專利名稱：一種中藥降血糖藥及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是02138362.6發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，原案申請(qǐng)日為2002年9月29日。本發(fā)明涉及利用傳統(tǒng)中藥制備降血糖藥及其制備方法，尤其涉及采用現(xiàn)代提取、分離技術(shù)，從中藥鬼箭羽中獲得具有降血糖作用的有效部位及有效成分，制備降血糖藥。

背景技術(shù)：
糖尿病為一種常見病，難以治愈，患者需要長(zhǎng)期服藥，糖尿病并發(fā)癥常導(dǎo)致嚴(yán)重后果。糖尿病中醫(yī)辨證屬于“消渴”病范疇。究其病機(jī)主要在于陰津虧損，燥熱偏勝，而以陰虛為本，燥熱為標(biāo)。燥熱內(nèi)生，津干液枯，氣血澀滯，久而為瘀。目前臨床常用的治療藥物有鹽酸二甲雙胍和降糖靈(苯乙雙胍)，均為雙胍類降糖藥物。降糖靈主要副作用是胃腸道反應(yīng)，有厭食、口苦、惡心、嘔吐、腹脹和腹瀉等癥狀，因經(jīng)肝臟代謝，易誘發(fā)乳酸酸中毒。雖然二甲雙胍誘發(fā)乳酸酸中毒的可能性比降糖靈顯著減少，但仍有此副作用，而且大部分發(fā)生在對(duì)此藥有禁忌癥患者，如腎功能衰竭患者。因此，需要研發(fā)療效好、副作用少且小、標(biāo)本兼治的降血糖中藥現(xiàn)代制劑。
鬼箭羽為衛(wèi)矛科植物衛(wèi)矛Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.的翅狀附屬物或其嫩枝，味酸甘澀，性微寒，能通經(jīng)活血。國(guó)內(nèi)外有關(guān)其化學(xué)成分的研究?jī)H見甾醇、黃酮類化合物的報(bào)道，參見陳科等，衛(wèi)矛科植物鬼箭羽中的甾體成分[J].中草藥(Chin Trait Herb Drugs)，1983，14(9)385-388；陳科等，鬼箭羽中的黃烷成分[J].中草藥(Chin Trait Herb Drugs)，1986，17(3)97-100；Susumu Kitanaka et al.Cytotoxic cardenolides from woods of Euonymus alata[J].Chem Pharm Bull，1996，44(3)615-617。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是從鬼箭羽中，研究開發(fā)療效好、副作用少且小的降血糖的有效部位及有效成分的中藥現(xiàn)代制劑。副作用顯著減少并降低，使得即使患者長(zhǎng)期服用仍具有相當(dāng)?shù)陌踩?；再加上具有?biāo)本兼治功能，能夠減輕或抑制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題還包括研究制備上述降血糖中藥組合物的提取、分離方法，該方法應(yīng)重現(xiàn)性好，能夠用于工業(yè)化生產(chǎn)。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下。
一種降血糖的中藥組合物，其特征在于主要由鬼箭羽的乙酸乙酯提取物或萃取物組成。
所述中藥組合物，其特征在于鬼箭羽的乙酸乙酯提取物或萃取物主要由酚酸化合物和/或萜類化合物組成。
上述中藥組合物，其特征在于酚酸化合物主要為對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸和/或3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸。
所述中藥組合物，其特征在于所述各類組分或化學(xué)成分可以與藥學(xué)上適合載體混合，制成各種制劑。
一種降血糖的中藥組合物制備方法，其特征在于 1)取鬼箭羽藥材，用水、乙醇和/或乙酸乙酯提取，濃縮后得水提取濃縮物、乙醇提取濃縮物或乙酸乙酯提取濃縮物，或其相應(yīng)的濃縮物； 2)水提取濃縮物或乙醇提取濃縮物，或主要用水或乙醇提取的濃縮物，用乙酸乙酯萃取，得主要含萜類與酚酸類成份的乙酸乙酯萃取物；乙酸乙酯萃取物，用15-60目聚酰胺進(jìn)行層析，用含水乙醇梯度洗脫，其50％的乙醇洗脫部位，得到萜類化合物與酚酸類混合物； 或者，水提取濃縮物或乙醇提取濃縮物，或主要用水或乙醇提取的濃縮物，用15-60目聚酰胺進(jìn)行層析，用含水乙醇梯度洗脫，其50％的乙醇洗脫部位，再用乙酸乙酯萃取，得到萜類化合物與酚酸類混合物； 或者，乙酸乙酯提取濃縮物或主要用乙酸乙酯提取的濃縮物，用15-60目聚酰胺進(jìn)行層析，用含水乙醇梯度洗脫，其50％的乙醇洗脫部位，得到萜類化合物與酚酸類混合物。
前述方法，其特征在于主要用水或乙醇提取或主要用乙酸乙酯提取，是指其提取液中水或乙醇或乙酸乙酯含量為30～99％，以51～99％為好；主要用乙酸乙酯提取，是指其提取液中乙酸乙酯含量為30～99％，以51～99％為好。
上述方法的特征在于聚酰胺層析的50％的乙醇洗脫部位，再經(jīng)Sephadex LH-20層析，用氯仿∶甲醇1∶1洗脫，先流出萜類化合物，后流出酚酸類組分。
所述方法的特征在于將酚酸類組分進(jìn)行硅膠層析，用氯仿-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱層析分離，用氯仿∶甲醇2∶1梯度洗脫，分別得到化合物對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸和3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸。
鬼箭羽的乙酸乙酯提取物、乙酸乙酯萃取物、萜類和/或酚酸類組份在制備降血糖藥品中的應(yīng)用。
對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸和/或3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸在制備降血糖藥品中的應(yīng)用。
本發(fā)明以其活性為先導(dǎo)，對(duì)鬼箭羽降糖的有效部位和活性成分進(jìn)行了追蹤。實(shí)驗(yàn)從不同提取部位著手，選用正常的和化學(xué)性糖尿病小鼠模型，在整體水平上進(jìn)行降糖藥效學(xué)比較，初步確定鬼箭羽降糖的有效部位為鬼箭羽水煎液的乙酸乙酯萃取部位，再進(jìn)行聚酰胺柱層析，得其50％的乙醇洗脫部位具有良好療效。從50％的乙醇洗脫部位分離得到具有療效的四個(gè)酚酸類成分，它們的結(jié)構(gòu)經(jīng)化學(xué)方法和波譜分析確定為對(duì)羥基苯甲酸(簡(jiǎn)稱EA-1)，3，4-二羥基苯甲酸(簡(jiǎn)稱EA-2)，3-甲氧基-4-羥基苯甲酸(簡(jiǎn)稱EA-3)，3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸(簡(jiǎn)稱EA-4)。四個(gè)化合物均為首次從該植物中分離得到。
糖尿病是胰島細(xì)胞受損，胰島素分泌不足而引起的代謝紊亂的一種內(nèi)分泌疾病。一般認(rèn)為降血糖的作用機(jī)制主要涉及兩個(gè)方面一是促進(jìn)胰島素的分泌和釋放或是抑制胰高血糖素的分泌；二是影響胰島素受體后代謝的某些環(huán)節(jié)，主要是抑制肝臟的糖異生作用，其目的均是降低并控制血糖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示鬼箭羽對(duì)健康小鼠血糖無明顯影響，提示其沒有明顯的刺激胰島素釋放作用或胰島素樣作用；鬼箭羽中提取分離的有效部位及有效成分在低劑量條件下，對(duì)四氧嘧啶所致的血糖升高有明顯的降低作用，這表明其均有修復(fù)受損傷的β細(xì)胞的功能或降低機(jī)體對(duì)胰島素的拮抗性。
糖尿病中醫(yī)辨證屬于“消渴”病范疇。究其病機(jī)主要在于陰津虧損，燥熱偏勝，而以陰虛為本，燥熱為標(biāo)。燥熱內(nèi)生，津干液枯，氣血澀滯，久而為瘀。故治療糖尿病當(dāng)以養(yǎng)陰清熱、活血化瘀為主。鬼箭羽性味苦寒，故能堅(jiān)陰清熱，又有活血化瘀之功。鬼箭羽中提取分離的有效部位及有效成分，其治消渴能兼顧標(biāo)本，切中消渴病病機(jī)。
本發(fā)明研究了鬼箭羽的前述50％的乙醇洗脫部位、萜類、酚酸類以及EA-2、EA-3對(duì)糖尿病小鼠血糖、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的影響。
昆明種小鼠，體重22-25克，雌雄各半，由本校動(dòng)物房提供。健康小鼠(體重22～25g)飼養(yǎng)3日后禁食16小時(shí)(飲水不限)，腹腔注射四氧嘧啶(用新鮮蒸餾水配制，濃度1％，劑量200mg/kg)，正常飼養(yǎng)，72小時(shí)后，測(cè)空腹血糖值(FSG)。選取FSG＞180mg/kg的小鼠為糖尿病小鼠。
給藥及測(cè)定造模前先隨機(jī)選取健康小鼠12只作為正常組。其他小鼠造模后選取糖尿病小鼠84只，每組12只，按空腹血糖值隨機(jī)分為7組。各治療組I(50％乙醇)3.2mg/Kg；II(萜類)3.00mg/Kg；III(酚酸)3.00mg/Kg；IV(EA3)1.5mg/Kg；V(EA2)1.5mg/Kg，正常組和模型組給以等量0.5％的CMC-Na，陽(yáng)性藥組給與降糖靈(110mg/kg)。給藥方式按0.2ml/10g灌胃。連續(xù)給藥7天，末次給藥前2小時(shí)禁食，給藥后兩小時(shí)眼眶后靜脈叢取血，按試劑盒說明測(cè)血糖、MDA、SOD。
對(duì)血糖的影響表1數(shù)據(jù)表明鬼箭羽乙酸乙酯部位聚酰胺柱用50％乙醇洗脫部位以及EA-2具有明顯的降糖作用。實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照藥降糖靈是按片劑的標(biāo)示量計(jì)算，其它試驗(yàn)劑量則是按提取得率換算(以生藥4g/kg為參考，提取物的得率×4g/kg)。
表1、鬼箭羽各部位對(duì)四氫嘧啶誘導(dǎo)糖尿病小鼠血糖的的作用(n＝12，X±S) 組別劑量 (mg/kg) 血糖值(mg/dl)血糖下降百分率(％)給藥前給藥后 正常組/138.70±22.10119.95±25.9113.5 模型組/542.5±202.19531.18±190.642.1 降糖靈110544.6±199.53327.4±190.42*##39.9 50％乙醇3.20545.1±198.43371.82±153.81*#31.8 萜類3.00542.2±186.21409.37±167.8224.5 酚酸3.00547.8±185.88542.88±152.320.9 EA-31.50552.7±199.72421.65±242.8023.7 EA-21.50572.7±214.17353.48±139.79*35.9 *P＜0.05vs模型組；#P＜0.05；##P＜0.01vs正常組 對(duì)丙二醛(MDA)的影響機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊程度萜類＜EA-3＜酚酸＜50％乙醇＜EA-2＜降糖靈。參見表2。
MDA主要測(cè)試及反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度，間接反應(yīng)機(jī)體細(xì)胞受損程度。與SOD的測(cè)定配合，SOD活力的高低反映機(jī)體清除氧自由基的能力，MDA的高低能間接反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。數(shù)值越高，說明機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度越嚴(yán)重。
表2、鬼箭羽各部位對(duì)對(duì)丙二醛(MDA)的影響(n＝12，X±S)劑量(mg/kg) MDA含量 nmol/ml 正常組/ 25.19±3.57 模型組/ 31.90±6.18 降糖靈110 39.29±14.98 I3.2 23.73±8.57* II3 20.65±6.28*** III3 24.67±6.48* IV1.5 22.76±5.15** V1.5 27.20±7.48 *P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.01vs模型組 對(duì)超氧化物歧化酶(SOD)的影響清除超氧陰離子自由基(O2.)能力酚酸＞50％乙醇＞EA-3＞萜類＞EA-2，而降糖靈無此作用。參見表3。
糖尿病患者常伴有體內(nèi)過氧化脂質(zhì)水平明顯升高而清除自由基的超氧化物歧化酶活性低下，自由基增多可加重糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。SOD對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，其活力的高低反映機(jī)體清除超氧陰離子自由基的能力。
表3、鬼箭羽各部位對(duì)超氧化物歧化酶的影響(n＝12，X±S) 組別 劑量 (mg/kg) SOD活力 (NU/ml) 正常組/ 172.22±69.82 模型組/ 148.32±46.66 降糖靈110 135.61±101.90 I3.2 382.47±55.67*** II3 191.94±97.80 III3 465.81±53.64*** IV1.5 250.66±96.69* V1.5 163.50±82.17 *P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.01vs模型組 實(shí)驗(yàn)表明鬼箭羽的前述50％的乙醇洗脫部位以及EA-2，降低糖尿病小鼠血糖作用顯著，使用劑量小，而萜類、酚酸類及EA-3則對(duì)MDA、SOD影響明顯。綜合比較，鬼箭羽降血糖的有效部位及有效成分制成的中藥現(xiàn)代制劑，副作用顯著減少并降低，使得即使患者長(zhǎng)期服用仍具有相當(dāng)?shù)陌踩?。更為理想的是，與降糖靈僅治標(biāo)不治本相比，本發(fā)明鬼箭羽中藥制劑具有標(biāo)本兼治功能，能夠減輕或抑制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。
本發(fā)明研究的制備上述降血糖中藥組合物的提取、分離方法，重現(xiàn)性好，能夠用于工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施例方式 儀器與試藥 ZK-82A型真空干燥箱、AE240電子分析天平、KQ-100DE醫(yī)用數(shù)控超聲儀、恒溫水浴箱、減壓泵。7550紫外可見光分光光度計(jì)(上海分析儀器廠)、離心沉降器(上海手術(shù)器械廠)。所用試劑均為分析純。柱層析及薄層層析硅膠均為青島海洋化工廠產(chǎn)品。聚酰胺層析和聚酰胺薄層層析為中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。
藥材和藥品 鬼箭羽藥材購(gòu)自南京市藥材公司，經(jīng)鑒定為衛(wèi)矛科植物Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.的枝條和翅狀附屬物。
優(yōu)降糖為天津市藥物研究院藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)9902311。
降糖靈，江蘇省金壇市制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)9901202、20011201。
四氧嘧啶，美國(guó)SIGMA公司生產(chǎn)。
葡萄糖試劑盒，上海榮盛生物技術(shù)公司生產(chǎn)；批號(hào)20020503 MDA試劑盒，南京建成生物工程研究生產(chǎn)；批號(hào)20020715 SOD試劑盒，南京建成生物工程研究生產(chǎn)；批號(hào)20020725 動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重22～25g和18～22g。由中國(guó)藥科大學(xué)動(dòng)物中心提供。
實(shí)施例1 取鬼箭羽藥材5kg，用6倍水量煎煮2次，每次2小時(shí)，趁熱過濾。提取液濃縮后得浸膏250g，浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇萃取。使其分成五個(gè)部位，分別為水浸膏組(I)、石油醚組(II)、乙酸乙酯組(III)、正丁醇組(IV)、萃后殘余組(V)。
各提取部位對(duì)造模小鼠的降糖作用 取健康小鼠70只(體重18～22g)按體重隨機(jī)分為七組，每組10只。按0.2ml/10g灌胃給藥，每天一次，連續(xù)7天。治療組均按相當(dāng)于生藥量4g/kg給藥(I400mg/Kg；II1.00mg/Kg；III17.20mg/Kg；IV38.60mg/Kg；V344.00mg/Kg)，對(duì)照組給等量的0.5％CMC-Na，陽(yáng)性藥組給優(yōu)降糖(100mg/kg)。末次給藥前開始禁食2小時(shí)(飲水不限)，給藥2小時(shí)后測(cè)空腹血糖值(FSG)。
造模實(shí)驗(yàn)方法，參見黃敏等，不同禁食時(shí)間對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的血清胰島素和血糖的影響，中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32(3)221-223。
健康小鼠(體重22～25g)飼養(yǎng)3日后禁食16小時(shí)(飲水不限)，腹腔注射四氧嘧啶(用新鮮蒸餾水配制，濃度1％，劑量200mg/kg)，正常飼養(yǎng)，72小時(shí)后，測(cè)空腹血糖值(FSG)。選取FSG＞180mg/kg的小鼠為糖尿病小鼠。
造模前先隨機(jī)選取健康小鼠12只作為正常組。其他小鼠造模后選取糖尿病小鼠84只，按空腹血糖值隨機(jī)分為7組。各治療組按相當(dāng)于鬼箭羽生藥量4g/kg給藥(I400mg/Kg；II1.00mg/Kg；III17.20mg/Kg；IV38.60mg/Kg；V344.00mg/Kg)，正常組和模型組給以等量0.5％的CMC-Na，陽(yáng)性藥組給與降糖靈(110mg/kg)。給藥方式按0.2ml/10g灌胃。連續(xù)給藥7天，末次給藥前2小時(shí)禁食，給藥后兩小時(shí)測(cè)FSG。
各提取部位對(duì)健康小鼠的血糖影響 由表4可見鬼箭羽各提取部位對(duì)健康小鼠的降糖作用與對(duì)照組比較無明顯差異P＞0.05。
表4.鬼箭羽各提取部位對(duì)健康小鼠的降糖作用(n＝12，X±S)組別 劑量(mg/kg) FSG(mg/dl)正常組 / 45.99±14.59優(yōu)降糖 100.00 25.06±11.78**I 400.00 51.26±17.89II 1.0040.86±19.49III17.20 32.82±16.44IV 38.60 37.71±19.45V 334.00 41.50±11.53 **P＜0.05vs正常組 各提取部位對(duì)四氧嘧啶所致的化學(xué)性糖尿病小鼠血糖的影響 鬼箭羽的乙酸乙酯部位(III)、水提取部位(I)、萃取后殘余水部位(V)降糖作用具有顯著意義，而石油醚部份(II)、正丁醇部位(IV)作用不顯著。參見表5。研究多次證明水提取部位降糖作用明確，乙酸乙酯部位與水提取部位等效，故確定乙酸乙酯部位為進(jìn)一步研究對(duì)象。
表5、提取各部位對(duì)四氧嘧啶所造成的化學(xué)性糖尿病 小鼠血糖的影響(n＝12，X±S)組別劑量血糖值(mg/dl) 血糖下降百分率(mg/kg) 給藥前 給藥后 (％)正常組 / 127.01±19.67 117.41±26.67 7.6模型組 / 391.13±45.86 380.34±55.14 2.8降糖靈 110.0 363.08±58.20 145.87±92.74***### 59.8I 400.0 419.55±85.35 199.38±94.38***### 52.5II 1.0 390.23±101.02 265.99±114.78 31.8III 17.2 386.15±93.99 159.09±68.88***### 57.1IV 38.6 397.88±67.69 327.723±133.54 17.6V 334.0 414.35±122.4 257.87±70.50## 37.8 ***P＜0.01vs模型組；##P＜0.05###P＜0.01vs正常組； 為了進(jìn)一步確證其活性部位，我們把乙酸乙酯萃取部位采用聚酰胺柱層析。
實(shí)施例2 乙酸乙酯部位各化學(xué)組分對(duì)四氧嘧啶所造成的化學(xué)性糖尿病小鼠血糖的影響。
對(duì)乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分定性分析發(fā)現(xiàn)其主要含有萜類、甾體、酚酸等類成分。提取分離后分為30％乙醇組分(III-1)、50％乙醇組分(III-2)、95％乙醇組分(III-3)進(jìn)行藥效學(xué)比較；結(jié)果發(fā)現(xiàn)III-2組分與水提取部位降血糖的作用相當(dāng)。見表6。
表6、乙酸乙酯部位分離的各組分對(duì)四氧嘧啶所造成的化學(xué)性糖尿病 小鼠血糖的影響(n＝12，X±S)組別 劑量 (mg/kg)血糖值(mg/dl)血糖下降百分率(％) 給藥前 給藥后 正常組/ 139.03±22.74 139.18±32.127-0.11 模型組/ 445.55±164.93 418.92±141.755.9 降糖靈110.00 434.04±159.75 209.80±88.656***51.7 I200.00 439.70±144.80 241.21±114.34***45.1 III9.56 445.05±165.59 285.84±152.51**35.8 III-14.54 368.79±171.78 368.22±115.010.1 III-23.20 386.57±169.07 246.24±150.61***Δ36.3 III-30.64 411.51±149.52 300.00±158.2327.1 **P＜0.05 ***P＜0.01vs模型組；ΔP＞0.05vs正常組 稱取實(shí)施例1所得5克鬼箭羽乙酸乙酯部位上聚酰胺柱(15-60目)，依次用水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇進(jìn)行柱層析，水和30％組分合并，得到三個(gè)組分。即水加30％乙醇組分(III-1)、50％乙醇組分(III-2)和95％乙醇組分(III-3)。
乙酸乙酯部位各組分對(duì)糖尿病小鼠的降糖作用 取乙酸乙酯部位化學(xué)組分III-1、III-2、III-3及鬼箭羽提取部位I、III，按前述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)。正常組和模型組給以等量0.5％的CMC-Na，陽(yáng)性藥組給與降糖靈(110mg/kg)。
鑒于乙酸乙酯部位50％乙醇組分(III-2)的降糖活性最優(yōu)，我們對(duì)該組分進(jìn)一步進(jìn)行了化學(xué)成分的提取分離。
實(shí)施例3 取III-2組分的浸膏上Sephadex LH-20柱，用氯仿∶甲醇＝1∶1洗脫，所得浸膏再上200-300目硅膠柱，用不同比例的氯仿和甲醇梯度洗脫，得化合物EA-1～4，均對(duì)三氯化鐵試劑呈反應(yīng)陽(yáng)性。
EA-1無色粉末狀結(jié)晶，mp.213-214℃。ESI-MS(m/z)137[M-1]-。1H-NMR(300MHz，Acetone-d6)δ9.62(1H，s，-COOH)7.88(2H，d，J＝8.8Hz，2-H and6-H)，6.89(2H，d，J＝8.8Hz，3-H and 5-H)；13C-NMR(300MHz，Acetone-d6)168.27(-COOH)，163.27(C-4)，133.34(C-3andC-5)，123.33(C-1)，116.57(C-2and C-6)。理化數(shù)據(jù)與光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的對(duì)羥基苯甲酸一致，故確定該化合物為對(duì)羥基苯甲酸。
EA-2無色結(jié)晶，mp.ESI-MS(m/z)153[M-1]-。1H-NMR(300MHz，Acetone-d6)δ.51(1H，d，J＝2.0Hz，2-H)，7.44(1H，dd，J＝8.3，2.0Hz，6-H)，6.88(1H，d，J＝8.3Hz，5-H)13C-NMR(300MHz，Acetone-d6)166.63(-COOH)，149.59(C-4)，144.44(C-3)，122.45(C-6)，122.01(C-1)，116.32(C-2)，114.51(C-5)理化數(shù)據(jù)與光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，故確定該化合物3，4-二羥基苯甲酸。
EA-3無色結(jié)晶，mp.ESI-MS(m/z)167[M-1]-。1H-NMR(500MHzAcetone-d6)δ7.61(1H，dd，J＝8.3，1.9Hz，6-H)，7.58(1H，d，J＝1.9Hz，2-H)，6.88(1H，d，J＝8.2Hz，5-H)，3.91(3H，s，-OCH3)13C-NMR(500MHz，Acetone-d6)166.34(-COOH)，150.91(C-4)，146.91(C-3)，123.73(C-6)，121.77(C-1)，114.34(C-2)，112.45(C-5)，55.22(-OCH3)理化數(shù)據(jù)與光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，故確定該化合物3-甲氧基-4-羥基苯甲酸。
EA-4無色針晶，mp.ESI-MS(m/z)197[M-1]-。1H-NMR(300MHz，Acetone-d6)δ7.3(2H，s，2-H and6-H)，3.87(6H，s.-OCH3)；13C-NMR(300MHz，Acetone-d6)168.32(-COOH)，149.00(C-3andC-5)，142.01(C-4)，122.20(C-1)，108.84(C-2 and C-6)，57.34(-OCH3)。理化數(shù)據(jù)與光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，故確定該化合物3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸。
實(shí)施例4取5公斤鬼箭羽直接用5倍(W/V)的乙酸乙酯回流2次，所得浸膏15克上聚酰胺柱，用乙醇和水梯度洗脫，取50％乙醇洗脫部位，回收溶劑，得乙酸乙酯部位50％乙醇組分。
實(shí)施例5取5公斤鬼箭羽，用6倍(W/V)水煎煮2次，濃縮后所得浸膏以濕法上聚酰胺柱，用乙醇和水梯度洗脫，取50％乙醇洗脫部位，回收溶劑，將50％乙醇洗脫部位用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部位。
實(shí)施例6取5公斤鬼箭羽，用5倍(W/V)的50％乙醇回流2次，所得浸膏300克，用石油醚、乙酸乙酯依次萃取，取乙酸乙酯萃取部分，上聚酰胺柱(30-60目)，用乙醇和水梯度洗脫，取50％乙醇洗脫部位，回收溶劑，得乙酸乙酯部位50％乙醇組分。
權(quán)利要求
1、一種降血糖的中藥組合物，含有選自對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸、3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸中的一種或一種以上混合物。
2、權(quán)利要求1的中藥組合物，其特征在于含有藥學(xué)上適合載體。
3、一種降血糖的中藥組合物制備方法，包括下述步驟
1)取鬼箭羽藥材，用水、乙醇和/或乙酸乙酯提取，將提取液濃縮，得到濃縮物；
2)取濃縮物，用乙酸乙酯萃取，濃縮萃取液，得到乙酸乙酯萃取物；
或者，取濃縮物，用15-60目聚酰胺進(jìn)行層析，用含不同濃度乙醇水溶液的梯度洗脫，收集其50％的乙醇洗脫部位，濃縮后，得到所述活性組分。
4、根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于將乙酸乙酯萃取物或聚酰胺層析的50％的乙醇洗脫部位，再經(jīng)Sephadex LH-20層析，用氯仿∶甲醇1∶1洗脫，先流出萜類化合物，后流出酚酸類組分。
5、根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于將酚酸類組分進(jìn)行硅膠層析，用氯仿-甲醇梯度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20柱層析分離，用氯仿∶甲醇2∶1梯度洗脫，分別得到化合物對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸和3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸。
6、對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、3-甲氧基-4-羥基苯甲酸和/或3.5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸在制備降血糖藥品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明從中藥鬼箭羽中提取、分離具有降血糖作用的有效成分對(duì)羥基苯甲酸、3，4－二羥基苯甲酸、3－甲氧基－4－羥基苯甲酸和/或3.5－二甲氧基－4－羥基苯甲酸，不但具有降糖尿病小鼠血糖作用，副作用少且低，使得即使患者長(zhǎng)期服用仍具有相當(dāng)?shù)陌踩?，而且影響丙二醛及超氧化物歧化酶，具有?biāo)本兼治功能，能夠減輕或抑制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。
文檔編號(hào)A61P3/10GK1679529SQ20051000606
公開日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2002年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月29日
發(fā)明者朱丹妮, 郎素梅, 王秋娟, 余伯陽(yáng), 嚴(yán)永清 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)