專利名稱：普魯泊福的可注射水分散體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有低脂含量并且最終可蒸汽滅菌的普魯泊福(2,6-二異丙基苯酚)(propofol)的組合物。這些制劑可以用作麻醉劑，微生物在其中生長的可能性極低或被消除。低脂質(zhì)含量的這些制劑能夠降低或不存在發(fā)生高脂血的危險(xiǎn)性。此外，這些制劑在注射位點(diǎn)極小或不引起刺激。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)普魯泊福制劑業(yè)已作為麻醉劑應(yīng)用。普魯泊福的組合物及其臨床應(yīng)用已經(jīng)公開在科學(xué)文獻(xiàn)中。在一系列專利如美國專利4056635(1977)、美國專利4452817(1984)和美國專利4798846(1989)中，Glen和James描述了適合施用給溫血?jiǎng)游镆援a(chǎn)生麻醉作用的含有普魯泊福的組合物。
Glen和James在美國專利4056635和4452817中公開的組合物是普魯泊福與表面活性劑Cremophor-RH40或Cremophor-EL或吐溫-80在水介質(zhì)中的混合物，它們可以含有乙醇或其他可藥用組分。
在后續(xù)的美國專利4452817中，Glen和James描述了含有單獨(dú)或溶于油(如花生油或油酸乙酯)(美國專利4798846)中的1％至2％普魯泊福的普魯泊福組合物。這些制劑可以用足夠量的表面活性劑穩(wěn)定，所述表面活性劑選自聚氧化乙烯月桂酸酯、硬脂酸酯或油酸酯，氧化乙烯與蓖麻油的縮合產(chǎn)物，聚氧化乙烯鯨蠟基、月桂基、硬脂基或油基醚，聚氧化乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯、單棕櫚酸酯、單硬脂酸酯或單油酸酯，聚氧化乙烯-聚氧化丙烯嵌段共聚物，卵磷脂和脫水山梨糖醇單油酸酯、單棕櫚酸酯、單硬脂酸酯或單油酸酯。
基于上述專利，適合臨床使用的普魯泊福制劑(POR,1996)業(yè)已上市(Diprivan1％注射劑)，其中含有溶解在大豆油中的普魯泊福并且用蛋黃卵磷脂穩(wěn)定。每1毫升的這種制劑由10mg/mL普魯泊福、100mg/mL大豆油、22.5mg/mL甘油、12mg/mL蛋黃卵磷脂、調(diào)節(jié)pH至7-8.5的氫氧化鈉和足夠量的水組成。雖然臨床上可應(yīng)用，但這種制劑在操作過程中需要嚴(yán)格的無菌技術(shù)，因?yàn)槠洳缓袣⒕栏瘎┎⑶野殡S有微生物生長的可能性。事實(shí)上，許多在人體中發(fā)生的嚴(yán)重感染與使用市售普魯泊福制劑Diprivan有關(guān)(Nichols等人(1995),Tessler等人(1992),Ardulno等人(1991),Sosis＆Braverman(1993),Sosis等人(1995),Crowther等人(1996))。
為了在靜脈內(nèi)給藥過程中減少因操作普魯泊福制劑所致感染的機(jī)會(huì)，Jones和Platt目前介紹了一種新的普魯泊福制劑，其主要基于原有組合物并且加入抗微生物防腐劑的成分。這種產(chǎn)品公開在美國專利5714520、5731355和5731356中。加入在新制劑中的抗微生物防腐劑是乙二胺四乙酸二鈉。美國專利號(hào)5714520中認(rèn)為加入一定量的乙二胺四乙酸鹽可限制細(xì)菌生長，使其增長不超過10倍，這是利用試驗(yàn)在至少24小時(shí)內(nèi)通過測定金黃色葡萄球菌6538、大腸埃希氏桿菌ATCC 8739、綠銅假單胞菌ATCC 9027和白色假絲酵母ATCC 10231各自的生長來測量，其中在20-25℃內(nèi)，將各種所述生物的洗滌混懸液以約50集落生成單位(CFU)/ML加入所述組合物的單獨(dú)等份試樣中，此后令該等份試樣在20-25℃下溫育并且在24小時(shí)后測試該生物的存活數(shù)量，所述乙二胺四乙酸鹽的用量不超過該組合物重量的0.1％(重量)。
然而，盡管有作為抗微生物生長防腐劑存在的乙二胺四乙酸鹽，一些作者如Sklar(1997)認(rèn)為按照美國藥典(USP)標(biāo)準(zhǔn)，美國專利5714520(Diprivan)所述的產(chǎn)品不是抗微生物防腐產(chǎn)品。雖然在數(shù)量上存在，乙二胺四乙酸鹽可以有效抵抗該專利中提及的一些種類的生物的生長，但普魯泊福給藥無法如此有效抵抗多種流行于臨床情況中的其他生物，例如專利5717520中所述的白色假絲酵母ATCC10231。事實(shí)上，在專利5714520中認(rèn)為，配制的普魯泊福對(duì)于白色假絲酵母10231無抗菌性，其中觀測到經(jīng)48小時(shí)后接種物濃度增高約10倍。這個(gè)結(jié)果顯示，如果受到除上文提及微生物以外的其他生物挑戰(zhàn)或荷載的生物高于100CFU/mL時(shí)，Diprivan中作為防腐劑抑制微生物生長的乙二胺四乙酸可能無效。事實(shí)上，在制劑中加入乙二胺四乙酸鹽無法提供確鑿的改進(jìn)。就抗菌有效性而言，這種“改進(jìn)”制劑劣于Haynes專利(美國專利5637625，參見下文)所述的發(fā)明。
基于專利US5714520、US5731355和US5731356的制劑仍然由高含量的大豆油(10％)組成，在一些患者中大豆油被認(rèn)為可引起高脂血癥。除了加入乙二胺四乙酸鹽之外，這種制劑基本上與原有市售Diprivan制劑相同。實(shí)際中，通過目前的PDR,1999中給出的這些癥狀的發(fā)生率顯示，副作用的發(fā)生率與早期產(chǎn)品相同。
市售普魯泊福制劑在臨床使用中的問題許多作者評(píng)述了普魯泊福制劑的臨床應(yīng)用。例如，Smith等人(1994)描述了普魯泊福注射劑已被應(yīng)用于產(chǎn)生和維持非臥床麻醉，神經(jīng)外科和兒科麻醉，用于監(jiān)測麻醉護(hù)理，用于增強(qiáng)護(hù)理鎮(zhèn)靜和其他臨床情況。有報(bào)導(dǎo)稱28-90％患者在注射市售普魯泊福制劑后在出現(xiàn)疼痛，例如Mirakhur(1988)、Stark等人(1985)、Mangar和Holak(1992)。實(shí)際上普魯泊福在低劑量鎮(zhèn)靜給藥時(shí)，疼痛的發(fā)生率仍可達(dá)到33-50％(White＆Negus,1991；Ghouri等人1994)。普魯泊福給藥導(dǎo)致靜脈疼痛的機(jī)理尚不清楚。早期普魯泊福制劑中的原有賦形劑Cremophor EL在開始時(shí)被認(rèn)為是致痛劑。然而，在將基于Cremophor EL的普魯泊福制劑改換為市售基于大豆油和卵磷脂的制劑后并沒有使疼痛有可觀的減輕(例如參見Mirakhur(1988),Stark等人(1985),Mangar＆Holak(1992),White＆Negus,1991；Ghouri等人(1994))。人們確信疼痛是由該藥物本身的作用而不是制劑所致(Smith等人(1994))。
為了減小注射普魯泊福鎮(zhèn)靜制劑時(shí)的疼痛傾向，Babl等人(1995)報(bào)導(dǎo)了應(yīng)用1％和2％普魯泊福制劑，該制劑含有存在于分散油相中的中鏈甘油三酯(MCT)和長鏈甘油三酯(LCT)的混合物。同樣地，Doenicke等人(1996,1997)已經(jīng)在人體志愿者中證明，在普魯泊福制劑中應(yīng)用MCT使注射所致的重度或中度疼痛的發(fā)生率(9％)比注射市售制劑后(59％)降低。這些作者將疼痛發(fā)生率的降低歸因于通過提高制劑中油的濃度所獲得的水相中游離普魯泊福濃度降低。
雖然增加油的量可以有助于降低水中普魯泊福的濃度并由此減小注射疼痛，但如這些作者使用了水平高達(dá)20％的油(Babl等人，1995,Doenicke等人，1996和1997)似乎進(jìn)一步迫使特護(hù)病房中的患者需要長時(shí)間施用普魯泊福，有可能導(dǎo)致高脂血癥。
盡管注射疼痛或許和注射處的組織刺激或所給制劑的血栓形成有關(guān)，這些不良反應(yīng)仍很流行，并且有關(guān)普魯泊福在臨床應(yīng)用中的癥狀始終見諸報(bào)導(dǎo)。例如，在Diprivan的情況中，這些癥狀包括血栓形成和靜脈炎，并且包括高達(dá)17.6％的灼燒/刺痛或疼痛發(fā)生率(PDR1999，第3416頁)。
顯然仍然需要臨床可接受的普魯泊福制劑，它們應(yīng)克服三個(gè)在普通市售或現(xiàn)有試驗(yàn)制劑中最常見的缺點(diǎn)；也就是說·微生物的生長·脂質(zhì)含量過高，和·注射位點(diǎn)的刺激和/或注射所致疼痛Haynes等人(1995)在美國專利5637625中教導(dǎo)了其它能夠克服某些上述與市售(Diprivan)或試驗(yàn)(例如Babl等人1995所述的那些，和Doenicke等人1996和1997)普魯泊福注射產(chǎn)品有關(guān)的臨床問題的普魯泊福制劑。例如，Haynes確定兩個(gè)與使用大量植物油有關(guān)的問題，這些植物油存在于由1％普魯泊福和10％大豆油組成的市售制劑中(1)特護(hù)病房中接受長時(shí)間鎮(zhèn)靜的患者的高脂血，和(2)高脂質(zhì)含量和缺乏抗微生物防腐劑造成細(xì)菌污染的危險(xiǎn)。
Haynes提出不含有脂肪和甘油三酯的磷脂涂層的普魯泊福微滴制劑可在更長時(shí)間內(nèi)提供麻醉和慢性鎮(zhèn)靜作用而不會(huì)脂肪過量。在Haynes的提議之前，沒有公開過油性賦形劑少于10％(w/w)的含油普魯泊福制劑。Haynes認(rèn)為這些微滴制劑有殺菌作用(例如自體滅菌)，因?yàn)椴缓兄С旨?xì)菌生長的物質(zhì)，由此具有長效保藏期。
鑒于有關(guān)普魯泊福的臨床文獻(xiàn)中所引證的觀察，特別是上述那些觀察，Haynes能夠克服三個(gè)缺點(diǎn)中的兩個(gè)，因此仍然需要一種例如在ICU中可快速濃注或輸注給藥的滅菌普魯泊福制劑，并且特別具有下列所有特征·不含有大量的油或甘油三酯，從而減小患者患高脂血癥的傾向，·具有足夠的殺菌或制菌性質(zhì)，以便為患者提供更高的安全性并且在臨床情況中使用保存期更長，和·在注射位點(diǎn)很少引起或不引起組織刺激。
發(fā)明詳述發(fā)明概述令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，某些普魯泊福組合物當(dāng)被制成為由普魯泊福和普魯泊福可溶試劑組成的非水溶性基質(zhì)的可注射水分散體時(shí)，能夠基本上限制或抑制某些微生物的生長，并且在注射位點(diǎn)不產(chǎn)生刺激作用，如體內(nèi)試驗(yàn)所示。
另一個(gè)意外的發(fā)現(xiàn)是，這種制劑抑制微生物生長的特性不需要加入任何抗微生物防腐劑。
另一個(gè)意外是，該普魯泊福的水分散體可被制成在其水相中含有不同多羥基類化合物的最終可蒸氣滅菌且穩(wěn)定的產(chǎn)品。這些多羥基化合物普遍應(yīng)用于靜脈輸注中。利用多羥基化合物制備的普魯泊?？商峁┱扯容^高的組合物。
另外認(rèn)為由于降低了脂質(zhì)含量，這些新的制劑在施用本發(fā)明IV制劑的人群中不易引起高脂血癥。另外，已知LCT和MCT的混合物具有較快的代謝清除率，因此應(yīng)用本發(fā)明的普魯泊福制劑在臨床上是適宜的(Cairns等人，1996；Sandstrom等人，1995)。所以，LCT和MCT的混合物是本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案。
此外，本發(fā)明證實(shí)了配制含有如10％(w/w)普魯泊福的高效普魯泊福組合物的可行性。
組合物本發(fā)明的新的組合物由分散在水相中的毫微米至微米的含有至多15％，或優(yōu)選至多10％普魯泊福的非水溶性基質(zhì)組成，其中包括非水溶性基質(zhì)，由麻醉劑普魯泊福和調(diào)節(jié)抗菌活性水平和注射時(shí)局部反應(yīng)程度的溶解親脂性試劑組成。所述親脂性試劑的實(shí)例包括但不限于一種或多種選自飽和或不飽和脂肪酸酯類化合物，如肉豆蔻酸異丙酯、膽甾醇油酸酯、油酸乙酯、角鯊烯、角鯊?fù)?、?生育酚和/或α-生育酚的衍生物、中鏈和/或長鏈合成或天然脂肪酸的酯或甘油三酯類化合物。天然甘油三酯可以特別選自植物或動(dòng)物來源，例如可藥用植物油或魚油。后者還稱作ω-3多不飽和油。親脂性試劑也可以考慮可溶解普魯泊福的試劑或稀釋劑。
非水溶性基質(zhì)的表面是穩(wěn)定分散體并且可能嚴(yán)重影響注射時(shí)局部反應(yīng)程度的兩親性試劑。所述兩親性試劑的實(shí)例包括帶電或不帶電的天然磷脂，例如蛋黃或大豆卵磷脂；或氫化卵磷脂(例如Nattermann提供的Phospholipon-90H或Phospholipon-100H)；或合成磷脂，如磷脂酰膽堿類化合物或磷脂?；视皖惢衔铮豢伤幱梅请x子表面活性劑，例如多羥基類化合物(poloxamer)(pluronic系列的表面活性劑)、聚羥胺類化合物(poloxamine)(tetronic系列的表面活性劑)、聚氧化乙烯脫水山梨糖醇酯類化合物(例如吐溫系列的表面活性劑)；膽甾醇；或其它常用于藥品中的表面改性劑；或這些表面改性劑的混合物。
水相，主要由可藥用多羥基張力調(diào)節(jié)劑的混合物組成，例如那些常用于靜脈輸注的張力調(diào)節(jié)劑，如蔗糖、葡萄糖、海藻糖、甘露糖醇、乳糖、甘油等。優(yōu)選多羥基化合物的用量足以使最終的組合物與血液等滲或適于靜脈內(nèi)注射。當(dāng)選擇這些多羥基化合物在制劑中的含量不與血液等滲的情況時(shí)，在注射之前可以用適當(dāng)稀釋劑稀釋以調(diào)節(jié)張力。水相另外可含有一定量的pH調(diào)節(jié)劑，例如氫氧化鈉和/或可藥用酸和/或其有關(guān)鹽。優(yōu)選將pH調(diào)節(jié)為約9至約4，更優(yōu)選約8至5?？刹捎每伤幱镁彌_體系。
本發(fā)明的組合物任選地含有其它可藥用試劑，例如其它抗微生物劑，局部或長效麻醉劑，螯合劑或抗氧劑。其實(shí)例包括但不限于對(duì)羥基苯甲酸酯類化合物亞硫酸鹽或乙二胺四乙酸鹽，利多卡因或偏硫酸氫鹽。
更可取地，對(duì)本發(fā)明組合物進(jìn)行選擇以便在藥物可接受條件下對(duì)末期滅菌穩(wěn)定。
發(fā)現(xiàn)用多羥基化合物制備的普魯泊福制劑提供具有較高粘度的組合物。這些制劑的粘度是約1.5至8厘泊并且更優(yōu)選約4至6厘泊。雖然不受任何特定理論的制約，可以認(rèn)為這種高粘度可以部分減小制劑的組織刺激作用。
方法普魯泊福是一種很難溶于水的液體。為了制備具有理想抗微生物性質(zhì)、低脂質(zhì)含量和低注射位點(diǎn)反應(yīng)性并且在混合或保存過程中很少或不發(fā)生相分離的穩(wěn)定可注射普魯泊福制劑，發(fā)現(xiàn)不但必須選擇適當(dāng)?shù)闹苿┙M成，而且必須采用適當(dāng)?shù)募庸l件。適用加工條件的實(shí)例是那些提供強(qiáng)機(jī)械攪拌或高剪切的加工條件，例如參見Haynes所述的方法(美國專利5637625)。制劑一般利用起始制備的親脂相和水相來制備，隨后將它們混合，所屬技術(shù)領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)懂得其它方法也適用，并且能夠很容易決定這些方法。例如，已證實(shí)下面段落中簡述的單元過程是適用的。
預(yù)混制劑將普魯泊福、其它親脂性試劑和兩親性試劑混合制得親脂相。通過加熱該混合物同時(shí)用高速勻漿器混合可以加快溶解過程。水相常常是存在于水中的多羥基化合物的混合物，并且在某些情況中還含有用高速勻漿器制備的分散充分的磷脂。在高速勻漿器攪拌和調(diào)節(jié)pH的條件下將親脂相加入水相中制備預(yù)混物。所有這些操作是在通用惰性環(huán)境中進(jìn)行，例如氮?dú)獗Ｗo(hù)，并且控制溫度減少氧化。
均化非水溶性基質(zhì)在水介質(zhì)中的分散體可以通過若干種均化方法制備。例如，通過高壓均化預(yù)混物制備分散體，例如利用RannieMINI-LAB,8.30H型勻漿器(APV勻漿器部，St.Paul,MN)。另外，通過用微流化機(jī)M110EH(Microfluidics,Newton,MA)微流化預(yù)混物也可以制備分散體。流體加工的溫度迅速升高，因?yàn)榫窃诟邏合逻M(jìn)行。在某些情況中，在高溫下高壓均化(勻漿器入口溫度高于約30℃)導(dǎo)致分散體趨于相分離。所以，將勻漿器的排放物冷卻以維持一個(gè)可接受的勻漿器入口溫度。
包裝和滅菌將利用一種上述方法制備的水分散體填充在玻璃瓶中至容積的約70-90％，用通用惰性氣氛如氮?dú)鈨艋?，并且選擇適當(dāng)?shù)娜雍腿鄯?。發(fā)現(xiàn)包裝的新普魯泊福制劑普遍對(duì)藥物可接受的蒸氣滅菌循環(huán)穩(wěn)定。
大鼠尾靜脈刺激試驗(yàn)通過給大鼠注射試驗(yàn)利用上述方法制備的普魯泊福制劑引起靜脈組織刺激的能力。約11至12周齡的雌性Sprague-Dawley大鼠購自Charles River,St Constant,PQ。經(jīng)過環(huán)境適應(yīng)期后，選用健康且體重為200至250g的大鼠。
試驗(yàn)制劑以快速濃注每天注射1次共2天，即第1和2天。在約30秒的時(shí)間內(nèi)注射到距尾遠(yuǎn)端約5cm處的尾靜脈中。第1天基于體重給予12.5mg/kg的普魯泊福劑量。在研究的第1至3天每天觀察大鼠Ⅰ.總體觀察
每天檢查一次動(dòng)物的全身健康/死亡率和發(fā)病率，連續(xù)3天。每天詳細(xì)記錄臨床觀察結(jié)果。觀察動(dòng)物自靜脈內(nèi)給藥后的明顯中毒效應(yīng)。
Ⅱ.尾靜脈刺激在試驗(yàn)制劑給藥之前，測量大鼠距鄰近動(dòng)物身體中心約2.5英寸處的尾部周長。該測量值作為基線值用于評(píng)估制劑靜脈內(nèi)給藥后尾部可能的腫脹。在研究的每天中，仔細(xì)檢測處理位點(diǎn)以監(jiān)測任何反應(yīng)并且測量大鼠尾部周長。通過將第2和第3天的測量值與給藥前基線值比較評(píng)估大鼠尾部周長的改變。
藥代動(dòng)力學(xué)指標(biāo)在注射前后觀察各試驗(yàn)大鼠。記錄喪失意識(shí)所需的時(shí)間(感應(yīng)時(shí)間)。還測量復(fù)蘇，即自發(fā)地試圖用四肢站立的時(shí)間(正向反應(yīng)時(shí)間)。正向反應(yīng)時(shí)間減去意識(shí)喪失時(shí)的時(shí)間之差是麻醉時(shí)間。
溶血的可能性體外評(píng)估本發(fā)明制劑對(duì)人全血的溶血作用是選擇不易在注射位點(diǎn)產(chǎn)生刺激作用的制劑的另一個(gè)指示。制劑對(duì)血液的溶血潛在性是通過測定紅細(xì)胞胞質(zhì)標(biāo)識(shí)酶乳酸脫氫酶(LDH)來評(píng)估。測量的由滲漏或破裂紅細(xì)胞逃逸到血液的血漿隔室內(nèi)的紅細(xì)胞胞質(zhì)標(biāo)識(shí)酶LDH是一個(gè)文獻(xiàn)中常用于評(píng)估注射制劑的溶血潛在性的定量試驗(yàn)(Senz和Bauer,1996)。由18-65歲的男性或女性白種人志愿者獲得血液并且用肝素鈉穩(wěn)定。將試驗(yàn)制劑與等體積的人全血混合并且在37℃下保溫約1小時(shí)。隨后在室溫下靜置該混合物30分鐘，隨后在1500rpm離心10分鐘。利用該領(lǐng)域普通專業(yè)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法測定上清液中LDH的濃度。作為本研究的指導(dǎo)，利用鹽酸胺碘酮通過溶血潛在性方法測量出LDH的濃度，由LDH的濃度測定出適宜的可接受上限，已知鹽酸胺碘酮在臨床情況中是一種靜脈注射時(shí)導(dǎo)致靜脈刺激的化合物(PDR 1999,3289頁)。按照產(chǎn)品說明所述，測試50mg/mL和用5％葡萄糖水稀釋至1.8mg/mL時(shí)的鹽酸胺碘酮Ⅳ溶液，分別得到8190IU/L和673 IU/L的LDH值。
微生物抑制作用測試本發(fā)明所述的制劑抑制微生物生長的能力，這些微生物在臨床情況中是多數(shù)感染的潛在來源。通過試驗(yàn)測定金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸埃希氏桿菌(ATCC 8739和ATCC 8454)、綠銅假單胞菌(ATCC 9027)、白色假絲酵母(ATCC 10231)和黑曲霉(ATCC16403)的生長，其中在20-25℃內(nèi)，將各種所述生物的沖洗混懸液以約1000集落生成單位(CFU)/mL加入所述制劑的單獨(dú)等份試樣中。在20-25℃下溫育該接種混合物。在24小時(shí)和48小時(shí)、第7天和其它適當(dāng)長的時(shí)間后通過獲取該生物的集落數(shù)量來測定接種制劑中微生物的存活率。
實(shí)施例下文簡單概括包括本發(fā)明那些制劑在內(nèi)的多種制劑的實(shí)施例。在這些實(shí)施例中也公開了一些特定組合物的體內(nèi)或體外行為。
除非另外指出，本發(fā)明中所述的全部份數(shù)或百分比是每單位重量的重量(w/w)，其中分母中的重量代表制劑的總重量。直徑的大小為毫米(mm=10-3米)，微米(μm=10-6米)，或毫微米(nm=10-9米)。體積為升(L)，毫升(mL=10-3L)和微升(μm=10-6L)。稀釋是以體積計(jì)。所有溫度為攝氏度。本發(fā)明的組合物包括，主要由上述物質(zhì)組成或由所述物質(zhì)組成，并且加工或方法可以包括、基本上由或由所述步驟和物質(zhì)構(gòu)成。
本發(fā)明參考下列優(yōu)選實(shí)施方案作進(jìn)一步的解釋并且也提及不適宜的組合物。上文提及了實(shí)施例的通用方法；注意例外。制劑是通過上述方法制備。用于制備本發(fā)明制劑的原料概括如下

實(shí)施例1提高制劑油含量的作用本實(shí)施例的試驗(yàn)用于鑒定制劑的可變性，它們是隱藏在理想屬性后的因素。
表Ⅰ概括了普魯泊福制劑的某些實(shí)施例及其隨油含量提高的屬性。油酸乙酯含量由0.4％提高至10％，從而使這些制劑的油濃度提高。普魯泊福的濃度保持在1％。隨著油含量的提高調(diào)節(jié)磷脂混合物的含量(Lipoid E80和DMPG)使制劑具有良好的穩(wěn)定性。
發(fā)現(xiàn)大鼠尾部腫脹隨油含量的增高而減小，腫脹是制劑引起組織刺激傾向的一個(gè)指標(biāo)(參見上文)。含有4-10％油酸乙酯的制劑#1.4-1.6似乎導(dǎo)致不顯著的大鼠尾部腫脹。這個(gè)結(jié)果與已報(bào)導(dǎo)的發(fā)現(xiàn)(Babl等人1995和Doenicke等人1996和1997)相似，在普魯泊福制劑中使用較大量的油可降低注射疼痛的發(fā)生率，這可能是因?yàn)榻档土似蒸敳锤Ｔ谒械臐舛?。然而，這些作者在他們的普魯泊福制劑中采用了非常高含量(20％)的MCT和LCT混合物，這樣的制劑肯定有利于微生物的生長。
表Ⅰ提高制劑油含量的作用

通過測定與等量制劑混合的人全血樣本中的LDH活性，按照上述方法評(píng)估表Ⅰ的制劑的溶血潛在性。表Ⅰ概括的結(jié)果證明制劑的溶血潛在性隨著油酸乙酯含量的增高而降低。
雖然含有10％油酸乙酯的制劑#1.6可以具有可耐受的溶血和注射位點(diǎn)組織刺激作用，這種制劑遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能夠符合本發(fā)明的目的，因?yàn)樗懈吆康挠?，即油酸乙酯。這個(gè)問題與現(xiàn)有技術(shù)提及的普通市售或試驗(yàn)普魯泊福制劑有關(guān)。適合快速濃注或輸注的理想普魯泊福制劑應(yīng)同時(shí)具有下列全部特征·不合有大量的油或甘油三酯，從而減小患者患高脂血癥的傾向，·在注射位點(diǎn)很少引起或不引起組織刺激，和·具有足夠的殺菌或制菌性質(zhì)，以便為患者提供更高的安全性并且在臨床情況使用中保存期更長。
所以，一種更適用的制劑應(yīng)具有可接受水平的注射位點(diǎn)組織刺激作用，但油含量應(yīng)明顯低于本實(shí)施例中的最佳制劑(#1.6)。許多滿足這些標(biāo)準(zhǔn)的制劑概括在以下實(shí)施例中。
實(shí)施例2大鼠尾靜脈刺激作用和溶血潛在性本實(shí)施例中提供了按照上述方法制備的多種制劑，并且通過大鼠尾靜脈腫脹試驗(yàn)(參見上文)的評(píng)估證實(shí)了這些制劑具有可接受的注射位點(diǎn)組織刺激作用。這些制劑概括在表Ⅱ中。當(dāng)尾靜脈靜脈內(nèi)施用例如制劑2.1至2.25時(shí)，尾周長的增加為零，這表明不存在刺激作用。
然而，按照Haynes的專利(美國專利5637625)所述方法復(fù)制的多個(gè)組合物，例如制劑2.26至2.29和制劑2.30，它們引起尾靜脈明顯刺激作用。
在實(shí)施例1中觀察到，通過使制劑中的油含量由0.4％增高至10％或更高，可以減小組織刺激作用。然而，實(shí)施例2表明，這種過分簡單的想法沒有超越局限，因?yàn)樵谀承┣闆r中僅僅提高普魯泊福制劑中的油含量是無法獲得一種低刺激性的配方。例如，在制劑2.26中油的水平提高到油酸乙酯為6％，而且在制劑2.27和2.28中Miglyol-810達(dá)到4％，但這些制劑仍然在注射位點(diǎn)引起組織刺激，由這些制劑在尾部腫脹值可以明顯看出。
雖然制劑2.26至2.30是刺激性的，令人驚奇的是許多含油濃度至多4％的組合物是無刺激的。例如，制劑2.15含有低至2％的油，但它也是一種非刺激制劑。這個(gè)意外的結(jié)果表明，這些制劑的優(yōu)選組成本身迥異于利用線性析因試驗(yàn)設(shè)計(jì)的傳統(tǒng)制劑途徑，線性析因試驗(yàn)設(shè)計(jì)無法揭示出潛在的協(xié)同作用。一旦鑒定出具有確定可接受特性的制劑的組合要素的可接受范圍，利用上述方法選擇優(yōu)選實(shí)施方案就成為一種例行決定。
審視表Ⅱ中的數(shù)據(jù)可以驚奇地發(fā)現(xiàn)，許多具有低LDH水平并且保持無注射位點(diǎn)組織刺激跡象的組合物在其水相中也含有甘露糖醇或海藻糖。更為驚奇的是許多這種組合物的黏度高于1.2厘泊，在某些情況下甚至高于3厘泊，這些制劑的高黏度使它們?cè)谌苎獫撛谛苑矫姘踩?br> 由實(shí)施例1和實(shí)施例2看出，僅僅提高制劑中的油含量不能降低溶血潛在性或在注射位點(diǎn)對(duì)組織的刺激，似乎當(dāng)油低于一定量(例如＜10％)時(shí)，改善溶血作用或組織刺激性的誘發(fā)因素是源于特定組成的多種因素的綜合。因此，具有低溶血作用的無刺激配方的特征在于多種制劑組分可產(chǎn)生協(xié)同作用使優(yōu)選制劑減小刺激性。
實(shí)施例3對(duì)微生物的抑制作用不論證明制劑在大鼠中不存在血栓形成刺激或是引起此類刺激作用，如上文所述方法試驗(yàn)所有制劑殺微生物或抑制微生物的有效性，其中一些相關(guān)結(jié)果概括在表Ⅲ中。另外，在表Ⅲ中用Diprivan的殺微生物有效性試驗(yàn)結(jié)果作為參比。
發(fā)現(xiàn)多種組合物能夠抑制微生物的生長。通過減少或保持一定數(shù)量集落的接種微生物測定對(duì)微生物生長的抑制作用。例如，表Ⅱ中的制劑2.1、2.3和2.4一致表現(xiàn)出全部所需特性；降低的刺激作用(大鼠尾靜脈無腫脹)，可接受的溶血作用(低LDH值)以及抑制試驗(yàn)微生物的生長(參見表Ⅲ)。
表Ⅱ一些普魯泊福的組成，這些制劑對(duì)大鼠尾靜脈的刺激和溶血作用，通過在與人血一起培養(yǎng)時(shí)乳酸脫氫酶(LDH)的水平測定。

表Ⅱ續(xù)

符號(hào)和注解DMPC二肉豆蔻?；柞Ｄ扄|；DMPG二肉豆蔻?；柞８视停籈80Lipoid E80；E0油酸乙酯；EPC蛋黃磷脂膽鹼；EPL蛋黃磷脂；GLY甘油；M810Miglyol-80；MAN=甘露糖醇；SO大豆油；SPC大豆磷脂酰膽鹼；SSPC飽和大豆磷脂酰膽鹼；TRE=海藻糖。這些原料的來源如上所述。表Ⅲ在某些普魯泊福制劑存在下開始接種103CFU/ml后某些微生物的對(duì)數(shù)生長。

令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，這些組合物在其水相中也含有甘露糖醇或海藻糖。進(jìn)一步意外發(fā)現(xiàn)這些組合物的粘度高達(dá)約4.2至約5.3厘泊。
正如Haynes所教導(dǎo)的(美國專利5637625)，可以認(rèn)為制劑中脂質(zhì)營養(yǎng)素含量的增加導(dǎo)致制劑支持微生物的生長。然而，意外發(fā)現(xiàn)通過提高油的含量(達(dá)到4-6％)，制劑2.1、2.3或2.4沒有為細(xì)菌生長提供介質(zhì)。更有價(jià)值地發(fā)現(xiàn)是，制劑2.1、2.3或2.4既無刺激性也無溶血性，同時(shí)還可抑制微生物的生長。三種無刺激、無溶血性和殺菌或制菌制劑是本發(fā)明優(yōu)選組合物的非限定實(shí)施例。
實(shí)施例4高效價(jià)普魯泊福制菌按照上述方法制備表Ⅳ中的高效價(jià)普魯泊福制劑4.1-4.3。發(fā)現(xiàn)這些制劑最終可蒸氣滅菌而不失去穩(wěn)定。
表Ⅳ高藥物效價(jià)的普魯泊福制劑制劑4.1 制劑4.2 制劑4.3普魯泊福 5.0％10.0％10.0％膽甾醇0.25％ 0.4％ 0.5％膽甾醇基油酸酯 --- 4.0％ 3.0％Phospholipon 90H 1.5％ 1.8％ 1.5％DMPG 0.3％ 0.3％0.15％甘油 2.5％ 2.5％ 2.5％氫氧化鈉 qs pH6.9 qs pH8.2 qs pH7.0水 qs100％ qs100％ qs100％這些高效價(jià)制劑極其穩(wěn)定并且采用了不改變藥物功效的可藥用組分。例如，在以10mg/kg對(duì)大鼠靜脈內(nèi)給藥時(shí)，證明制劑4.1具有可接受的普通麻醉劑的功效。
制劑4.2驗(yàn)證了一種均化普魯泊福分散體，其存在于含2.5％甘油的水載體中。它具有高達(dá)10％的普魯泊福，同時(shí)保持很低的脂肪(膽甾醇和膽甾醇基油酸酯)含量。它具有82nm的容積稱重平均粒度，它在受到不同應(yīng)力如冷凍/溶化時(shí)沒有明顯改變(3個(gè)循環(huán)后為128nm)。
制劑4.3也是一種很均勻的分散體，其存在于含2.5％甘油的水載體中并且含有10％的普魯泊福，同時(shí)維持很低的脂肪含量。它具有80nm的容積稱重平均粒度，它在25℃下保存時(shí)沒有明顯改變(70天后71nm)。
高效制劑(例如10％普魯泊福)將有效地減少靜脈內(nèi)給藥所需的藥物體積，同時(shí)提供同樣有效的給藥效果。因此，本實(shí)施例中所述的制劑將使血管壁與制劑的接觸面積相對(duì)更小，并且可對(duì)減少注射疼痛的發(fā)生率或其它局部不良反應(yīng)起重要作用。
本發(fā)明首次公開和制備了此類高效、穩(wěn)定的普魯泊福制劑。
實(shí)施例5藥代動(dòng)力學(xué)比較本發(fā)明的普魯泊福制劑和參比市售制劑Diprivan(1％)和Diprivan(2％)在大鼠中麻醉感應(yīng)和持續(xù)的時(shí)間。將這些制劑在大鼠中12.5mg/kg單劑量靜脈內(nèi)快速濃注，按照試驗(yàn)方法部分所述的方法測量意識(shí)喪失的時(shí)間和正向反應(yīng)時(shí)間。概括在表Ⅴ中的結(jié)果舉例說明了這些制劑的起效特征。
表Ⅴ藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

根據(jù)上述實(shí)施例，本發(fā)明提供普魯泊福制劑的性質(zhì)是(a)在蒸氣滅菌期間和之后保持穩(wěn)定；(b)靜脈內(nèi)注射給溫血?jiǎng)游飼r(shí)產(chǎn)生所需的麻醉效果；(c)抑制微生物生長(d)已經(jīng)證實(shí)減少或不存在局部靜脈反應(yīng)的發(fā)生；(e)具有很少或不存在發(fā)生高脂血的潛在性。
雖然對(duì)本發(fā)明和實(shí)施例結(jié)合最實(shí)際和優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行了描述，但應(yīng)理解本發(fā)明不局限在已公開的實(shí)施方案，相反地，不同的改進(jìn)和等同方法屬于下文權(quán)利要求書的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)。
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權(quán)利要求
1．一種非水溶性微滴基質(zhì)的穩(wěn)定、滅菌和可注射水分散體，該微滴基質(zhì)的平均直徑為約50nm至約1000nm，主要組成是(a)約1％至約15％的普魯泊福；(b)約1％至約8％的普魯泊福可溶稀釋劑；(c)約0.5％至約5％的表面穩(wěn)定化兩親性試劑；(d)用作張力調(diào)節(jié)劑的可藥用水溶性多羥基添加劑；和(e)條件是普魯泊福與稀釋劑的比例約1∶4至約1∶0.1和普魯泊福與兩親性試劑的比例是約1∶0.8至約1∶2.5，并且該組合物的粘度為約0.8至約15厘泊，其中該制劑·阻止微生物生長，定義為通過試驗(yàn)測定各種金黃色葡萄球菌(ATCC 6538)、大腸埃希氏桿菌(ATCC 8739和ATCC 8454)、綠銅假單胞菌(ATCC 9027)、白色假絲酵母(ATCC 10231)和黑曲霉(ATCC16403)在至少7天內(nèi)不超過起始接種物的0.5個(gè)對(duì)數(shù)增長，其中在20-25℃內(nèi)，將各種所述生物的沖洗混懸液以約1000集落生成單位(cfu)/mL加入所述制劑的單獨(dú)等份試樣中，在20-25℃下溫育該試樣，在24小時(shí)和48小時(shí)、第7天和其它適當(dāng)長的時(shí)間后通過獲取該生物的集落數(shù)量來測定接種制劑中微生物的存活率；·通過試驗(yàn)顯示在注射位點(diǎn)引起很小或不引起刺激，其中所述組合物基于體重以12.5mg/kg每天在約30秒內(nèi)單劑量靜脈內(nèi)快速濃注到大鼠尾靜脈中，連續(xù)2或3天，并且在注射48小時(shí)后大鼠尾部周長沒有明顯增大。
2．權(quán)利要求1的組合物，其中表面穩(wěn)定化兩親性試劑是一種或多種天然或合成表面改性劑，選自離子或非離子磷脂或膽甾醇或這些兩親性試劑的混合物，兩親性試劑的總量應(yīng)使普魯泊福和兩親性試劑的比例為約1∶0.8至約1∶2.5，并且各個(gè)兩親性試劑的種類和含量的選擇條件是(ⅰ)該組合物不存在或很少具有使人或動(dòng)物血液溶血的潛在性，和(ⅱ)在注射位點(diǎn)不存在或很小對(duì)組織產(chǎn)生刺激性，和(ⅲ)該組合物在靜脈內(nèi)給藥時(shí)為溫血?jiǎng)游锖腿颂峁┞樽碜饔谩?br> 3．權(quán)利要求1的組合物，其中普魯泊?？扇芟♂寗┦呛铣苫蛱烊恢舅?、其甘油三酯或其他適用的酯類化合物或它們的混合物。
4．權(quán)利要求1的組合物，其中普魯泊福和普魯泊?？扇芟♂寗┖康谋壤羌s1∶3至約1∶0.5。
5．權(quán)利要求1的組合物，其中普魯泊福和普魯泊福可溶稀釋劑含量的比例是約1∶2至約1∶1。
6．權(quán)利要求1的組合物，其中普魯泊福可溶稀釋劑是中鏈甘油三酯和植物油的混合物。
7．權(quán)利要求6的組合物，其中中鏈甘油三酯與植物油的比例是1∶3至3∶1。
8．權(quán)利要求1的組合物，其中非水溶性基質(zhì)由權(quán)利要求3的兩親性試劑和權(quán)利要求4-7的普魯泊?？扇芟♂寗┖推蒸敳锤５幕旌衔锝M成。
9．權(quán)利要求1的組合物，其中該組合物含有約2％至約10％的普魯泊福。
10．權(quán)利要求1的組合物，其中該組合物含有可藥用可溶于水多羥基添加劑，使含普魯泊福分散體具有約250至約700滲透壓毫摩爾的重量滲透壓摩爾濃度。
11．權(quán)利要求1的組合物，其中所述重量滲透壓摩爾濃度是約300至約500滲透壓毫摩爾。
12．權(quán)利要求1的組合物，其中所述粘度是約2至約5厘泊。
13．一種注射含普魯泊福制劑的降低或基本上完全消除刺激性的方法，該方法用一種非水溶性微滴基質(zhì)的穩(wěn)定、滅菌和抗微生物的可注射水分散體給藥，該微滴基質(zhì)的平均直徑為約50nm至約1000nm，主要組成是約1％至約15％的普魯泊福作為活性成分，至多約7％的普魯泊?？扇芟♂寗?，約0.8％至約4％的表面穩(wěn)定化兩親性試劑，并且該組合物的水相由可藥用可溶于水多羥基張力改性劑組成，該組合物避免加入殺菌或制菌防腐劑，條件是普魯泊福與稀釋劑的比例是約1∶4至約1∶0.1和普魯泊福與兩親性試劑的比例是約1∶0.8至約1∶2.5，并且該組合物的粘度約0.8至約15厘泊。
14．一種引起麻醉的方法，該方法包括給需要麻醉的對(duì)象施用麻醉誘發(fā)量的一種非水溶性微滴基質(zhì)的穩(wěn)定、滅菌和抗微生物的可注射水分散體，該微滴基質(zhì)的平均直徑為約50nm至約1000nm，主要組成是約1％至約15％的普魯泊福作為活性成分，至多約7％的普魯泊?？扇芟♂寗?，約0.8％至約4％的表面穩(wěn)定化兩親性試劑，并且該組合物的水相由可藥用可溶于水多羥基張力改性劑組成，該組合物避免加入殺菌或制菌防腐劑，條件是普魯泊福與稀釋劑的比例是約1∶4至約1∶0.1和普魯泊福與兩親性試劑的比例是約1∶0.8至約1∶2.5，并且該組合物的粘度約0.8至約15厘泊。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種非水溶性微滴基質(zhì)的穩(wěn)定、滅菌和可注射水分散體,該微滴基質(zhì)的平均直徑為約50nm至約1000nm,主要組成是約1%至約15%的普魯泊福,約1%到約8%的普魯泊福可溶稀釋劑,約0.5%至約5%的表面穩(wěn)定化兩親性試劑,可藥用可溶于水多羥基添加劑作為張力改性劑,條件是普魯泊福與稀釋劑的比例是約1∶4至約1∶0.1和普魯泊福與兩親性試劑的比例是約1∶0.8至約1∶2.5,并且該組合物的粘度約0.8至約15厘泊。
文檔編號(hào)A61P23/00GK1313758SQ99809799
公開日2001年9月19日 申請(qǐng)日期1999年8月18日 優(yōu)先權(quán)日1998年8月19日
發(fā)明者A·K·米施拉, G·W·帕斯, M·G·瓦雄 申請(qǐng)人:Rtp藥品公司