專利名稱：腺苷衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腺苷衍生物，更具體地說(shuō)是提出A1受體激動(dòng)劑的新應(yīng)用。
本發(fā)明具體涉及式(I)化合物的新應(yīng)用。 I式中，R1是氫、(C1～4)烷基、烯丙基；甲代烯丙基；直鏈或支鏈的(C3-7)炔基，(C3～8)環(huán)烷基，羥基(C4～8)環(huán)烷基，被原子序數(shù)為9～35的鹵素、(C1～4)烷基、(C1～4)烷氧基或CF3單取代或彼此獨(dú)立地雙取代的苯基；或苯基(C1～4)烷基，其中的苯環(huán)是未被取代的、或者被原子序數(shù)9～35的鹵素、(C1～4)烷基、(C1～4)烷氧基或CF3單取代或彼此獨(dú)立地雙取代；具有至少一個(gè)羥基或至少兩個(gè)苯基的(C1～4)烷基，雙環(huán)烷基比如內(nèi)或外雙環(huán)〔2，2，1〕庚基、萘基(C1～4)烷基、苊基(C1～4)烷基或式A或式B的基團(tuán) 或
其中，Z是氫、羥基或(C1～4)烷氧基，Q是氫或羥基，A是-CH2-、-O-、-S-或一直接相連的鍵，Y是-(CH2)n或一直接相連的鍵，n是1～3的整數(shù)，式A中的虛線表示一個(gè)可有可無(wú)的鍵，R2是氫、(C1～4)烷基、氨基、(C3～5)環(huán)烷基或原子序數(shù)9-35的鹵素，以及R3是(C1～4)烷基。
某些這類(lèi)化合物，比如式中R1不是羥基環(huán)烷基的化合物是已知的，并公開(kāi)在比如已公布的英國(guó)專利申請(qǐng)2,226,027A和歐洲專利申請(qǐng)EP-O-378,518和EP-0-269,574以及USP4,843,066和4,985,049中。
在其中所述的式子中，四氫呋喃環(huán)的2′、3′、4′和5′取代基具有如在腺苷中一樣的構(gòu)型。
在如式1的一組化合物中，R1不是羥基環(huán)烷基。在另一組式1的化合物中，R1是羥基(C4～8)環(huán)烷基。
優(yōu)選的式1化合物是6-環(huán)己基-2′-O-甲基-腺苷，后文中稱之為化合物M。
一般可按下面方法測(cè)定優(yōu)選的式1化合物的A1腺苷活性腺苷受體親和力如H.Bruns等人在分子藥理學(xué)(Molecular Pharmacology)29(1986)p331-344中曾敘述過(guò)的方法制備豬紋狀體膜。
用一種非選擇性腺苷受體激動(dòng)劑3H-NECA來(lái)標(biāo)記A1和A2受體。通過(guò)對(duì)Langmuir方程進(jìn)行加權(quán)非線性最小二乘法曲線擬合由替代曲線得到IC50值，并計(jì)算出pKD值。表腺苷受體配位體對(duì)A1和A2受體的親和力A1A2A1∶A2(KD；nM) (KD；nM) 選擇性nCPA0.74±0.08 930+110 1260 6CV1808 2460±757 269±70 0.1 5CGS21680 4360±1080 18.6±4 0.0044化合物M23±2 24500±5160 1090 51.5H2OCPA＝環(huán)戊基腺苷CV1808＝2-苯氨基腺苷(碳水化合物.81卷.1974)ref91898K)CGS21680＝2-〔對(duì)(2-羧乙基)苯乙氨基〕-5′-N-乙基甲酰氨基腺苷(FASEBJ，1989，3(4)Refs.4770/3)按照該文獻(xiàn)，證實(shí)CPA是對(duì)A1受體的有效及高選擇性的結(jié)合替代劑，CV1808是一種較弱的但是是有選擇性的A2受體配位體，而CGS21680對(duì)A2受體表現(xiàn)出高效和選擇性。
1.5水合物形式的化合物M對(duì)于A1受體比對(duì)于A2受體表現(xiàn)出更好的親和力和高選擇性。
已知的式I化合物作為抗高血壓藥及冠狀動(dòng)脈血管舒張劑是已知的。
另外還知道，式I的化合物通過(guò)抑制血小板凝聚及活化白細(xì)胞來(lái)保護(hù)血管內(nèi)膜。它們也降低血脂濃度。再有，式I化合物對(duì)于由高血壓如充血性心力衰竭、心肌梗塞或突發(fā)性心肌壞死及腎功能不全所引起的疾病有預(yù)防作用(見(jiàn)歐洲專利申請(qǐng)EP-0-378518和EP-0-269574)。
還已知這類(lèi)化合物用于治療神經(jīng)變性疾病、外周神經(jīng)疾病如糖尿病型神經(jīng)疾病以及治療與外周血管疾病有關(guān)的疾病和/或與神經(jīng)元變性、高甘油三酯血/低HDL膽固醇含量、脂類(lèi)機(jī)能障礙、高游離脂肪酸或I型及II型糖尿病，包括非胰島素依賴型糖尿病、心律失常，特別是陣發(fā)性室上心動(dòng)過(guò)速和心動(dòng)過(guò)速性房顫有關(guān)的疾病以及預(yù)防心肌梗塞。
本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，對(duì)于比如治療如急性或慢性疼痛，式I化合物是特別有意義的止痛劑。
在標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物試驗(yàn)中，比如在炎性和神經(jīng)疾病模型中，如減少持續(xù)性炎癥機(jī)械過(guò)度止痛〔試驗(yàn)a)和b)〕及持續(xù)性神經(jīng)性熱過(guò)度止痛〔試驗(yàn)c)〕表示的慢性神經(jīng)痛的止痛活性表現(xiàn)出式I化合物有止痛活性。
炎性痛覺(jué)過(guò)敏試驗(yàn)a)弗洛伊德氏佐劑誘發(fā)痛覺(jué)過(guò)敏在鼠的一個(gè)膝關(guān)節(jié)上進(jìn)行關(guān)節(jié)內(nèi)注射完全Freund氏佐劑(100微升)。在該腿部鼠的可忍受負(fù)荷減小，直到第5天以前一直在下降。這個(gè)效果表明了機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏，而且對(duì)NSAID氏制劑和鴉片制劑有反應(yīng)。通過(guò)注射，最好是口服，以約3～60μg/kg動(dòng)物體重施用式I的化合物。測(cè)量在注射側(cè)能忍受的負(fù)荷增加量，確定痛覺(jué)過(guò)敏的逆轉(zhuǎn)點(diǎn)。
當(dāng)在大約1小時(shí)作用期間，經(jīng)口服3～60μg/kg劑量時(shí)，化合物M顯示出特別有意義的活性。在3、30和60μg/kg劑量之間沒(méi)有反映出有明顯差異，這表明在3～30μg/kg劑量已達(dá)到最大效果。
試驗(yàn)b)松節(jié)油誘發(fā)機(jī)械痛覺(jué)過(guò)敏在鼠爪(左后腿)上進(jìn)行足底內(nèi)局部注射松節(jié)油/液體石蠟，造成局部炎癥反應(yīng)，使對(duì)于機(jī)械刺激(爪壓)的縮回閾減小(減少340g)。在注射后3天，以口服或皮下以約1～100μg/kg的劑量給藥，在1～3小時(shí)以后再取此閾值讀數(shù)，表明式I化合物是有活性的。
以劑量30和60μg/kg口服化合物M表現(xiàn)出明顯的活性，而且在30μg/kg就顯示出最大效果。在此試驗(yàn)中，嗎啡的ED50值是1.2mg/kg(皮下注射)。
神經(jīng)疾病性痛覺(jué)過(guò)敏試驗(yàn)c)神經(jīng)性熱痛覺(jué)過(guò)敏(根據(jù)Z.Seltzer等人在痛，1990，43，205-218中所述原理)對(duì)坐骨神經(jīng)進(jìn)行單側(cè)部分結(jié)扎，消除了通向鼠爪神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)纖維。該鼠就產(chǎn)生了對(duì)機(jī)械和熱刺激的痛覺(jué)過(guò)敏，而且不用引起肢體分離就會(huì)使部分去神經(jīng)的爪力感覺(jué)異常(allodynia)。將該動(dòng)物放入置于薄玻璃板上的有機(jī)玻璃盒子中，一個(gè)鱷魚(yú)夾形的熱刺激器放到爪的足底表面上。測(cè)量對(duì)于縮爪的滯后時(shí)間。在神經(jīng)結(jié)扎后12～15天以約1～約100μg/kg的劑量皮下注射，最好口服給藥表明式I化合物是有活性的。對(duì)于抗熱致疼痛過(guò)敏，化合物M特別有活性。在30和60μg/kg的劑量，化合物M顯示出明顯活性，在30μg/kg有最佳效果。ED50大約為60μg/kg(口服)。當(dāng)皮下給藥時(shí)，在此試驗(yàn)中嗎啡的ED50大約為3mg/kg。
臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)可按如下進(jìn)行對(duì)于經(jīng)受疼痛、術(shù)后痛或帶狀皰疹后神經(jīng)痛的動(dòng)物，經(jīng)靜脈注射以0.02～5mg的劑量給予式I化合物，特別是化合物M。觀察到了疼痛減輕。
因此，本發(fā)明化合物可用作止痛劑，比如抗急性或慢性疼痛，如慢性神經(jīng)痛。
所以在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種治療疼痛的方法，這包括給需要進(jìn)行這種治療的對(duì)象施用治療有效量的如前面所定義的式I化合物。
在另一方面，本發(fā)明提供如前面所定義的式I化合物在制備適于治療疼痛的藥物時(shí)作為止痛劑的應(yīng)用。
在再一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于治療疼痛的如前面所定義的式I化合物。
在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了含有如前面所定義的式I化合物為止痛劑，與藥物可接受的載體或稀釋劑一起使用的止痛組合物。
適應(yīng)癥包括疼痛，比如與組織損傷及炎癥有關(guān)的急性疼痛(如術(shù)后痛、燒傷痛、外傷痛等)、慢性炎癥疼痛(如關(guān)節(jié)炎)和慢性神經(jīng)癥疼痛(如糖尿病神經(jīng)疾病、皰疹后神經(jīng)痛、多發(fā)性硬化癥、灼性神經(jīng)痛等)。
在如上所指出的本發(fā)明的應(yīng)用中，所用化合物的劑量當(dāng)然隨所用化合物的種類(lèi)、疾病嚴(yán)重程度、宿主狀況、病人體重、給藥方式以及化合物的相對(duì)效果不同而發(fā)生變化。然而一般說(shuō)來(lái)，3天劑量由約1～約100μg/kg動(dòng)物體重在動(dòng)物可顯示得到滿意的結(jié)果，比如3～60，像10～60μg/kg。對(duì)于大動(dòng)物，比如人，需要的日劑量為約0.1～約10mg，一般以單位劑量約0.02～約5mg的方式服用，一天內(nèi)可服用多于1次的這樣單位劑量，比如每日2、3、4、5或6次，但優(yōu)選每日1次或2次。
在上面的試驗(yàn)a)中，NSAID布洛芬的ED50為約4mg/kg(口服)，而消炎痛為13mg/kg(口服)。而化合物M的活性高約300倍。對(duì)于化合物M，優(yōu)選的劑量為約0.1mg日～約10mg/日，比如對(duì)于一個(gè)70kg體重的成年人為3～30μg/kg，這與適應(yīng)癥的嚴(yán)重程度和服藥頻度有關(guān)。
對(duì)于人，在單劑高達(dá)5mg(口服)后，化合物M未顯示嚴(yán)重的副作用。
此處使用“藥物可接受的”一詞包括對(duì)人獸都適用的物質(zhì)。
本發(fā)明化合物可通過(guò)任何適當(dāng)?shù)耐緩竭M(jìn)行配合以利施用，優(yōu)選的途徑取決于需要治療的疾病，優(yōu)選單劑形或者病人可以自己以單劑形施用的形式。該組合物最好適合于口服、經(jīng)直腸、局部、非胃腸道、靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)給藥。
本發(fā)明的組合物可以呈片劑、膠囊、香袋(sachet)、小瓶、粉末、顆粒、錠劑、栓劑、可現(xiàn)沖配粉末或液體制劑的形式，比如口服的或滅菌的注射用溶液或懸浮液。如果合適也可設(shè)計(jì)成局部給藥制劑。
為了得到給藥的穩(wěn)定效果，優(yōu)選以單位劑量的形式施用本發(fā)明組合物。
對(duì)于口服的單位劑型可以是含有0.02～5mg本發(fā)明化合物的片劑和膠囊，它可含有常用的賦形劑，像粘合劑，如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃蓍膠或聚乙烯基吡咯烷酮；填料如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨糖醇或甘氨酸；壓片潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂；崩解劑，如淀粉、交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮、淀粉乙醇酸鈉或微晶纖維素；或藥物可接受的潤(rùn)滑劑，如月桂基硫酸鈉。
用通常的摻混、充填、壓片等方法可制備固態(tài)口服組合物。使用重復(fù)摻混的操作可以在使用大量填料時(shí)使活性物分布在整個(gè)組合物中。
在現(xiàn)有技術(shù)中這些操作當(dāng)然都是通用的?？砂凑赵谕ǔＶ扑帉?shí)踐中已知的方法，特別是用腸溶糖衣給片劑包涂糖衣。
口服液體制劑可以呈乳劑、糖漿或酏劑的形式，或者是干粉，在服用前用水或其它載體重新沖配。這樣的液體制劑可含有常用的添加劑，比如懸浮劑，像山梨糖醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠、加氫食用油脂；乳化劑，像卵磷脂、單油酸山梨糖醇酯或阿拉伯膠；非水性載體(可包括食用油)如杏仁油、分餾椰子油、油酯，如甘油、丙二醇或乙醇的酯；防腐劑，如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸；而且如有需要可含有常用的矯味劑或著色劑。
固體口服組合物如片劑和膠囊的例子如下由具有相應(yīng)劑量的膠囊顆粒壓成片劑。使用3*黃色膠囊包囊化合物M，對(duì)于0.1和5mg劑量的配方分別如下所示。
0.1mg片囊5.0mg片/囊化合物M 0.1 5.0微晶纖維素 76.92 74.96水合乳糖87.63*84.69*聚乙烯基吡咯烷酮7.47.4交聯(lián)聚維酮 7.4 7.4硬脂酸鎂0.925 0.925保濕劑 4.625 4.6253#膠囊 5050理論膠囊填充量重量或片重 185 185理論膠囊重 235 235*調(diào)整乳糖的數(shù)量用來(lái)補(bǔ)償藥物中的水份含量該化合物也可以以緩釋劑型給藥，以提供長(zhǎng)效的作用?？刹捎猛ǔ５慕o藥體系提供緩釋劑型，比如帶糖衣的丸劑或推挽滲透系統(tǒng)。
對(duì)于經(jīng)非胃腸道給藥，使用該化合物和滅菌載體制備流體單劑劑型，根據(jù)使用的濃度不同，可制成懸浮液也可溶于載體。在制備溶液時(shí)，該化合物可溶于聚乙二醇或乙醇中，并用注射用水稀釋，并在裝入適當(dāng)?shù)牟Ａ炕虬碴持皩?nèi)容物過(guò)濾滅菌，裝入后進(jìn)行密封。在載體中最好溶有助劑，如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑。經(jīng)非胃腸道服用懸浮劑以基本相同的方法制備，不同之處是該化合物是懸浮而非溶解在載體中，而且不能通過(guò)過(guò)濾的方法來(lái)滅菌?？梢栽趹腋缇d體中以前將該化合物暴露于環(huán)氧乙烷中進(jìn)行滅菌。在組合物中最好包括有表面活性劑或潤(rùn)濕劑，以使化合物能均勻分布。
根據(jù)施用方法不同，該組合物可含有約0.1至約99％(wt)，優(yōu)選10～60％(wt)的活性物質(zhì)。
本發(fā)明的化合物M，或其水合物或與其它溶劑的加合物，或者其鹽也可以與通常的局部用賦形劑一起作為局部用制劑來(lái)給藥。
局部制劑可以是比如軟膏、霜?jiǎng)┗蛳磩?、浸漬敷料、凝膠、膠貼、氣霧劑和氣溶膠，它們可含有適當(dāng)?shù)某Ｓ锰砑觿?，如防腐劑、溶劑以幫助藥物滲透，以及在軟膏及霜?jiǎng)┲械能浕瘎?。該制劑中可含有常用的相容載體，如霜質(zhì)軟膏基、洗劑的乙醇或油醇。
可用于式I化合物或其水合物，或其與其它溶劑加合物，或其鹽的適宜霜?jiǎng)?、洗劑、凝膠、軟膏、氣霧劑或氣溶膠配方在現(xiàn)有技術(shù)中是公知的通用的配方，比如，如在制藥和化妝的標(biāo)準(zhǔn)教科書(shū)中所述，比如Leonard Hill Books出版社出版的Harry′s美容學(xué)、Remington′s藥物科學(xué)和英國(guó)藥典及美國(guó)藥典。
在另一方面，本發(fā)明提供式Ia的腺苷衍生物 Ia式中R1′是羥基取代的(C4～8)環(huán)烷基，R2是如前面所定義的或優(yōu)選氫、(C1～4)烷基或原子序數(shù)為9～35的鹵素，以及R3如前面所定義。
式Ia的化合物可以以對(duì)映體或非對(duì)映混合物的形式存在。
在式Ia中，原子序數(shù)為9～35的鹵素是氟、氯或溴；(C1～4)烷基是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、特別是甲基；(C4～8)環(huán)烷基是環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基，特別是環(huán)己基或環(huán)戊基。
可以由如下方法制備式Ia的化合物，該方法的特征在于，式IIa的化合物與式IIIa的化合物反應(yīng)， IIa式中R2和R3具有如前面給出的意義，而且X是氯或溴，R1′-NH2IIIa式中R1′具有如前面給出的定義。
通常是在溶劑如二噁烷存在下，將式IIa的化合物與式IIIa的化合物一起加熱到80～120℃，最好加熱到沸點(diǎn)來(lái)實(shí)施上述的方法。
在此方法中用作原料的式IIa化合物中，X特別是氯。在已公布的歐洲專利申請(qǐng)269574中敘述了式IIa的化合物以及其制法。
制備式Ia的又一個(gè)方法包括將式IVa的化合物用三水合四丁基氟化銨處理，式中R1′、R2和R3具有如前面所給出的定義 IVa可以在有機(jī)溶劑如四氫呋喃中，在室溫和攪拌下實(shí)施上述反應(yīng)。在堿性溶劑如吡啶中用1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷處理式IIa的化合物，將如此得到的式Va化合物與式IIIa化合物反應(yīng)可得到式IVa的化合物，式Va中的X、R2和R3具有如前面所定義的意義。 Va在下面的實(shí)施例1～8中，所有的溫度都是攝氏度且未經(jīng)校正。
實(shí)施例16-〔(反)-4-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲基腺苷在室溫下將1g 6-〔(反)-4-羥基環(huán)己基〕-9-嘌呤基-2′-O-甲基-3′，5′-O-(1，1，3，3-四異丙基二硅氧-1，3-二基)-D-核糖和2g三水合四甲基氟化銨在20ml四氫呋喃中一起攪拌15分鐘。然后將混合物蒸發(fā)至干，在硅膠上用醋酸乙酯/甲醇(85∶15)混合物洗脫殘?jiān)?。在甲?醋酸乙酯中結(jié)晶提純的產(chǎn)物。用1當(dāng)量甲醇使標(biāo)題化合物結(jié)晶，熔點(diǎn)121～124℃。[α]D20＝-50.2°(c＝1，在DMF中)。
該化合物也可以用乙醇重結(jié)晶，并在放置于潮濕空氣中后，用1當(dāng)量水進(jìn)行結(jié)晶。熔點(diǎn)114～117℃。[α]D20＝-46.9°(c＝1，DMF)。
可以按如下方法制造在上述方法中作為原料使用的6-〔(反)-4-羥基環(huán)己基〕-9-嘌呤基-2′-O-甲基-3′，5′-O-(1，1，3，3-四異丙基二硅氧-1，3-二基)-D-核糖；在105℃的油浴中將2g6-氯-9-嘌呤基-2′-O-甲基-3′，5′-O-(1，1，3，3-四異丙基二硅氧-1，3-二基)-D-核糖與1.32g反-4-羥基環(huán)己胺和1.4m1N-乙基-二異丙胺在80ml二噁烷中一起攪拌6小時(shí)。然后將該混合物冷卻至室溫，過(guò)濾并將濾液濃縮至干。為了進(jìn)行提純，將如此得到的混合物在硅膠上先用己烷/醋酸乙酯(7∶3)混合物，后用醋酸乙酯/甲醇(95∶5)的混合物洗脫。如此提純的油狀化合物Rf＝0.3(醋酸乙酯/甲醇，95∶5)。
實(shí)施例26-〔(順)-4-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲某腺苷與實(shí)施例1相似，用順-4-羥基環(huán)己胺代替反-4-羥基環(huán)己胺得到標(biāo)題命名的化合物。
用半當(dāng)量醋酸乙酯將如此得到標(biāo)題命名化合物結(jié)晶，熔點(diǎn)110～111℃。[α]D20＝-48.6°(c＝1，在DMF中)。
實(shí)施例36-〔(1 S，反)-2-羥基環(huán)戊基〕-2′-O-甲基腺苷與實(shí)施例1相似，用1S，反-2-羥基環(huán)戊胺代替反-4-羥基環(huán)己胺，得到標(biāo)題命名的化合物。如此得到的標(biāo)題命名化合物有如下特征泡沫狀，在醋酸乙酯/乙醇75∶25中的Rf＝0.44，[α]D20＝-25.5°(c＝1，在DMF中)。
實(shí)施例46-〔(1R，反)-2-羥基環(huán)戊基〕-2′-O-甲基腺苷與實(shí)施例1相似，用1R，反-2-羥基環(huán)戊胺代替反-4-羥基環(huán)己胺，得到標(biāo)題命名的化合物。如此得到的化合物具有如下特征熔點(diǎn)164-166℃，在醋酸乙酯/乙醇75∶25中的Rf＝0.44，[α]D20＝-80.2°(c＝1，在DMF中)。
實(shí)施例56-〔(1S，反)-2-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲基腺苷與實(shí)施例1相似，用1S，反-2-羥基環(huán)己胺代替反-4-羥基環(huán)己胺，得到標(biāo)題命名的化合物。如此得到的化合物具有如下特征泡沫狀，在醋酸乙酯/乙醇75∶25中的Rf＝0.42，[α]D20＝-26.2°(c＝1，在DMF中)。
實(shí)施例66-〔(反)-4-羥基環(huán)己基〕-2′-O-乙基腺苷類(lèi)似于實(shí)施例5進(jìn)行制備。得到0.4水合物，熔點(diǎn)98℃(液化)。[α]D20＝-58°(c＝1，在DMF中)。
實(shí)施例76-〔1S，(反)-2-羥基環(huán)己基〕-2′-O-乙基腺苷類(lèi)似于實(shí)施例5中的敘述進(jìn)行制備。
實(shí)施例86-〔(1R，反)-2-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲基腺苷類(lèi)似于實(shí)施例1，用1R，反-2-羥基環(huán)己胺代替反-4-羥基環(huán)己胺，得到標(biāo)題所命名的化合物。如此得到的如標(biāo)題所命名的化合物具有如下特征泡沫狀；在醋酸乙酯/乙醇75∶25中的Rf＝0.42；[α]D20＝-69.5°(c＝1，在DMF中)。
按照本發(fā)明的化合物具有有意義的藥理性能。因此，它們可用作藥物。為此，可以以水合物或與有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇或醋酸乙酯的加合物的方式使用本發(fā)明的化合物。最有意義的式Ia化合物是在上面實(shí)施例1中的化合物，在下文中它被命名為1號(hào)化合物。
作為如上所述的止痛劑，式Ia化合物是有意義的，對(duì)于其它活性它們也是有意義的。在這些其它活性當(dāng)中，如在下面研究的結(jié)果中所指出的，本發(fā)明化合物具有抗高血壓活性。
使用R.F.BRUNS、G.H.LU和T.A.PUGSLEY在分子藥理學(xué)(MOLEC.PHARMACOL.)29，331-346(1986)中敘述的方法，在由鼠皮質(zhì)或由豬腦皮質(zhì)或紋狀體制的膜中測(cè)量了對(duì)腺苷A1和A2受體的結(jié)合。在分離并灌注的鼠腎中對(duì)下列參數(shù)進(jìn)一步測(cè)試了該化合物的活性——血管緊張肽原酶分泌——腎血?jiǎng)恿W(xué)
——按照P.M.VANHOUTTE，D.BROWNING，E.COEN，T.J.VERBEUREN，L.ZONNEKEYEN和M.G.COLLIS在高血壓4，251-256(1982)中敘述的方法測(cè)定在腎神經(jīng)受電刺激后從神經(jīng)末端釋放去甲腎上腺素的抑制作用——按照J(rèn).F.M.SMITS和J.M.BRODY在Am.J.Physiol.247，R1003-R1008(1984)中敘述的方法，以輸注或快速濃注方式給予本發(fā)明的化合物后，用植入腹主動(dòng)脈和腔靜脈中的插管，測(cè)量清醒鼠在排出NaCl和充滿NaCl時(shí)，正常血壓或自發(fā)高血壓時(shí)的血壓、心率、產(chǎn)尿量及血漿中血管緊張肽原酶活性。
由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論，無(wú)論是對(duì)血管緊張肽原酶分泌的抑制還是對(duì)從神經(jīng)末端釋放去甲腎上腺素的抑制，以及對(duì)于血管舒張都涉及到式Ia化合物的抗高血壓活性。與血壓降低相反，產(chǎn)尿量和電解質(zhì)分泌仍然不變。由此得出結(jié)論，式Ia的化合物不僅可用作抗高血壓藥而且還有舒張冠脈的效果。再有，它們通過(guò)抑制血小板聚凝和激活白細(xì)胞來(lái)保護(hù)血管內(nèi)皮。它們還降低血脂濃度。
對(duì)于上述適應(yīng)癥，在式Ia的化合物中，優(yōu)選實(shí)施例1的化合物，優(yōu)選保護(hù)血管和止痛的適應(yīng)癥。
另外，正如同在下文中試驗(yàn)a)中所陳述的，式Ia的化合物在治療心律不齊方面也是有活性的，這正如其腺苷A1受體的激動(dòng)劑活性所示，與其對(duì)抗A2受體活性相比它是有選擇性的，以及比如在下文中試驗(yàn)b)中所指出的它延長(zhǎng)通過(guò)心臟房室(A-V)結(jié)傳導(dǎo)的能力。因此，它們?cè)谑疑闲孕膭?dòng)過(guò)速，特別是陣發(fā)性室上心動(dòng)過(guò)速時(shí)可恢復(fù)竇性節(jié)律，在心律不齊性房顫時(shí)可降低心律，以及恢復(fù)由于對(duì)正常節(jié)律的β腎上腺素刺激所誘發(fā)的室性心律不齊。
式Ia的化合物摹擬所謂的“預(yù)調(diào)理”(preconditioning)效果，該過(guò)程主要是由于短時(shí)間的缺血使心臟能夠耐受以后由于缺血而造成的梗死。因此，在不穩(wěn)定的絞痛期，可用它們并且同時(shí)進(jìn)行或不進(jìn)行輔助的血小板治療來(lái)防止心臟發(fā)生心肌梗塞，或者防止經(jīng)受比如冠狀動(dòng)脈架橋手術(shù)、血管成形術(shù)、心臟移植術(shù)或非心臟手術(shù)的病人受到缺血性損害。
式Ia的化合物特別可用來(lái)給有心肌梗死傾向的對(duì)象服用，比如經(jīng)診斷或曾經(jīng)有過(guò)心肌梗死病史的人。
式Ia的化合物還可降低血漿中胰島素含量而不會(huì)影響葡萄糖耐受性。它能增強(qiáng)胰島素的增加葡萄糖攝入的效果，并降低在多脂肪組織內(nèi)的脂肪分解，從而降低血漿中游離脂肪酸的濃度，請(qǐng)見(jiàn)下文中試驗(yàn)d)的敘述。降低血漿中游離脂肪酸的濃度進(jìn)而導(dǎo)致降低甘油三酯，從而增加HDL膽固醇。
減少胰島素效應(yīng)和/或降低游離脂肪酸的作用使得式Ia的化合物可用于治療I型糖尿病和II型即非胰島素依賴型糖尿病。
式Ia化合物降低血漿甘油三酯和游離脂肪酸(見(jiàn)下文試驗(yàn)e))和升高HDL膽固醇，因此可用來(lái)治療脂機(jī)能障礙，以及那些與游離脂肪酸和甘油三酯升高有關(guān)和希望增加HIL膽固醇的疾病。
式Ia的化合物顯示出良好的代謝穩(wěn)定性。
在另一方面，本發(fā)明提供了式Ia的化合物用于治療疼痛或制備治療疼痛的藥物的應(yīng)用。
在另一方面，本發(fā)明提供了一種如前面所定義的用于治療疼痛的式Ia化合物。
在又一方面，本發(fā)明提供一種包含了如前面定義的式Ia化合物，同時(shí)含有藥物可接受的載體或稀釋劑的止痛組合物。本申請(qǐng)人打算在如前面為式I化合物所述的適應(yīng)癥中使用式Ia化合物。
如下的藥理試驗(yàn)說(shuō)明了式Ia化合物的上述活性。
a)對(duì)于腺苷受體的親和性如H.Bruns等人在分子藥理學(xué)29(1986)p331-344中所述的方法制備豬紋狀體膜。用一種非選擇性膜苷受體激動(dòng)劑3H-NECA來(lái)標(biāo)記A1和A2受體。通過(guò)對(duì)Langmuir方程進(jìn)行加權(quán)非線性最小二乘法曲線擬合，由替代曲線得到IC50值，再計(jì)算出pKD值。
式Ia化合物顯示對(duì)A1受體親合力比如在1～500nM的范圍。
b)心律失常通過(guò)測(cè)定為P-R間隔增大，腺苷A1受體激活降低了比如陣發(fā)性室上心動(dòng)過(guò)速、心動(dòng)過(guò)速性房顫和其它由于通過(guò)心臟的房室(AV)結(jié)傳導(dǎo)減慢所致的心律失常的發(fā)病率。測(cè)試方法包括記錄下清醒的成年恒河猴的ECG改變。在參考C.Clarke等人在藥學(xué)雜志244，595-597(1990)中敘述的試驗(yàn)中，式Ia化合物可以約0.1～1000mg/kg口服，或0.03～30mg/kg靜脈注射。比如說(shuō)在此試驗(yàn)中，1號(hào)化合物延長(zhǎng)了表面心電圖(ECG)上的P-R間隔，表現(xiàn)為在0.1、0.3和0.6mg/kg口服劑量下，通過(guò)房室結(jié)的傳導(dǎo)減慢。如同在上面所注意到的，這樣的作用導(dǎo)致結(jié)束了房室結(jié)折返性心動(dòng)過(guò)速，在心動(dòng)過(guò)速性房顫時(shí)降低心律。
c)通過(guò)預(yù)調(diào)節(jié)(preconditioning)防止梗死預(yù)調(diào)節(jié)(5分鐘缺血跟著10分鐘恢復(fù))使心臟對(duì)以后的缺血(30分鐘)和再灌注(3h)產(chǎn)生的梗死有較好的耐受性。在G.S.Lin等人的1991-循環(huán)(84)，1，350-356和J.D.Thornton等人在1992-循環(huán)(85)，659-665的文章中公布了測(cè)試方法。給兔以約0.01～10mg/kg的劑量通過(guò)靜脈注射式Ia化合物。在此試驗(yàn)中，給予100μg/kg1號(hào)化合物的兔受到保護(hù)和經(jīng)受冠狀動(dòng)脈閉合30分鐘誘發(fā)的梗死產(chǎn)生的內(nèi)源性預(yù)調(diào)節(jié)達(dá)到接近相同的程度。
d)鼠脂肪細(xì)胞的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和脂解作用i)通過(guò)用膠原酶消化由正常經(jīng)口喂養(yǎng)的鼠的附睪脂肪體中分離的脂肪細(xì)胞。用腺苷脫氨酶(1U/ml)和用測(cè)試化合物，如1號(hào)化合物，以及其它如指出的添加物來(lái)預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞(最終濃度為2％V/V)，在37℃測(cè)量葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。
30分鐘后加入〔3-3H〕葡萄糖(最終濃度50μM，0.5μCi/ml)。再繼續(xù)培養(yǎng)60分鐘。用5ml甲苯基質(zhì)閃爍劑來(lái)抽提細(xì)胞懸浮液(0.5ml)，然后對(duì)液體閃爍劑計(jì)數(shù)來(lái)估計(jì)由〔3-3H〕葡萄糖結(jié)合到脂肪細(xì)胞中的放射性。(葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的一種度量)；水溶性代謝產(chǎn)物和殘留的〔3-3H〕葡萄糖仍留在水相，無(wú)法檢測(cè)到。
用常用的方法測(cè)定脂解作用。在一種方法中，先用或不用1μM的異丙腎上腺素來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)60分鐘。通過(guò)含鄰苯二甲酸二壬酯進(jìn)行離心之后，從細(xì)胞中分離上層清液，通過(guò)用酶測(cè)定釋放劑清液中的甘油量來(lái)估計(jì)脂解作用。
當(dāng)濃度在0.1～1000nM時(shí)，式Ia的化合物是有活性的。
當(dāng)濃度在0.1～100nM時(shí)，1號(hào)化合物減弱鼠脂肪細(xì)胞中的脂解作用。
在有腺苷脫氨酶存在時(shí)(1U/m1)，1號(hào)化合物對(duì)于在無(wú)胰島素時(shí)〔3-3H〕葡萄糖結(jié)合到脂肪細(xì)胞中的放射性沒(méi)有明顯的影響，只是在有最大刺激的胰島素濃度(8nM)存在時(shí)才會(huì)有邊際效果，但當(dāng)胰島素濃度在0.1～50nM時(shí)對(duì)結(jié)合放射性的刺激作用明顯地以依存于濃度的方式而增大。這些觀察表明，該化合物加大葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)對(duì)胰島素的敏感度。在近于最大有效濃度的1號(hào)化合物存在時(shí)，〔3-3H〕葡萄糖結(jié)合到脂肪中對(duì)胰島素刺激的EC50要降低2至3倍在有腺苷脫氨酶和1μM的異丙腎上腺素存在下，10～50nM的1號(hào)化合物既增加對(duì)胰島素的敏感性也增大響應(yīng)程度；對(duì)胰島素的EC50降至1/5，在最大胰島素濃度的刺激也明顯增大。
ii)在正常禁食18hr鼠的脂肪和葡萄糖在控制的溫度為22℃及12/12hr晝夜循環(huán)的房間中保持重約250g的2～3月齡鼠7天。
任意喂養(yǎng)Purina鼠食和水。在禁食18小時(shí)后，給每組5只小鼠管飼在0.5％CMC中的試驗(yàn)化合物。劑量為1.0ml/100g動(dòng)物體重。服藥后3小時(shí)。用CO2將鼠麻醉，通過(guò)心臟穿刺采血。收集血清，用于葡萄糖、游離脂肪酸和β羥基丁酸酯測(cè)定。用乙酰COA過(guò)氧化酶熱量計(jì)酶試驗(yàn)法測(cè)量游離脂肪酸，用葡萄糖氧化酶法(YSI Model27，Yellow Spring，Oh)測(cè)定葡萄糖，用β-羥基丁酸酯脫氫酶交聯(lián)酶試驗(yàn)(Sigma Kit310-A，St.Louis，Mo.)測(cè)定β-羥基丁酸酯。在約1～約5000μg/kg的劑量下，式Ia的化合物是有活性的。
降低游離脂肪酸的1號(hào)化合物劑量(對(duì)脂肪細(xì)胞影響的初步結(jié)果)的2hr后劑量為5～100μg/kg。這造成劑量隨著β-羥基丁酸酯和血糖含量減少而減少。
iii)在非胰島素依賴型糖尿病(NIDD)鼠的效果在NIDD篩選試驗(yàn)中，給200～220g的鼠自由地喂養(yǎng)高脂肪食物。在進(jìn)食狀態(tài)下，通過(guò)尾靜脈注射40mg鏈脲霉素/kg體重。一周以后，將這些鼠看作是患有糖尿病，其喂食后血糖屬于200mg/dl，在禁食一夜后進(jìn)行口服葡萄糖耐受試驗(yàn)時(shí)，試驗(yàn)后3小時(shí)血糖濃度為40～80mg/dl。四天以后，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行檢查看血糖濃度是否高于180mg/dl。用YSI葡萄糖分析儀測(cè)血糖。按如下方式進(jìn)行長(zhǎng)期篩選試驗(yàn)在第一天，在早晨900將食物從鼠旁移開(kāi)，在通過(guò)尾尖取得初始血糖讀數(shù)后，口服載體(對(duì)照組)或化合物(每次9只鼠)。6小時(shí)后測(cè)定血糖濃度，在此之后立即給鼠恢復(fù)喂食。
在連續(xù)11天時(shí)間內(nèi)每天一次給相同的鼠服載體或藥物。在第4、8和11天在給藥后0時(shí)和6小時(shí)禁食后測(cè)定血糖。對(duì)于11天100μg/kg的式Ia化合物如1號(hào)化合物會(huì)導(dǎo)致血漿游離脂肪酸明顯下降，這使血糖產(chǎn)生明顯的減少。
e)以高血清甘油三酯為特征的脂血癥一些研究表明血清甘油三酯濃度(和與此相關(guān)聯(lián)的HDL膽固醇含量減少)與心臟冠狀動(dòng)脈疾病(CHD)風(fēng)險(xiǎn)之間有確定的相互關(guān)系(見(jiàn)Grundy的膽固醇和動(dòng)脈粥樣硬化與診斷和治療Lippincott，Philadelphia(1990))。降低高甘油三酯濃度作為減少CHD發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的一種方法，其價(jià)值在Helsinki的心臟研究所里見(jiàn)到，該方法中，在用了二甲苯氧庚酸治療后，最大限度地降低了IIB型高血脂病人的嚴(yán)重冠脈疾病的發(fā)生，在這些病人身上，LDL膽固醇和血清總甘油三酯濃度都升高，而HDL膽固醇的濃度一般是降低的。當(dāng)劑量為約0.03～30(比如0.1～30)mg/kg(靜脈注射)和0.1～100(比如O.1～10)mg/kg(口服)時(shí)在恒河猴中式Ia的化合物是有活性的。1號(hào)化合物當(dāng)劑量為0.03～0.6mg/kg(靜脈注射)和0.1～1.2mg/kg(口服)時(shí)可使恒河猴的血漿游離脂肪酸和甘油三酯產(chǎn)生與劑量有關(guān)的長(zhǎng)期的下降，當(dāng)劑量為0.6mg/kg(口服)時(shí)，1號(hào)化合物有代表性的結(jié)果表明，在300分鐘后與對(duì)照組相比，游離脂肪酸下降約60％，而甘油三酯下降40％。
在麻醉鼠對(duì)平均動(dòng)脈血壓、心動(dòng)過(guò)緩和外周血管舒張的試驗(yàn)中， 式Ia的化合物也是有活性的。
按照Salzmann等人的方法(心血管藥理學(xué)雜志(J.Cardiovasc.Pharmaco1.)12，451-460，1988)用硫噴妥麻醉(120mg/kg腹膜內(nèi))的體重300～350g雄Wistar鼠進(jìn)行試驗(yàn)。將插管安插在右頸靜脈和右股靜脈中，在左心室(通過(guò)右頸動(dòng)脈插入)、左股動(dòng)脈和主動(dòng)脈(通過(guò)右股動(dòng)脈插入)中。測(cè)量或計(jì)算出如下的參數(shù)收縮期、舒張期及平均動(dòng)脈血壓(mmHg；左股動(dòng)脈，Statham血壓換能器P23Gb)、脈壓(mmHg)、心律(跳/分鐘，由血壓曲線觸發(fā))、左室壓升速(dp/dtmax，mmHg/s；Statham血壓換能器P23Gb)、心輸出量(ml/min/100g體重，熱稀釋法，右頸靜脈和主動(dòng)脈)、總外周阻力(dyness.cm-5/100g體重)、表面心電圖。用Schwarzer多波圖連續(xù)記錄動(dòng)脈血壓、左心室壓、dp/dtmax、心律和心電圖。在給測(cè)試物前30、20、10和2分以及向右股靜脈注射藥物后1、5、10及15分鐘時(shí)測(cè)定參數(shù)。式Ia化合物的注射劑量約為0.001～約10mg/kg動(dòng)物體重。在累積劑量0.003、0.010和0.03mg/kg時(shí)測(cè)定1號(hào)化合物，每種劑量使用3個(gè)動(dòng)物。1號(hào)化合物導(dǎo)致血壓(ED50＝49μg/kg靜脈注射)和心律下降，系統(tǒng)血管傳導(dǎo)性上升。
在上述適應(yīng)癥中使用的式Ia化合物的劑量將以一般的方式隨著疾病的嚴(yán)重程度、患者體重和該化合物的相對(duì)效能不同而變化。然而，作為一個(gè)通用的指導(dǎo)，適用的單位劑量可以是0.1～1000mg，像0.1～10、0.5～200、0.5～100或0.5～10mg，比如0.1、0.5、1、2、3、4或5mg；此單位劑量可以一天服用一次以上，比如一天2、3、4、5或6次，但優(yōu)選每天1次或2次，這樣，對(duì)于一個(gè)70kg重的包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物，一天的總劑量為約0.1～1000mg(比如口服)或0.003～300mg(靜脈注射)，即在約0.001～20mg/kg/日的范圍，像0.007～3、0.007～1.4、0.007～0.14、或0.01～0.5mg/kg/日；比如0.01、0.02、0.04、0.05、0.06、0.08、0.1或0.2mg/kg/日；這樣的治療可持續(xù)數(shù)周或數(shù)月。對(duì)于1號(hào)化合物，對(duì)本發(fā)明的所有適應(yīng)癥，對(duì)于70kg的成人的優(yōu)選劑量為0.1mg/日-10mg/日。對(duì)于優(yōu)選適應(yīng)癥，非胰島素依賴型糖尿病和高甘油三酯癥，對(duì)于人的適應(yīng)劑量為0.2～2mg/日(口服)，對(duì)于治療心力衰竭和其它心臟疾病為0.2～10mg/日，具體對(duì)于心律不齊，比如心動(dòng)過(guò)速性房顫為0.5～5mg/日(口服)或0.25～5mg(靜脈注射)。
式Ia化合物可以通過(guò)任何適當(dāng)?shù)耐緩竭M(jìn)行配方以利服用，優(yōu)選的途徑取決于需要治療的疾病，最好以單位劑量或者病人自己可以以單劑量服用的形式服用。該組合物最好如上面所述在用于止痛時(shí)要適合于口服、直腸、局部、非胃腸道、靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)給藥。
適合口服的單位劑型可以是片劑和膠囊，它們含有0.05～20mg式Ia的化合物。
按照本發(fā)明的化合物或它的水合物或者它與有機(jī)溶劑的加合產(chǎn)物將適合與制劑重量的約0.5～約20％，優(yōu)選約1～約10％，比如2～5％。
給溫血?jiǎng)游锉热缡?、狗和人，在施用式中R1為(C4～8)環(huán)烷基、R3是烷基的式I化合物時(shí)，檢出作為代謝產(chǎn)物的式中R1′為羥基(C4～8)環(huán)烷基、R3為烷基的式Ia化合物。
因此， 施用化合物M導(dǎo)致產(chǎn)生羥基環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷。
在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種給溫血?jiǎng)游锸┯肗6-環(huán)己基- 2′-O-甲基腺苷以產(chǎn)生N6-羥基環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷的方法。
在另一方面，本發(fā)明提供純凈的比如高于95％純度的N6-羥基環(huán)烷基-2′-O-烷基腺苷。本文所述的例子化合物符合該標(biāo)準(zhǔn)。
在再一個(gè)方面，本發(fā)明提供不含有環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷的N6-羥基環(huán)己基-2′-O-烷基腺苷。
在另一方面，本發(fā)明提供一種制造2′-O-烷基腺苷的一種方法，這包括在相轉(zhuǎn)移催化劑存在下用適當(dāng)?shù)牧蛩嵬榛ヌ幚硐佘铡?br> 2′-O-烷基腺苷優(yōu)選任何前面定義的化合物。
在再一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種制造如前面所定義的式I化合物的方法，這包括使式VI VI的化合物與式(R3)2SO4化合物的堿性溶液在四丁基銨硫酸氫鹽存在下和非極性溶劑中反應(yīng)，再通過(guò)重結(jié)晶將產(chǎn)物提純。
如有必要可暫時(shí)將反應(yīng)性基團(tuán)保護(hù)起來(lái)。
硫酸烷基酯優(yōu)選是硫酸二(C1～4)烷基酯。
相轉(zhuǎn)移催化劑優(yōu)選四丁基銨硫酸氫鹽。
優(yōu)選在如下面敘述的非極性溶劑中進(jìn)行此反應(yīng)。
定義一組式I的化合物，其中R1是(C3～8)環(huán)烷基、R2是氫或(C1～4)烷基，R3是(C1～4)烷基。
至今為止，制備式I化合物一般要經(jīng)過(guò)6步，這包括制備2′，3′，5′-三乙酰肌苷；氯化和水解6-氯-9-β-D-呋喃核糖基-9H-嘌呤；用四異丙基二硅氧烷(TIPDS-CL2)保護(hù)3′-O-位及5′-O-位；2′-O-烷基化并用硅膠色譜提純；將3′-O-和5′-O-位解保護(hù)；和與R1NH2反應(yīng)并重結(jié)晶，得到式I化合物。
本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，無(wú)需進(jìn)行3′-O-和5′-O-二硅氧烷保護(hù)和解保護(hù)，也不用硅膠色譜就能以很好的產(chǎn)率和純度制備式I化合物。本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)，可以最好用辛脂的2′，3′，5′-三丙酸肌苷代替現(xiàn)有技術(shù)方法的原料2′，3′，5′-三乙酸肌苷，這樣使產(chǎn)量翻番并除去有害的吡啶溶劑。
在本發(fā)明中，按照如下反應(yīng)式在相轉(zhuǎn)變催化劑條件下制備式I化合物 VII式中R1、R2和R3如前面所定義可以在四丁基銨硫酸氫鹽和水不相溶有機(jī)溶劑存在下，通過(guò)式(VI)化合物的堿性水溶液與硫酸二(C1-4)烷基酯反應(yīng)制備式I化合物。用于制備堿性水溶液的堿最好是堿金屬氫氧化物，如NaOH或KOH。此溶劑可以是任何與水不相容或基本不相容的、而式I的化合物在其中又是可溶的溶劑，如二氯甲烷或叔戊醇。反應(yīng)最好在約-20～約50℃之間，特別是在室溫下進(jìn)行。反應(yīng)時(shí)間并不關(guān)鍵，最好在約5～10小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行，特別在約7～8小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。通過(guò)蒸發(fā)，然后與1∶1的水和惰性溶劑(優(yōu)選甲苯)的混合物一起在室溫下攪拌5～7小時(shí)，再過(guò)濾和干燥來(lái)分離式I化合物粗品。用分步結(jié)晶，最好通過(guò)如下步驟來(lái)得到純化合物1)用惰性溶劑如甲苯進(jìn)行重結(jié)晶，將化合物粗品溶于80℃溶劑，在大約55℃加熱約1hr，冷卻至室溫，用純化合物引晶，并過(guò)濾；2)重復(fù)步驟1)的重結(jié)晶操作，但在冷卻至室溫前在約65℃加熱；以及3)用100％乙醇重結(jié)晶，在回流下溶解，用水稀釋、引晶，然后過(guò)濾和干燥。
許多式VI的化合物是已知的，可以用在比如前述的USP4,843,066和USP4,985,409等文獻(xiàn)中敘述的方法制備。式VI化合物，最好也可以如上面所指出的，按照如下優(yōu)選的反應(yīng)式制備 VII VII IX這里R1和R2如前所定義。
用丙酸酐?；絍II的肌苷以形成在2′-O-、3′-O-和5′-O-位保護(hù)的式VIII化合物，用亞硫酰氯鹵化式VIII化合物形成了式IX中間體；以及同時(shí)氨化和水解式IX化合物，從而可制備式VI的化合物。肌苷酰化反應(yīng)最好在100～110℃的溫度下，在甲苯、三丁胺和4-二甲氨基吡啶的混合物中進(jìn)行4～5小時(shí)。通過(guò)用庚烷沉淀來(lái)分離式VIII化合物。
式VIII化合物的鹵化反應(yīng)最好在60～70℃的溫度下，在甲苯和N，N-二甲基甲酰胺的混合物中進(jìn)行3～4hrs，式IX化合物的溶液可在用水及鹽水洗滌后使用。最好通過(guò)加入胺R1NH2和在100～110℃的溫度下反應(yīng)15～20hr來(lái)氨化并同時(shí)水解式IX的中間體。在室溫下過(guò)濾分離式VI化合物，并經(jīng)重結(jié)晶提純。
通過(guò)如下各實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的方法。
方法定施例1N6-環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷步驟A.2′，3′，5′-三丙酸肌苷將271.2g肌苷、966ml三丁胺、3.30g 4-二甲氨基吡啶和600ml甲苯的混合物加熱到內(nèi)溫為104～105℃，在35分鐘內(nèi)以保持內(nèi)溫在104～105℃的速度加入453ml丙酸酐。在此溫度下再攪拌4hr后，用冰浴將此混合物冷卻至5～10℃，加入1000ml庚烷。在室溫(20～22℃)下攪拌得到的懸浮液30分鐘，然后在比如Bucbner漏斗上過(guò)濾。用總量450ml，每次150ml(三等份的庚烷洗滌固體，并在25mmHg下于45～50℃干燥過(guò)夜(14hr)，得到425.9g白色固體狀2′，3′，5′-三丙酸肌苷(m.p171～172℃；產(chǎn)率96.5％)。步驟B.N6-環(huán)己基腺苷將270.6g 2′，3′，5′-三丙酸肌苷、240ml N.N-二甲基甲酰胺和600ml甲苯的混合物加熱到65℃，并在1小時(shí)內(nèi)以保持內(nèi)溫在62～65℃的速度加入67.84ml亞硫酰氯。在此溫度下將混合物再攪拌2.5hr，然后用冰浴冷卻至10℃。加入在冰浴中預(yù)冷至10～15℃的600ml冷水，加入速度使得保持溫度低于20℃，然后分離出有機(jī)層，并用總量800ml，分成4等份每份200ml的10％NaCl水溶液洗滌。在2小時(shí)內(nèi)，在攪拌下將含有6-氯-9-(2，3，5-三-O-丙酰基-β-呋喃核糖基)-9H-嘌呤粗品的有機(jī)層加到加熱到105℃的620ml環(huán)己胺中，加入速度控制在保持內(nèi)溫為105℃。在此溫度下將此混合物再攪拌17hr后，在大約2小時(shí)內(nèi)通過(guò)充分?jǐn)嚢鑼⑵浣档绞覝?25℃)，然后用比如Buchner漏斗吸濾。用總量460ml分成4等份，每份115ml的甲苯洗滌含有N6-環(huán)己基腺苷和環(huán)己胺鹽酸鹽的固體，然后趁濕轉(zhuǎn)移到裝有機(jī)械攪拌的5L燒瓶中。在加入2L飽和NaHCO3水溶液和2.5L醋酸乙酯之后，攪拌該混合物直至所有固體都溶解(大約10～15分鐘)。分離有機(jī)層，用1.5L的醋酸乙酯分1L和500ml兩份分別萃取水層。
合并有機(jī)層，蒸發(fā)(在40℃，100～200mbar)直至除去約3L醋酸乙酯。向殘液中加入500m1庚烷，攪拌得到的混合物30分鐘。用Buchner漏斗分離固體，用總量300ml的庚烷，分成3等份每份100ml進(jìn)行洗滌。然后在45～50℃和30～35mbar干燥該固體大約3hr，得到148g白色固體N6-環(huán)己基腺苷粗品。將其轉(zhuǎn)移到裝有機(jī)械攪拌的1L圓底燒瓶中，加入175ml95％的乙醇。將此懸浮液攪拌15～20分鐘，加入175ml叔丁基乙基醚。攪拌5分鐘后，在冰浴中冷卻此懸浮液并再攪拌15分鐘。在Buchner漏斗上過(guò)濾此懸浮液并用總量50ml的叔丁基甲基醚分成兩份每份25ml進(jìn)行洗滌。
在45～50℃和30～35mbar下干燥過(guò)濾的固體14小時(shí)，得到130g白色固體N6-環(huán)己基腺苷。(m.p185-187℃；產(chǎn)率60.0％)步驟C.N6-環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷在室溫(24～25℃)攪拌94.33g N6環(huán)己基腺苷和720g5％的NaOH水溶液的懸浮液，直至所有固體都溶解(大約5分鐘)。用加料漏斗加入850ml二氯甲烷和5.5g四丁銨硫酸氫鹽，然后在5～10分鐘內(nèi)加入61.3g硫酸二甲酯，此時(shí)維持內(nèi)溫在24～25℃。再用50ml二氯甲烷洗滌加料漏斗，將洗滌液加到反應(yīng)容器中。在24～25℃(內(nèi)溫)將此兩相混合物攪拌7.5hr后，分離有機(jī)層，并在40℃和270～290mbar下蒸發(fā)。直至沒(méi)有溶劑餾出為止。將殘留物溶于200ml甲苯，并在45-50℃和30mmHg下蒸發(fā)，直至再也沒(méi)有溶劑餾出為止。
在室溫下將上述粗產(chǎn)物和2470ml甲苯的混合物攪拌10分鐘，然后在22分鐘內(nèi)加入2470ml的水。在室溫下再攪拌得到的懸浮液6小時(shí)，用比如Buchner漏斗吸濾收集固體產(chǎn)物。在用114ml甲苯和總量285ml，分成3等份，每份95ml的水洗滌固體之后，在48-50℃和25mmHg下干燥固體過(guò)夜(14hr)，得到53.0g白色固體。在攪拌下將此固體在397m1甲苯中的懸浮液加熱至80℃，形成清澈溶液，在45分鐘內(nèi)將其冷卻至56℃并用10mg純物質(zhì)引晶。在55～56℃下攪拌此混合物45分鐘，然后在1小時(shí)內(nèi)冷卻至室溫。在此溫度下再攪拌1小時(shí)以后，用比如Buchner漏斗吸濾收集固體產(chǎn)物。用總量75ml，分為3等份每份25ml的甲苯洗滌固體，得到60g白色固體。再將此固體于159ml甲苯中的懸浮液加熱至80℃，在65～66℃進(jìn)行上面的引晶操作。
在1小時(shí)內(nèi)冷卻至室溫，并在同一溫度下再攪拌1hr以后，過(guò)濾固體，并用42ml，分成3等份每份14ml的甲苯洗滌，并在48～50℃及25mmHg下干燥過(guò)夜(14hr)，得到57.7g白色固體。在攪拌下將此固體和122ml100％乙醇回流加熱，得到清澈的溶液，在25分鐘內(nèi)加入288ml預(yù)先溫?zé)嶂?5℃的水。將此混合物冷卻至55℃，用20mg純物質(zhì)引晶。在1小時(shí)內(nèi)將此混合物冷卻至室溫，并在此溫度下攪拌過(guò)夜(16hr)。用Buchner漏斗吸濾收集固體，用總量57ml，分成3等份每份19m1的100％乙醇和水混合物(1∶2.36v/v)洗滌。在室溫和29mmHg下干澡此固體，得到62.2g白色固體狀1.5水合產(chǎn)物(m.p88-91℃，產(chǎn)率42.5％)。
方法實(shí)施例2按上面的操作，只是使用等當(dāng)量的N6-環(huán)戊基腺苷，得到N6-環(huán)戊基-2′-O-甲基腺苷。
方法實(shí)施例3按照方法實(shí)施例1的各步驟，只是在步驟c)中用叔戊醇代替二氯甲烷，并隨后用乙醇/水初步結(jié)晶之后，產(chǎn)物用乙醇和水進(jìn)行重結(jié)晶。得到32.1g純度超過(guò)98％的N6-環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷，產(chǎn)率大約30％。
本發(fā)明的方法在時(shí)間和成本上都比迄今所知的各種方法更為經(jīng)濟(jì)。該方法提供了在相轉(zhuǎn)變條件下對(duì)N6-環(huán)己基腺苷進(jìn)行選擇性甲基化的方便的方法以及提純2′-O-甲基衍生物的方法。避免使用昂貴的保護(hù)基團(tuán)，也避免了使用色譜。
權(quán)利要求
1.式1化合物在制造適于治療疼痛用藥物中作為止痛劑的應(yīng)用， I其中R1是氫、(C1～4)烷基、烯丙基、甲基烯丙基；直鏈或支鏈的(C3～7)炔基，(C3～8)環(huán)烷基，羥基(C4～8)環(huán)烷基，被1個(gè)或相互獨(dú)立的兩個(gè)原子序數(shù)為9～35的鹵素、(C1～4)烷基、(C1～4)烷氧基或CF3取代的苯基；或苯基(C1～4)烷基，其中的苯環(huán)是未被取代的、或者被1個(gè)或相互獨(dú)立的兩個(gè)原子序數(shù)為9～35的鹵素、(C1～4)烷基、(C1～4)烷氧基或CF3取代的；具有至少一個(gè)羥基或至少兩個(gè)苯基的(C1～4)烷基，雙環(huán)烷基如內(nèi)或外雙環(huán)〔2，2，1〕庚基、萘基(C1～4)烷基、苊基(C1～4)烷基或式A或式B的基團(tuán) 或 其中，Z是氫、羥基或(C1～4)烷氧基，Q是氫或羥基，A是-CH2-、-O-、-S-或直接相連的鍵，Y是-(CH2)n-或直接相連的鍵，n是1～3的整數(shù)，且(A)中的虛線表示一可有或可無(wú)的鍵，R2是氫、(C1～4)烷基、氨基、(C3～5)環(huán)烷基或原子序數(shù)為9-35的鹵素，以及R3是(C1～4)烷基。
2.如權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中式I化合物選自6′-羥基(C4～8)環(huán)烷基-2′-O-甲基腺苷。
3.如權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中R1不是羥基環(huán)烷基。
4.如權(quán)利要求3的應(yīng)用，其中式I化合物是6-環(huán)己基-2′-O-甲基-腺苷。
5.如前面任一權(quán)利要求的應(yīng)用，用于治療急性疼痛。
6.如前面任一權(quán)利要求的應(yīng)用，用于治療慢性神經(jīng)疾病性疼痛。
7.如前面任一權(quán)利要求所定義的化合物在治療前面任一權(quán)利要求所定義的疼痛方面的應(yīng)用，或者如前面任一權(quán)利要求中所定義的疼痛治療方法，這包括給需要進(jìn)行這樣治療的對(duì)象施用在前面任一權(quán)利要求中所定義的化合物；或者含有在前面任一權(quán)利要求中所定義的化合物為止痛劑與藥物載體或稀釋劑的止痛組合物。
8.式Ia化合物 Ia式中R1表示羥基取代的(C4～8)環(huán)烷基，R2及R3如權(quán)利要求1中所定義。
9.如權(quán)利要求8中的化合物，其中R2是氫、(C1～4)烷基或原子序數(shù)為9-35的鹵素。
10.選自下面的一種化合物6-〔(反)-4-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲基腺苷6-〔(順)-4-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲基腺苷6-〔(1S，反)-2-羥基環(huán)戊基〕-2′-O-甲基腺苷6-〔(1R，反)-2-羥基環(huán)戊基〕-2′-O-甲基腺苷6-〔(1S，反)-2-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲基腺苷6-〔(1R，反)-2-羥基環(huán)己基〕-2′-O-甲基腺苷6-〔(反)-4-羥基環(huán)己基〕-2′-O-乙基腺苷，以及6-〔(1 S，反)-2-羥基環(huán)己基〕-2′-O-乙基腺苷。
11.純度為95％的如權(quán)利要求8、9或10的化合物。
12.不含有N6-環(huán)烷基-2′-O-甲基腺苷的如權(quán)利要求8、9或10的化合物。
13.在權(quán)利要求8～12的任一項(xiàng)中所定義的式Ia化合物在制備適于治療疼痛、防治高血壓、作為冠脈舒張劑、用于抑制血小板聚集或激活白細(xì)胞、用于降低血脂濃度、對(duì)抗充血性心力衰竭、心肌梗死、突發(fā)性心臟壞死、腎機(jī)能不全，以及治療高甘油三酯/低HDL膽固醇濃度、脂機(jī)能障礙、高游離脂肪酸和/或I型及II型糖尿病、心律不齊或預(yù)防心肌梗死的藥物的應(yīng)用。
14.一種藥物組合物，它含有治療有效量的如權(quán)利要求8～12中任一項(xiàng)所定義的式Ia化合物和藥物可接受載體或稀釋劑。
15.如權(quán)利要求8～12的任一項(xiàng)的化合物，用于治療疼痛、高血壓、冠狀動(dòng)脈收縮、血小板凝聚、高血脂、充血性心力衰竭、突發(fā)性心臟壞死、腎機(jī)能不全，高甘油三酯/低HDL膽固醇、脂機(jī)能障礙、高游離脂肪酸或I型或II型糖尿病、心律不齊及預(yù)防心肌梗死?；蚴褂么嘶衔锏姆椒?，這包括給需要此治療的對(duì)象施用式Ia化合物。
16.制造2′-O-烷基腺苷的方法，包括在相轉(zhuǎn)移催化劑存在下用適當(dāng)?shù)牧蛩嵬榛ヌ幚硐佘铡?br> 17.如權(quán)利要求16的方法，用于制造如權(quán)利要求1所定義的式I化合物。
18.如權(quán)利要求16或17所要求的方法，其中制造的化合物是N-環(huán)烷基-2′-O-甲基腺苷。
19.由權(quán)利要求16、17或18的方法制造的化合物。
20.給溫血?jiǎng)游锸┯肗6-環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷以產(chǎn)生N6-羥基環(huán)己基-2′-O-甲基腺苷的方法。
全文摘要
式I化合物用作止痛劑，其中R
文檔編號(hào)A61K31/7052GK1147815SQ95192979
公開(kāi)日1997年4月16日 申請(qǐng)日期1995年5月9日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月10日
發(fā)明者F·加迪恩, B·L·K·曼戈, J·R·福扎德, M·法拉沙德, P·K·卡帕 申請(qǐng)人:山道士有限公司