專利名稱：烏靈膠囊在制備抑制u251細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及烏靈膠囊在制備抑制U251細(xì)胞増殖藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
神經(jīng)膠質(zhì)瘤又被稱為膠質(zhì)細(xì)胞瘤，或者簡稱為膠質(zhì)瘤，它是ー種發(fā)生在神經(jīng)外胚層的腫瘤，所以又被稱做是神經(jīng)外胚層腫瘤或神經(jīng)上皮腫瘤。腫瘤起源于神經(jīng)間質(zhì)細(xì)胞，即神經(jīng)膠質(zhì)、室管膜、脈絡(luò)叢上皮和神經(jīng)實質(zhì)細(xì)胞，即神經(jīng)元。大多數(shù)腫瘤起源于不同類型的神經(jīng)膠質(zhì)，但根據(jù)組織發(fā)生學(xué)來源及生物學(xué)特征類似，對發(fā)生于神經(jīng)外胚層的各種腫瘤，一般都稱為神經(jīng)膠質(zhì)瘤。神經(jīng)膠質(zhì)瘤的病程依其病理類型和所在部位長短不一，自出現(xiàn)癥狀至就診時間一般多為數(shù)周至數(shù)月，少數(shù)可達(dá)數(shù)年。惡性程度高的和后顱窩腫瘤病史多較短， 較良性的腫瘤或位于所謂靜區(qū)的腫瘤病史多較長。腫瘤如有出血或囊腫形成、癥狀發(fā)展進(jìn)程可加快，有的甚至可類似腦血管病的發(fā)展過程。烏靈膠囊是浙江佐カ藥業(yè)股份有限公司的獨家產(chǎn)品，目前還沒有其抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤(U251)細(xì)胞增殖的文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供烏靈膠囊在制備抑制U251細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案烏靈膠囊在制備抑制U251細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。烏靈膠囊主要成分烏靈菌粉，內(nèi)含腺苷、多糖、甾醇類及谷氨酸、Y-氨基丁酸、賴氨酸等19種氨基酸，還含有維生素(VitE、Bl、B6、Kl等)和微量元素(Zn、Fe、Ca等)等多種成份，補腎健腦，養(yǎng)心安神，適用于神經(jīng)衰弱的心腎不交證，癥見失眠，健忘，神疲乏力，腰膝酸軟，脈細(xì)或沉無カ等，ロ服，一次3粒，一日3次，或遵醫(yī)囑，每粒裝O. 33克，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制U251細(xì)胞増殖。有益效果烏靈膠囊抑制U251細(xì)胞増殖，效果良好。
具體實施例方式烏靈膠囊抑制U251細(xì)胞増殖的實驗研究資料I實驗材料I. I實驗用細(xì)胞株神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤(U251)，來自本公司實驗室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實驗藥物研究藥物烏靈膠囊，浙江佐カ藥業(yè)股份有限公司，批號20110423藥液儲液稱取IOOmg烏靈膠囊內(nèi)容物，溶于5ml無水こ醇中，O. 2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水こ醇以備對照組之用。
I. 3實驗試劑DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批號2010382);無水こ醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配)；I. 4實驗器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集団安泰公司 制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。2實驗方法I) U251細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期吋，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%_70%，加入烏靈膠囊溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I ニ甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、ニ甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示細(xì)胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復(fù)3次。3統(tǒng)計處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以mean + S. D.表不。4實驗結(jié)果MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對U251細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。
表I烏靈膠囊對U251細(xì)胞增殖抑制影響研究(又土SD)
權(quán)利要求
1.烏靈膠囊在制備抑制U251細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了烏靈膠囊在制備抑制U251細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，烏靈膠囊主要成分烏靈菌粉，內(nèi)含腺苷、多糖、甾醇類及谷氨酸、Y-氨基丁酸、賴氨酸等19種氨基酸，還含有維生素(VitE、B1、B6、K1等)和微量元素(Zn、Fe、Ca等)等多種成份，補腎健腦，養(yǎng)心安神，適用于神經(jīng)衰弱的心腎不交證，癥見失眠，健忘，神疲乏力，腰膝酸軟，脈細(xì)或沉無力等，口服，一次3粒，一日3次，或遵醫(yī)囑，每粒裝0.33克，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制U251細(xì)胞增殖。
文檔編號A61K36/06GK102824375SQ201210346408
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月18日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:南京正亮醫(yī)藥科技有限公司