的掃描電鏡圖；由圖2可以看出:支架成孔性與孔連接性良好，孔徑大小在200 μπι?250 μm，優(yōu)良的多孔結(jié)構(gòu)有利于細(xì)胞的生長與組織的再生。
[0085]將上述內(nèi)芯夾持住，通過牽引作用引入外膜中，完成復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料。
[0086]本發(fā)明實(shí)施例1制備的促瘺管修復(fù)材料透明柔軟，同時(shí)結(jié)合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術(shù)取出，使用方便。
[0087]本發(fā)明采用HE染色法和免疫組化切片進(jìn)行試驗(yàn)，HE染色法測試結(jié)果如圖3、圖4和圖5所示，圖3為本發(fā)明實(shí)施例1的HE染色7天時(shí)的結(jié)果；圖4為本發(fā)明實(shí)施例1的HE染色14天時(shí)的結(jié)果；圖5為本發(fā)明實(shí)施例1的HE染色30天時(shí)的結(jié)果。免疫組化切片的測試結(jié)果如圖6和圖7所示，圖6為本發(fā)明實(shí)施例1的免疫組化切片14天時(shí)的結(jié)果，圖7為本發(fā)明實(shí)施例1的免疫組化切片30天時(shí)的結(jié)果。
[0088]HE染色法和免疫組化切片測試結(jié)果表明:巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量明顯減少50%以上；術(shù)后兩個周到一個月:應(yīng)用此材料的組織炎癥反應(yīng)消失，開始長入血管和膠原纖維，成纖維細(xì)胞與肉芽組織增殖與迀移。
[0089]實(shí)施例2
[0090]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結(jié)束后洗滌6次，重復(fù)處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0091]將15g脫膠絲素蛋白溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時(shí)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，去除溶液中的LiBr，透析后的溶液高速離心機(jī)9000rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，兩次，得到6%的絲蛋白溶液；
[0092]把上述絲素蛋白溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到30%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質(zhì)量比40%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0093]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，該外膜具有良好的力學(xué)性能。
[0094]上述濃縮后的絲蛋白溶液，用去離子水稀釋到2%，利用定制的合金的圓錐形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，底端直徑為0.3cm，將上述稀釋后的絲蛋白溶液注入到此模具中，在-20°C的低溫條件下冷凍12小時(shí)，然后利用真空干燥機(jī)真空干燥處理48小時(shí)，得到成孔性良好的海綿材料；
[0095]將上述海綿材料放入底部加有水的真空干燥器中，真空處理6小時(shí)，獲得不溶于水的絲蛋白促瘺管修復(fù)的生物海綿材料，即內(nèi)芯；
[0096]將上述絲蛋白海綿材料夾持住，通過擠壓作用引入外膜中，完成復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料。
[0097]本發(fā)明實(shí)施例2制備的促瘺管修復(fù)材料透明柔軟，同時(shí)結(jié)合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術(shù)取出，具有修復(fù)作用，且使用方便。
[0098]實(shí)施例3
[0099]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結(jié)束后洗滌7次，重復(fù)處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的絲素蛋白；
[0100]稱取經(jīng)脫膠處理后的蠶絲15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時(shí)；然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，去除溶液中的LiBr，透析后的溶液高速離心機(jī)9000rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，兩次，從而得到6%的絲蛋白溶液，把上述絲素蛋白溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到30%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質(zhì)量比60%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲素蛋白外膜溶液；
[0101]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取絲素蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，具有良好的力學(xué)性能，其縫線拉力>3N/針。
[0102]利用定制的合金的圓錐形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，底端直徑為0.3cm,將上述濃縮液稀釋到5%后注入到此模具中，在-20°C的低溫條件下冷凍24小時(shí)，然后利用真空干燥機(jī)真空干燥處理72小時(shí)，得到成孔性良好的海綿材料；
[0103]將上述絲蛋白海綿材料浸泡在80%的乙醇溶液中半小時(shí)，得到不溶性絲蛋白海綿材料，即內(nèi)芯；
[0104]將制備好的絲蛋白海綿材料夾持住，通過牽引方式引入外膜中，完成復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料。
[0105]本發(fā)明實(shí)施例3制備的促瘺管修復(fù)材料透明柔軟，同時(shí)結(jié)合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術(shù)取出，具有修復(fù)作用，且使用方便。
[0106]實(shí)施例4
[0107]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結(jié)束后洗滌5次，重復(fù)處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白。
[0108]將脫膠絲素蛋白15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時(shí)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，去除溶液中的LiBr，透析后的溶液高速離心機(jī)9000rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，兩次，得到6%左右的絲蛋白溶液。把上述絲素蛋白溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到30 %。將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質(zhì)量比40 %的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻。
[0109]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取混合溶液，放置在60°C烘箱中培育6h，干燥取下得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜；
[0110]利用定制的合金的圓錐形模具，模具的長度為12cm，頂端直徑為0.5cm，低端直徑為0.3cm，將上述濃縮液稀釋到5%再與I %的明膠溶液同體積混合，放置在4°C條件下12h，隨后注入到此模具中，在_20°C的低溫條件下冷凍24小時(shí)，然后利用真空干燥機(jī)真空干燥處理72小時(shí)，得到絲素/明膠海綿材料；
[0111]將上述絲素/明膠海綿材料真空水處理2小時(shí)，將其利用拉伸裝置雙方向進(jìn)行拉伸100%，得到Silk I和Silk II結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿材料，即內(nèi)芯；
[0112]將內(nèi)芯夾持住，通過牽引作用引入絲蛋白外膜中，完成復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料。
[0113]本發(fā)明實(shí)施例4制備的促瘺管修復(fù)材料透明柔軟，同時(shí)結(jié)合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術(shù)取出，具有修復(fù)作用，且使用方便。
[0114]實(shí)施例5
[0115]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結(jié)束后洗滌7次，重復(fù)處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0116]稱取1g脫膠絲素蛋白溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，透析后的溶液高速離心機(jī)9000rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，兩次；得到絲蛋白溶液，其質(zhì)量濃度為6% ；
[0117]將溶液放置在玻璃模具中60°C烘箱中緩慢濃縮3天，使之質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到20%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質(zhì)量比20%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0118]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取上述絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中待干燥后取下，得到外膜，該外膜是透明的絲蛋白薄膜，具有良好的力學(xué)性能。
[0119]稱取1g脫膠絲素溶于10mL三元溶液中(CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，得到絲素蛋白溶液，其濃度為6 %，取上述絲蛋白溶液15mL，放入聚乙烯培養(yǎng)皿中，在濕度為60%的室溫條件下24小時(shí)成膜，隨后將絲素膜溶解于15mL的去離子水中，將溶膜液放置4°C冰箱使之充分自組裝；48小時(shí)后取出溶膜液重新注入培養(yǎng)皿中自然成膜，反復(fù)4次后得到絲蛋白納米線水溶液；將該溶膜液稀釋到2%，放置在4°C條件下培育12h，隨后注入到模具中，在-20°C的低溫條件下冷凍24小時(shí)，然后利用真空干燥機(jī)真空干燥處理72小時(shí)，得到絲素海綿材料；將絲素海綿材料真空水處理2小時(shí)，再將其利用拉伸裝置雙向拉伸100%，得到Silk I和Silk II結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿材料，即內(nèi)芯；
[0120]將內(nèi)芯夾持住，通過牽引作用引入絲蛋白外膜中，完成復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料。
[0121]本發(fā)明實(shí)施例5制備的促瘺管修復(fù)材料透明柔軟，同時(shí)結(jié)合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術(shù)取出，具有修復(fù)作用，且使用方便。
[0122]實(shí)施例6
[0123]將150g蠶絲置入6L濃度為0.05 %的碳酸鈉水溶液中煮沸30min，結(jié)束后洗滌5?7次，重復(fù)處理3次，脫盡蠶絲外圍的絲膠，烘干后得到純凈的脫膠絲素蛋白；
[0124]將脫膠絲素蠶絲15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理6小時(shí)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，透析后的溶液高速離心機(jī)9000rpm轉(zhuǎn)速下離心20min兩次，把上述絲素蛋白溶液放置在通風(fēng)處中(風(fēng)機(jī)角度90度，濕度40%的條件下)緩慢揮發(fā)濃縮5d，使之質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到30%，將濃縮液倒入燒杯中，向其加入質(zhì)量比60%的甘油，磁力攪拌器攪拌，使之混合均勻，得到絲蛋白外膜溶液；
[0125]在縱軸長度為10cm，直徑為0.4cm的聚四氟乙烯圓柱形模具上夾持沾取絲蛋白外膜溶液，放置在60°C烘箱中培育12h，干燥取下，得到外膜；
[0126]稱取經(jīng)脫膠處理后的蠶絲15g溶解于10mL濃度為9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解處理4小時(shí)，然后用截留分子量3500的透析袋浸在去離子水中透析3天，期間每兩小時(shí)換一次水，去除溶液中LiBr，透析后的溶液高速離心機(jī)9000rpm轉(zhuǎn)速下離心20min，兩次，得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的絲蛋白溶液；
[0127]取上述絲蛋白溶液15mL，放入聚乙烯培養(yǎng)皿中，在濕度為60%的室溫條件下24小時(shí)成膜，隨后將絲素膜溶解于15mL的去離子水中，將溶膜液放置4°C冰箱使之充分自組裝；48小時(shí)后取出溶膜液重新注入培養(yǎng)皿中自然成膜，反復(fù)3次后得到絲蛋白納米線水溶液；將該溶膜液稀釋到5%，放置在4°C條件下培育12h ;隨后注入到模具中，在_20°C的低溫條件下冷凍24小時(shí)，然后利用真空干燥機(jī)真空干燥處理72小時(shí)，得到絲素蛋白海綿材料；
[0128]將上述絲素蛋白海綿材料真空水處理2小時(shí)，將其利用拉伸裝置雙方向進(jìn)行拉伸100%，得到Silk I和Silk II結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿材料，即內(nèi)芯；
[0129]將內(nèi)芯夾持住，通過牽引作用引入絲蛋白外膜中，完成復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料。
[0130]本發(fā)明實(shí)施例6制備的促瘺管修復(fù)材料透明柔軟，同時(shí)結(jié)合牢固不易脫落，其一次性植入瘺道中，無需縫線固定和二次手術(shù)取出，具有修復(fù)作用，且使用方便。
[0131 ]由以上實(shí)施例可知，本發(fā)明提供了一種促瘺管修復(fù)材料，包括內(nèi)芯和包裹在內(nèi)芯表面的外膜；所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形；所述內(nèi)芯包括絲蛋白；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)；所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形，與瘺管形狀相似，有利于置于瘺管中，其一次性植入瘺管中，外膜包括絲蛋白和丙三醇，具有良好的生物相容性和生物降解性，可以被人體細(xì)胞吸收降解，無需二次手術(shù)取出；所述外膜具有引流作用；所述內(nèi)芯包括絲蛋白，具有海綿結(jié)構(gòu)，內(nèi)芯作為生物支架，具有修復(fù)作用，因此，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有修復(fù)作用，且使用方便。另外，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有可控的生物降解性和優(yōu)良的生物相容性，誘導(dǎo)組織再生和重塑，有效地促進(jìn)肛瘺的愈合；該促瘺修復(fù)材料具有優(yōu)良的力學(xué)性能和較高的孔隙率，使其適用于臨床；采用本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料具有復(fù)發(fā)率低、炎癥感染率低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料的抗縫線拉力> 3N/針；所述促瘺管修復(fù)材料的孔隙率大于90%。
[0132]另外，本發(fā)明提供的促瘺管修復(fù)材料通過手術(shù)或內(nèi)鏡方式置入肛瘺瘺道中，在手術(shù)過程沒有明顯并發(fā)癥，無絕對的手術(shù)禁忌，而且失禁等手術(shù)并發(fā)癥非常小。
[0133]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種促瘺管修復(fù)材料，包括內(nèi)芯和包裹在所述內(nèi)芯表面的外膜； 所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形； 所述內(nèi)芯包括絲蛋白；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)； 所述外膜包括絲蛋白和丙三醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促瘺管修復(fù)材料，其特征在于，所述促瘺管修復(fù)材料的縱軸長度為5cm?15cm ； 所述促瘺管修復(fù)材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ； 所述促瘺管修復(fù)材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ； 所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
3.一種促瘺管修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟: 將絲蛋白溶液第一濃縮后和丙三醇混合，得到絲蛋白外膜溶液； 將所述絲蛋白外膜溶液注塑成型，干燥后得到外膜； 將絲蛋白溶液第二濃縮后稀釋，得到絲蛋白內(nèi)芯溶液； 將所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后得到內(nèi)芯；所述內(nèi)芯具有海綿結(jié)構(gòu)； 將所述內(nèi)芯和外膜復(fù)合，得到促瘺管修復(fù)材料； 所述促瘺管修復(fù)材料包括內(nèi)芯和包裹在所述內(nèi)芯表面的外膜； 所述促瘺管修復(fù)材料為圓柱形或圓臺形。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述促瘺管修復(fù)材料的縱軸長度為5cm ?15cm ； 所述促瘺管修復(fù)材料的頂面直徑為0.5cm?Icm ； 所述促瘺管修復(fù)材料的底面直徑為0.1cm?0.4cm ； 所述外膜的厚度為0.03mm?0.1mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%?10%。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液第一濃縮至質(zhì)量分?jǐn)?shù) 15%?40% ； 所述絲蛋白溶液第二濃縮至質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%?40%。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述丙三醇和蠶絲的質(zhì)量比為20?80:100ο
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液第一濃縮的溫度為40°C?90°C ； 所述絲蛋白溶液第一濃縮的時(shí)間為2天?5天。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白溶液第二濃縮的溫度為55°C?65°C ； 所述絲蛋白溶液第二濃縮的時(shí)間為2.5天?3.5天。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述絲蛋白內(nèi)芯溶液注塑成型，再冷凍和干燥后還包括:將干燥得到的內(nèi)芯半成品進(jìn)行醇處理或水處理，得到內(nèi)芯。
【文檔編號】A61B17/00GK104491933SQ201510023518
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2015年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月16日
【發(fā)明者】吳昊, 呂強(qiáng), 林莎莎 申請人:絲科普樂（北京）生物科技有限公司