專利名稱：一種生物控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于應(yīng)用一種經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物作為控制、預(yù)防和撲滅脊椎動(dòng)物和哺乳動(dòng)物的感染和皮膚缺陷的一種生物學(xué)制劑。本發(fā)明也是關(guān)于減少或避免脊椎動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物，形成皮膚缺陷的一種方法。
背景技術(shù)：
使用螺旋藻或螺旋藻提取物以呵護(hù)皮膚并改善健康皮膚的外觀已為人知。這類例子可在EP 629397，F(xiàn)R26 09 246，CN 11 02 069(摘要)，CN 11 05 566(摘要)中找到。將螺旋藻或螺旋藻提取物敷用于頭發(fā)或加入香波中也是已知的，例如EP 619112。
螺旋藻還被發(fā)現(xiàn)具有抗病毒能力，如US專利No.5585354所示(Hayashi等)。公開了從螺旋藻的熱水提物中純化出一種多糖鈣。這種純化提取物對(duì)治療病毒疾患有效。
此外，還曾報(bào)告螺旋藻具有生物學(xué)活性，例如降低血糖水平(糖尿病時(shí))；降低血膽固醇；及其它效應(yīng)(Hayashi等)。螺旋藻的其它生物學(xué)功能也曾被人發(fā)現(xiàn)，例如Amirani(Chemical Abstracts，91169142n)。這個(gè)發(fā)現(xiàn)是關(guān)于螺旋藻的抗菌活性。在美國專利No 4886756中Kawamura公開了從螺旋藻中得到一種限制性內(nèi)切酶。在J 63 03 391(摘要)中公開了從螺旋藻生產(chǎn)一種生理活性物質(zhì)的方法。
然而，在上述每一種類型的螺旋藻生物活性中，生產(chǎn)螺旋藻或螺旋藻提取物的方法缺乏一致性。在所有發(fā)明中，沒有材料指出哪一種特定類型的提取物或復(fù)合物能最佳地產(chǎn)生特定類型的生物學(xué)活性。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種生產(chǎn)有生物學(xué)活性、經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法，該復(fù)合物能有效地用于上述的任一生物學(xué)活性。本發(fā)明的另一目的是提供一個(gè)價(jià)格合理的方法，優(yōu)于現(xiàn)存的方法。
發(fā)明范圍本發(fā)明提供一種制備經(jīng)處理的螺旋藻化合物的方法，該方法包括以下步驟
將干燥的螺旋藻細(xì)胞在含有碳酸氫鈉的再水化溶液中再水化1～12小時(shí)；用減少一種營養(yǎng)物或部分干燥的方法給培養(yǎng)物以應(yīng)激刺激；以及將復(fù)合物冷凍干燥。
最好是用冷凍干燥法生產(chǎn)無菌復(fù)合物。
本發(fā)明還提供一種生物控制方法，使用經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物以抑制和遏止生物污染物的生長和作用，該方法包括以下步驟按上述方法制備所述的處理的螺旋藻復(fù)合物，以及在目標(biāo)部位或鄰近處敷用該處理的螺旋藻復(fù)合物，該部位選自脊椎動(dòng)物生物污染物作用的外部后果，所述外部后果選自丘疹，口炎，水皰，損傷，膿皰及其復(fù)合；以及留有疤痕組織的陳舊目標(biāo)部位。
本發(fā)明還提供一種哺乳動(dòng)物修復(fù)皮膚缺陷的方法，該方法包括以下步驟按上述方法制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物；以及將復(fù)合物分散于含皮膚缺陷的目標(biāo)部位；所述皮膚缺陷選自疤痕，痘凹，發(fā)紅區(qū)，破裂，燒傷，水皰，銀屑病，濕疹，鱗屑，皺紋及其復(fù)合。
本發(fā)明還提供一種使哺乳動(dòng)物避免皮膚缺陷的方法，該方法包括以下步驟按上述方法制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物；以及將復(fù)合物分散于可能成為皮膚缺陷的目標(biāo)部位，所述皮膚缺陷選自疤痕，痘凹，發(fā)紅區(qū)，破裂，燒傷，水皰，銀屑病，濕疹，鱗屑，皺紋及其復(fù)合。
優(yōu)選地，該復(fù)合物是一種液體培養(yǎng)物，使用時(shí)噴灑在目標(biāo)部位上或鄰近處?；蛘?，該復(fù)合物是一種干燥細(xì)胞的粉劑，使其均勻地分布在目標(biāo)部位上，在涉及單細(xì)胞或多細(xì)胞生物時(shí)可用抖搖或噴送法，對(duì)生長底物則用混合法。還可選擇，將該復(fù)合物(液體培養(yǎng)物或粉劑)加在凝膠或乳膏這類的基質(zhì)中供人或動(dòng)物表皮損傷局部敷用，或浸透在外科敷料中。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式僅僅作為舉例，對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案作一詳述，并附有一系列的實(shí)例。
在描述優(yōu)選實(shí)施方案中，“真菌污染物”，“伴生生物”及“生物劑”等名詞的含義如下真菌污染物-半知菌和子囊菌，分別產(chǎn)生分生孢子或胞囊；伴生生物-與生物劑有共生關(guān)系的伙伴；生物劑-螺旋藻屬的藍(lán)細(xì)菌細(xì)胞活培養(yǎng)物，具有光合及固氮兩種代謝活性。
實(shí)驗(yàn)進(jìn)行使用以下材料真菌污染物內(nèi)痤菌科(Hypocreaceae)-綠色木霉(Trichodermaviride Canterbury CTV1)；發(fā)癬菌屬的種類(Trichophyton sp.)或表皮癬菌屬的種類(Epidermophyton sp.)-人足癬(運(yùn)動(dòng)員足)的病原劑。對(duì)此感染的治療在原位進(jìn)行。
真菌污染物通過新西蘭，Canterbury大學(xué)動(dòng)物學(xué)系可以得到。
伴生生物擔(dān)子菌(Basidiomycota)肺形側(cè)耳(Pleurotuspulmonarius Canterbury CPP1)(Oyster mushroom)；或人體內(nèi)。
生物劑盤狀螺旋藻(Spiruliua platensis)(Earthrise Farms，MassCulture Facilities，California)。
復(fù)合物的制備干燥的盤狀螺旋藻細(xì)胞在0.84w/v碳酸氫鈉(pH8.5)中再水化約12小時(shí)，優(yōu)選在光照下(8-80瓦/m2)進(jìn)行。
或者，再水化溶液中還可含0.04-0.25w/v硫化鈉以抑制細(xì)菌生長。
用減少營養(yǎng)物或部分干燥的方法給培養(yǎng)物以應(yīng)激刺激以產(chǎn)生一休止期。
將復(fù)合物冷凍干燥生成無菌粉末?；蛘撸褂每缮虡I(yè)購賣的干燥盤狀螺旋藻細(xì)胞(Earthrise Farms)。
人外周表皮組織的繼發(fā)感染表淺燒傷和膿皰性痤瘡在原位處理。細(xì)菌感染的指征是在創(chuàng)傷處(表淺損傷或燒傷)有膿皰形成(血疹)，外周炎癥(發(fā)紅)及腫脹。實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)例1-伴生生物污染肺形側(cè)耳組織樣品以25℃培養(yǎng)在PDA平板上。當(dāng)產(chǎn)生的菌絲苔占據(jù)了培養(yǎng)基表面積約2/3時(shí)，每一復(fù)制板用劃線法或噴灑法接種2.5％綠色木霉的浸軟的菌絲和孢子懸液，在25℃下培育5-7天使污染物的孢子形成。分生孢子的特征性的綠色可直現(xiàn)地指示污染物的孢子形成。將感染的平板分成對(duì)照系列和試驗(yàn)系列。用生物劑處理試驗(yàn)系列逐個(gè)用生物劑(0.1％，1％及5％w/v)作表面噴灑處理。全平板比較對(duì)試驗(yàn)及對(duì)照的微生物群體組成每日進(jìn)行定量監(jiān)測。污染物綠色木霉在2-5天內(nèi)完全復(fù)蓋了對(duì)照平行平板的表面，而在具有所有測試濃度(0.1％，1％，5％w/v)生物劑的試驗(yàn)系列中綠色木霉感染的相對(duì)豐度隨時(shí)間進(jìn)行減少。
在使用生物劑后約24小時(shí)，污染物分子孢子的顏色從綠色變?yōu)榘稻G棕色。在四天內(nèi)污染物的分子孢子外觀為綠色球形團(tuán)，肺形側(cè)耳的白色菌絲迅速侵入到綠色物中。繼續(xù)培育48小時(shí)后，在培養(yǎng)基表面看不到污染物的痕跡，而擔(dān)子菌肺形側(cè)耳在每個(gè)試驗(yàn)平板表面完全恢復(fù)，形成連續(xù)的菌苔。光學(xué)及掃描電子顯微鏡檢綠色木霉污染的肺形側(cè)耳培養(yǎng)物在生物劑處理前、后作了比較形態(tài)學(xué)觀察。在處理前，綠色木霉分生子柄的分支型很明顯，其芽分化成特征性的分支結(jié)構(gòu)，終止在分生孢子鏈上。處理后一天，分生孢子的球形結(jié)構(gòu)外觀沒有表面修飾。第五天，菌絲和分生孢子的結(jié)構(gòu)并合成一種無定形原生質(zhì)團(tuán)，似乎與細(xì)胞壁不相結(jié)合。觀察到肺形側(cè)耳菌絲侵入到團(tuán)塊中。結(jié)論是污染物被伴生生物肺形側(cè)耳進(jìn)行腐生代謝。
用此實(shí)驗(yàn)方法對(duì)擔(dān)子菌L.edodes進(jìn)行重復(fù)，觀察到與上文描述相同的變化順序。例2-污染物的處理2.5％的綠色木霉浸軟的菌絲和孢子懸液劃線接種于PDA平板上，25℃下培育5-7天。到孢子形成時(shí)，每個(gè)平行平板噴以1％w/v生物劑，噴及培養(yǎng)基表面100％或50％。
受到100％范圍的噴灑處理的平行板在處理后3天內(nèi)變成黑色。綠色木霉的分生孢子柄和分生孢子變得干燥。沒有活的孢子生成，污染物沒有發(fā)生再生長。
受到50％范圍噴灑處理的平行板在噴灑區(qū)與未噴灑區(qū)之間表現(xiàn)出分離的分界線。噴灑區(qū)退化，變?yōu)榘底厣蚝谏?，猶如在受到100％范圍噴灑的平板中觀察到的一樣，然而，經(jīng)過約5天的時(shí)間，分界線逐漸崩潰，生物劑遷移到未噴灑區(qū)，并攻擊先前未受損傷的污染物菌絲。上述觀察表明，生物劑，象其它藍(lán)細(xì)菌一樣，具有移動(dòng)能力。藍(lán)細(xì)菌的移動(dòng)速度經(jīng)測定為大約2.5mm/天。例3-對(duì)污染物的原位處理A)足癬感染足癬感染引起有鱗屑的、環(huán)狀皮膚損害(通常稱作運(yùn)動(dòng)員足)。在脊椎動(dòng)物，感染明顯地發(fā)生在腳上，如趾間及腳的平坦表面。足癬是由發(fā)癬菌或表皮癬菌屬的成員所引起的皮膚霉菌感染。微生物通過直接接觸或接觸表面鱗屑而感染。細(xì)菌細(xì)絲侵入脊椎動(dòng)物的真皮，代謝宿主的營養(yǎng)豐富的體液。當(dāng)霉菌活躍時(shí)，宿主感到奇癢，皮膚發(fā)紅、裂口。如果對(duì)感染不加處理，可能產(chǎn)生繼發(fā)感染。
對(duì)15名足癬患者給予指導(dǎo)，局部敷用一種含有25％w/w螺旋藻盤狀螺旋藻粉、以市售脂性軟膏為基質(zhì)的乳膏治療其感染。每一受試者都給予具體指導(dǎo)用藥前清洗局部，每日使用少量該乳膏，避免形成一種潮濕的屏障，這會(huì)使情況惡化。生物劑的活性及乳膏的擱置壽命可藉葉綠素綠色的強(qiáng)度來指示。
全部15名受試者報(bào)告在首次使用后7天內(nèi)治愈，沒有發(fā)現(xiàn)不良效應(yīng)。臨床檢查及組織拭子的表皮培養(yǎng)沒有發(fā)現(xiàn)病因物在表皮或周圍的跡象。B)燒傷對(duì)5名受試者的初步研究表明，表面噴灑使用5％w/v生物劑再水化復(fù)合物、或局部使用配制在脂性或非脂性乳膏中的25％w/w生物劑粉能減輕輕度表皮燒傷的周圍發(fā)紅。進(jìn)而，對(duì)具有腫脹和輕度感染(有膿)的表皮燒傷的原位試驗(yàn)顯示，局部使用乳膏形式的生物劑促進(jìn)膿的干燥并縮短愈合時(shí)間。用生物劑治療燒傷降低了鄰近表皮創(chuàng)傷區(qū)域新生皮膚瘢痕的發(fā)生率。C)痤瘡20名患有尋常膿皰性痤瘡和損傷(丘疹)的受試者，其中不少人表現(xiàn)肥厚性痤瘡，被要求在醒著的時(shí)間里每隔4小時(shí)將配制于市售脂性基質(zhì)中的25％w/w生物劑粉敷一薄層。
除一名外，所有受試者在治療24小時(shí)內(nèi)紅腫有極為明顯的減輕。其他19例中，損傷干燥，膿逐漸消失，留下干燥、正常色澤的表皮或在患有肥厚性痤瘡的受試者留下輕微的凹痕。
在出現(xiàn)輕度表皮感染的受試者，在治療48小時(shí)內(nèi)，皮膚表現(xiàn)正常。對(duì)于侵入性的損傷和非侵入性的膿皰試驗(yàn)結(jié)果是一致的。
在描述本發(fā)明作為一種生物控制方法處理人和其他哺乳動(dòng)物外周表皮創(chuàng)傷的同時(shí)，值得重視的是本發(fā)明可加入基質(zhì)中(即液體、凝膠或乳膏)局部應(yīng)用于表皮損傷，或浸透外科敷料以治療或預(yù)防微生物感染。例4-污染物的原位處理水痘感染這種感染引起丘疹，小皰以至膿皰。感染可發(fā)生在受染哺乳動(dòng)物軀體的所有部位。病原是一種水痘-帶狀病毒。
對(duì)5名水痘病人給予指導(dǎo)，在小皰形成前及后，用一種以商售軟膏為基質(zhì)含25％v/v生物劑粉的乳膏局部應(yīng)用于患區(qū)。
當(dāng)小皰已經(jīng)形成后，患者用乳膏處理局部每日4次。癥狀較輕的受試者對(duì)這些部位的處理次數(shù)少一些，最少為每日一次。在病毒的明顯癥狀消失后繼續(xù)在最低水平治療5～7天。
患者們注意到搔癢停止，有時(shí)在使用乳膏后30分鐘內(nèi)就停止。在開始用藥2-5天內(nèi)每一膿皰都干燥了，每一發(fā)紅區(qū)都消失了。在開始用藥后2-5天內(nèi)炎癥也減輕并消失。對(duì)患區(qū)繼續(xù)治療，患者注意到?jīng)]有形成瘢痕組織，正常皮膚組織取代了創(chuàng)傷。病毒性唇皰疹對(duì)各種性質(zhì)的唇皰疹進(jìn)行了治療，包括病毒皰疹，單純皰疹。初步研究觀察到薄薄地敷用配制于市售脂性基質(zhì)中的含有25％v/v生物劑粉的乳膏是有效的。
對(duì)七名感染不同嚴(yán)重程度病毒的受試者進(jìn)行了治療。所處理的病毒的例子包括慢性瘡及伴有繼發(fā)微生物感染的部位。具有嚴(yán)重癥狀的受試者用乳膏處理患處每日4次。癥狀較輕的受試者用乳膏的次數(shù)少一些，最少每日一次。在病毒的明顯癥狀消失后在最低水平繼續(xù)治療5～7天。
開始治療后2～5天嚴(yán)重的瘡傷消失。熱病皰疹，口炎及相關(guān)征候也在2～5天內(nèi)消失，每一傷處被具有新外觀的皮膚代替。例5-原位皮膚修復(fù)14名受試者在臉、頸及其它部位患病的皮膚上薄薄地敷用含有25％v/v生物劑粉、配制于市售脂性基質(zhì)中的乳膏，持續(xù)2周以上。所有受試者都有皮膚缺陷，從原位感染征候，例如陳舊水痘瘢痕，至痤瘡和皮炎。有些受試者，但不是全體，還有皺紋，發(fā)紅區(qū)及凹痕。
所有受試者都注意到舊瘢痕顯著縮小，患處皮膚發(fā)紅區(qū)域縮小，經(jīng)常地每日使用達(dá)二周以上，所有受試者都注意到以下方面的某些項(xiàng)或全部有改善皮膚張力；皮膚柔軟性增加；皺紋的大小、深度或程度縮小(形容為平滑了)或消失；以及皮膚外觀與健康的表皮細(xì)胞一致。
還可選擇或附加將復(fù)合物浸透外用敷料以治療或預(yù)防感染。這種敷料可選任一種標(biāo)準(zhǔn)的、已知的敷料，能在用前無菌儲(chǔ)存。
權(quán)利要求
1.一種制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法，該方法包括以下步驟將干燥的螺旋藻細(xì)胞在含有碳酸氫鈉的再水化溶液中再水化1～12小時(shí)；用減少一種營養(yǎng)物或部分干燥的方法給培養(yǎng)物以應(yīng)激刺激；以及將復(fù)合物冷凍干燥。
2.權(quán)利要求1的制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法，其中所述再水化溶液含有0.84w/v碳酸氫鈉，pH8.5，再水化時(shí)間約為12小時(shí)。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法，其中所述冷凍干燥生成一種無菌粉末。
4.權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)的制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法，其中所述再水化是在8～80瓦/m2的光照下進(jìn)行。
5.權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)的制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法，其中再水化溶液也含有0.04～0.25w/v硫化鈉。
6.權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)的制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法，其中該復(fù)合物進(jìn)一步混合在水懸浮液中。
7.權(quán)利要求1～5中任一項(xiàng)的制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物制劑的方法，其中該復(fù)合物與包括脂性基質(zhì)在內(nèi)的混合物混合成乳膏，該螺旋藻制劑在制劑容積中少于25％。
8.權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)的制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物制劑的方法，其中螺旋藻是Spirulina platensis。
9.一種用作殺病毒劑的藥劑，該藥劑包括按權(quán)利要求1～8中任一條要求的方法制作的有效量的經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物；以及一種可藥用的該復(fù)合物的載體。
10.一種用作殺菌劑的藥劑，該藥劑包括按權(quán)利要求1～8中任一條要求的方法制作的有效量的經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物；以及一種可藥用的該復(fù)合物的載體。
11.一種抑制與遏止生物污染物的生長和作用的生物控制方法，該方法使用經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物，包括以下步驟用權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的方法制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物；及將經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物敷用于目標(biāo)部位或鄰近處，該部位選自生物污染物作用于脊椎動(dòng)物的外部后果，所述外部后果選自丘疹，口炎，水皰，損傷，膿皰及其復(fù)合；以及留有疤痕組織的陳舊目標(biāo)位置。
12.一種修復(fù)哺乳動(dòng)物皮膚缺陷的方法，該方法包括以下步驟用權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的方法制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物；以及將復(fù)合物分散于含皮膚缺陷的目標(biāo)部位；所述皮膚缺陷選自疤痕，痘凹，發(fā)紅區(qū)，破裂，燒傷，水皰，銀屑病，濕疹，鱗屑，皺紋及其復(fù)合。
13.一種避免哺乳動(dòng)物皮膚缺陷的方法；該方法包括以下步驟用權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的方法制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物；及將復(fù)合物分散于可能成為皮膚缺陷的目標(biāo)部位；所述皮膚缺陷選自疤痕，痘凹，發(fā)紅區(qū)，破裂，燒傷，水皰，銀屑病，濕疹，鱗屑，皺紋及其復(fù)合。
14.一種用作皮膚修復(fù)劑的復(fù)合物，該復(fù)合物包括按權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的方法制作的經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物制劑。
15.一種用作皮膚缺陷預(yù)防劑的復(fù)合物，該復(fù)合物包括按權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的方法制作的經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物制劑。
16.一種用作抑制和遏止生物污染物的生物控制劑的復(fù)合物，該復(fù)合物包括按權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的方法制作的經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物制劑。
17.一種外科敷料，該敷料浸透按權(quán)利要求1～8中任一項(xiàng)的方法制作的經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物。
全文摘要
一種制備經(jīng)處理的螺旋藻復(fù)合物的方法,包括將干燥螺旋藻再水化、給培養(yǎng)物以應(yīng)激刺激及冷凍干燥成粉等步驟。所得復(fù)合物具有抗病毒復(fù)合物及抗細(xì)菌復(fù)合物的活性。它能實(shí)現(xiàn)對(duì)哺乳動(dòng)物皮膚缺陷的修復(fù)并對(duì)皮膚缺陷起預(yù)防劑的作用。
文檔編號(hào)A61K35/74GK1245398SQ97181672
公開日2000年2月23日 申請(qǐng)日期1997年12月9日 優(yōu)先權(quán)日1996年12月9日
發(fā)明者凱爾文·溫斯頓·鄧肯, A·I·麥雷 申請(qǐng)人:凱爾文·溫斯頓·鄧肯