專利名稱：：用于抗性癌癥治療的包含冬凌草甲素的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及對具有治療抗性的腫瘤的治療。具體而言，盡管不是排他性地，本發(fā)明涉及活性試劑的組合以及可用于治療具有紫杉醇抗性的人類癌癥的方法。
背景技術(shù)：
：癌癥是全世界罹患疾病和導(dǎo)致死亡的首要原因，并且由于現(xiàn)代技術(shù)延長了預(yù)期壽命，因此預(yù)計癌癥仍會增加。在細胞的生命期中，偶爾會發(fā)生被稱為"突變"的DNA微小變化。在這些突變中，某些突變(稱為"沉默突變，，)不導(dǎo)致細胞功能的任何本質(zhì)變化，而另一些突變可改變細胞的作用方式。多種機制均可以阻止已發(fā)生突變的細胞繼續(xù)進行細胞周期，并且如果遺傳錯誤得不到糾正，這些細胞將通過被稱為"細胞凋亡"的過程而"自殺"。然而，如果突變發(fā)生在參與細胞周期調(diào)控的蛋白質(zhì)中，這可導(dǎo)致失控的細胞增殖(稱為肺瘤形成)，其可進一步發(fā)展成癌癥。癌細胞通常對機體具有不利影響。癌癥可通過惡性肺瘤細胞侵入鄰近組織來擴散，也可通過已知為"轉(zhuǎn)移"的過程來擴散，在"轉(zhuǎn)移"過程中惡性細胞從胂瘤塊脫離并擴散至較遠的部位。在許多不同類型的組織中，癌癥表現(xiàn)為多種形式，并可以其侵入和侵襲程度來表征。癌癥可通過多種方式進行治療，包括手術(shù)、放療和化療。所使用的具體治療類型可取決于多種因素中的一種或多種，例如癌癥的階段、其是否已擴散以及已擴散到何處、可對生活方式產(chǎn)生的可能影響?？陕?lián)合使用各種治療方法來改善治療。例如，可手術(shù)切除腫瘤，然后使用化療或放療來靶向剩余的癌細胞。然而，單獨使用這些方法也可以取得好的效果?；煱ㄊ┯猛ǔ０邢蚩焖俜至鸭毎乃幬?。許多化療藥物干擾細胞分裂前的DNA復(fù)制。盡管在化療試劑方面已取得了很多進展，但是癌細胞(尤其是晚期癌癥)的遺傳不穩(wěn)定性導(dǎo)致了具有藥物抗性的癌癥高發(fā)，甚至產(chǎn)生多藥抗性(multi-drugresistance,MDR)。兩種受歡迎的化療試劑(紫杉醇和順鉑)聯(lián)合用于治療IV期(最晚期)和復(fù)發(fā)疾病?？梢岳斫?，對這兩種試劑中的任一種或其組合不產(chǎn)生應(yīng)答將使得腫瘤學(xué)家繼續(xù)進行治療的方案4艮有限。如果治療試劑或試劑組合可用于治療具有治療抗性的癌癥，這將是有用的。因此，本發(fā)明的一個目的是提供可用于治療具有治療抗性的癌癥的試劑。
發(fā)明內(nèi)容第一方面，本發(fā)明提供了具有式I結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合以及下述中的一種或多種的用途OH式I具有式II結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中W是氫、d-C6烷基；議2是氫、CVC6烷基或CVC6?；?；R、R"獨立地是氫、羥基、d-C6烷基、d-C6烷氧基或CrC6?；淝疤崾荝tR"中至少4個是氫；式II以及具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中R"-R"獨立地是氫或d-Q烷基；R"-R"獨立地是氫、d-C6烷基、d-C6烷氧基或CVC6?；淝疤崾荝15-R2fl中至少3個是氫OR14式IV。待治療的肺瘤可以是惡性的或良性的，在優(yōu)選的實施方案中，待治療的腫瘤可選自激素依賴性癌癥。具體來說，優(yōu)選的使用本發(fā)明藥物進行治療的肺瘤可選自如下腫瘤中的任一種或多種前列腺癌、乳癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、甲狀腺癌或骨癌。優(yōu)選地，待治療的腫瘤是人類癌癥。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的藥物可用于治療具有紫杉醇抗性的卵巢癌或乳癌。8優(yōu)選地，具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而W是曱基，R2是氫，R^R"獨立地是氫、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；虮；?，其前提是R3-R1Q中至少5個是氫。最優(yōu)選地，具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式III的結(jié)構(gòu)OHO式III。優(yōu)選地，具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而RH-R"是氫，1115-112°獨立地是氫、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；虮；?，其前提是R"-R"中至少4個是氫。最優(yōu)選地，具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式V的結(jié)構(gòu)OHO式V。利用本發(fā)明的藥物進行治療的抗性癌癥可以是具有紫杉醇抗性的癌癥或具有順鉑抗性的癌癥。在優(yōu)選的實施方案中，待利用本發(fā)明的藥物進行治療的抗性癌癥是具有紫杉醇抗性的癌癥。本發(fā)明還提供了用于治療藥物抗性癌癥的組合物，其包含藥學(xué)有效量的式I的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，以及下述中的一種或多種式II的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；以及式IV的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合。優(yōu)選地，所述組合物包含式III的化合物。優(yōu)選地，所述組合物包含式V的化合物。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的組合物還可包含式II化合物和式IV化合物兩者、其可藥用的鹽和酯、其選擇性取代的類似物或者兩種或多種前述化合物的組合。本發(fā)明的藥物可包含具有式III和式V的化合物。為了提高其效果，本發(fā)明的藥物還可包含任意數(shù)目的額外化療試劑或者可與化療試劑共同施用的試劑，例如生長因子(如TNFa)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制劑或者可提高本發(fā)明藥物療效的其它任意試劑。本發(fā)明的藥物可以釆用片劑、膠嚢、可注射溶液(indictablesolution),可植入的緩釋基質(zhì)或裝置的形式或者本領(lǐng)域已知的其它任意形式。可以對本發(fā)明藥物中用作活性試劑的化合物進行衍生化，以提供例如定點應(yīng)用、對胃腸破壞(gastrointestinalbreakdown)的抗性和/或改善藥代動力學(xué)的性質(zhì)。本發(fā)明的藥物還可以采用用于直接吸入的粉末、栓劑或可適用于透皮應(yīng)用的溶液形式。例如，根據(jù)本發(fā)明的一種藥物可以僅包含活性試劑在二甲基亞砜中的溶液。可利用本領(lǐng)域已知的任何方法來制備本發(fā)明的藥物。例如，組合物可以在壓片之前進行干磨和混合，因而，所述組合物有必要包含其它藥學(xué)可期待的賦形劑(pharmaceuticallyexpectableexcipient)，比如選自硬月旨酸釣、硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、滑石及其組合的潤滑劑，選自羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的粘合劑。本發(fā)明的藥物可包含任何可藥用的賦形劑，比如粘合劑、填充劑、色素、崩解劑、潤滑劑、潤濕劑、緩沖劑以及藥學(xué)領(lǐng)域和化學(xué)領(lǐng)域中常用的其它賦形劑。本發(fā)明的藥物中可使用的賦形劑的一些實例包括微晶纖維素、乳糖、淀粉(starcn)、硅膠、滑石、甘油酯、硬脂富馬酸鈉(sodiumstearylfumarate)和二氧化拔。方法另一方面,本發(fā)明還提供了用于治療對于治療抗性腫瘤有治療需要的人的方法，其包括施用含有下述物質(zhì)的組合物大于或等于約0.5%(重量/重量)的具有式I結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；式I以及下述中的一種或多種具有式II結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中R1是氫、d-C6烷基，議2是氫、d-C6烷基或CrC6酰基，R3-R"獨立地是氫、羥基、d-C6烷基、d-C6烷氧基或CrC6?；淝疤崾荝3-R1Q中至少4個是氫<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>式ii;和以及具有式iv結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中r"-r"獨立地是氫或d-C6烷基，r乇r"獨立地是氫、d-C6烷基、d-C6烷氧基或CVC6酰基，其前提是r15-r2°中至少3個是氫式iv。待利用本發(fā)明的方法治療的腫瘤可以是惡性的或良性的，在優(yōu)選的實施方案中，待治療的腫瘤可選自激素依賴性癌癥。具體來說，優(yōu)選的使用本發(fā)明藥物進行治療的腫瘤可選自如下腫瘤中的任一種或多種前列腺癌、乳癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、甲狀腺癌或骨癌。優(yōu)選地，待治療的腫瘤是人類癌癥。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法可用于治療具有紫杉醇抗性的卵巢癌和乳癌。優(yōu)選地，具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而Ri是甲基，R2是氫，R、R"獨立地是氫、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基或丙?；淝疤崾荝3-R1G中至少5個是氫。最優(yōu)選地，具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式III的結(jié)構(gòu)OH0式III。優(yōu)選地，具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而R"-R"是氫，R"-R"獨立地是氫、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基或丙?；?，其前提是R15-R2°中至少4個是氫。最優(yōu)選地，具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式V的結(jié)構(gòu)OHO式V。待利用本發(fā)明的方法治療的具有治療抗性的腫瘤可以是具有紫杉醇抗性的癌癥或具有順鉑抗性的癌癥。在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法可用于治療具有紫杉醇抗性的卵巢癌。施用根據(jù)式I、II和V的化合物。組合物本發(fā)明還提供了含有以下物質(zhì)的組合物大于或等于約0.5%(重量/重量)(基于組合物總重量)的具有式I結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；以及下述中的一種或多種式I大于或等于約0.5%(重量/重量)(基于組合物總重量)的具有式II結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中W是氫、d-C6烷基，W是氫、d-C6烷基或CrC6?；?，R^R"獨立地是氫、羥基、d-C6烷基、d-C6烷氧基或C2-C6?；淝疤崾荝3-R1G中至少4個是氫R4O式n;和大于或等于約0.5%(重量/重量)(基于組合物總重量)的具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中RU-R14獨立地是氫或d-C6烷基，R15-R:獨立地是氫、d-C6烷基、d-C6烷氧基或CrC6?；淝疤崾荝"-R:中至少3個是氫R19OR12O式IV。優(yōu)選地，具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而W是甲基，R2是氫，RtR"獨立地是氫、曱基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基或丙?；?，其前提是R3-R1Q中至少5個是氫。最優(yōu)選地，具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式III的結(jié)構(gòu)OHO式III。優(yōu)選地，具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而R"-R"是氫，R氣R"獨立地是氳、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；虮；?，其前提是R15-R2°中至少4個是氫。最優(yōu)選地，具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式V的結(jié)構(gòu)OHO式V。本發(fā)明的組合物可有利地用于治療激素依賴性癌癥。具體來說，待利用本發(fā)明的藥物和組合物進行治療的癌癥可選自前列腺癌、乳癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、曱狀腺癌或骨癌。本發(fā)明的組合物優(yōu)選包含根據(jù)式I、III和V的化合物。在本發(fā)明的用途、方法和組合物中，所述化合物優(yōu)選以協(xié)同有效量存在。在那些二元組合中，兩種成分以相對于彼此的協(xié)同有效量存在。在包含三種或更多種活性試劑的組合中，活性試劑可以以相對于彼此的協(xié)同有效量存在和/或該組合物整體而言可以是協(xié)同作用的。本發(fā)明的組合物和藥物還可以額外包含已知的抗癌試劑和免疫刺激劑。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的方法、組合物和藥物中的抗癌試劑可選自靛紅、紫杉醇、順鉑、喜樹堿(camptothecan)、長春新堿、野百合堿、美登素、高三尖杉酯堿(homoharringtonine)、秋水仙素、馬藺子甲素A、馬藺子甲素B、馬藺子甲素C、山油柑堿(cronycine)、苦參堿(matrin)、氧化苦參堿(oxymatrin)、姜黃素、杷日素、蚤休皂普或者包含一種或多種這些抗癌試劑以及其它已知抗癌試劑的組合。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的方法、組合物和藥物中的免疫刺激劑可選自人參皂苷、阿魏酸、甘露聚糖、菊糖、五加苷A、五加苷B、五加苷C、五加苷D、五加苷E、吉諾糖苷(gynoside)、(3-茯茶多糖、菊粉、糖蛋白、干擾素、y-球蛋白、靈芝(GVmoflf^7m"/m"V/"附)提取物、云芝(CVnV/wsvwwV^/w)提取物、茯茶(/^Wflcocos)提取物或者含有一種或多種這些物質(zhì)與其它已知免疫刺激劑的組合。對于口服施用而言，本發(fā)明的組合物或藥物可與任何惰性稀釋劑或可食用載體一起施用。它們可直接摻入構(gòu)成患者膳食部分的食物或飲料中。本發(fā)明的組合物或藥物可與賦形劑一起配制并采用可攝入的片劑、口含片劑、錠劑、膠嚢、酏劑、混懸糖漿、糯米紙(wafer)等形式來使用。所述片劑、錠劑、丸劑、膠嚢等可包含已提及的賦形劑，在一些情形中還可包含甜味劑(如蔗糖、葡萄糖、阿斯巴甜或糖精)、調(diào)味劑(如薄荷精油、椒薄荷精油、荷蘭薄荷精油或其它任何合適的調(diào)味劑。當劑量單位是膠嚢時，其還可含有液體載體如油或經(jīng)緩沖的水溶液。還可利用磷脂或脂肪酸或其它合成納米顆粒作為載體來配制本發(fā)明的藥物和組合物。本發(fā)明的藥物和組合物可以釆用用于胃腸外施用的制劑形式，并可包含無菌水溶液或分散劑，以及用于制備無菌注射用溶液或分散劑的無菌粉末。所述溶液或分散劑還可以包含設(shè)計成促進細胞吸收組合物(例如脂質(zhì)體)中活性試劑的緩沖劑、稀釋劑和其它合適的添加劑。用于局部施用的藥物制劑可特別地用于局部治療。用于局部治療的制劑包括骨劑、噴霧劑、凝膠、混懸劑、洗劑、霜劑等。用于局部施用的制劑可包含已知的載體物質(zhì)如異丙醇、甘油、石蠟、硬脂醇、聚乙二醇等?？伤幱玫妮d體還可包括已知的化學(xué)吸收促進劑，或者所述制劑可特定地設(shè)計成易于透皮施用。才艮據(jù)Meyer的GB1,001,949和AstraLakemedel的GB1,464,975，吸收促進劑包括例如三氯乙醇、三氟乙醇和某些醇類及其混合物。適于直腸或陰道施用的本發(fā)明的藥物和組合物可以栓劑形式提供，所述栓劑可包含一種或多種合適的無刺激的賦形劑或載體，其包含在室溫下為固態(tài)、而在體溫下為液態(tài)、故而在直腸或陰道腔中將融化并釋放活性化合物的例如可可油、聚乙二醇、栓劑蠟(suppositorywax)或水楊酸酯。適于陰道施用的本發(fā)明制劑還包括含有本領(lǐng)域公認為合適的載體的陰道栓劑、衛(wèi)生棉、霜劑、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧劑制劑。17本文公開了用于治療有此治療需要的人中的腫瘤和癌癥的藥物、組合物和方法。如本文所使用的，有治療需要的人可以是被診斷患有癌癥的患者、或想要預(yù)防或延遲癌癥發(fā)作的患者，例如有癌癥家族史的人。所述癌癥可以是與激素相關(guān)的癌癥，比如前列腺癌、乳癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、甲狀腺癌或骨癌。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，待治療的腫瘤可以是具有紫杉醇抗性的卵巢癌或乳癌。當被酯化時，式IV或式v化合物的酯優(yōu)選是糖苷。對于用于形成糖苷的單糖或多糖沒有特別限制，合適的單糖包括例如葡萄糖、葡糖醛酸、甘露糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸、木糖、蕓香糖、鼠李糖等，以及含有一種或多種前述單糖的組合。合適的多糖包括例如由任意單糖單元(優(yōu)選一種或多種上述單糖)形成的二聚體、三聚體、寡聚體和多聚體。式IV和式V化合物的類似物可以是根皮素、異甘草素(4,2,4，-trihydroxychalcone)等或者包含一種或多種這些化合物的組合。烏拉爾甘草(Glycyrrhizauralensis)或光果甘草(Glycyrrhizaglabra)的提取物可用斗式IV和式V化合物的來源。用于合成或分離式IV和式V化合物、其可藥用的鹽或酯及其選擇性取代的類似物的方法是本領(lǐng)域已知的。參見例如S.K.SrivastavaetaLIndianJ.Chem.,Sect.B(1981)，20B(4):347-8和F.A.Maciasetal"Phytochemistry(1998),50(1):35-46。本文所用的術(shù)語"治療"是指減輕癥狀的嚴重程度和/或頻率、消除癥狀和/或潛在的原因、預(yù)防癥狀和/或其潛在原因的發(fā)生以及改善或糾正損傷。因此，本文所用術(shù)語"治療"腫瘤或癌癥的方法例如包括預(yù)防疾病以及治療具有臨床癥狀的個體中的疾病。術(shù)語"可藥用的載體"包括并非在生物學(xué)上或其它方面不理想的物質(zhì)。這樣的物質(zhì)可與所選活性試劑一起施用于個體，而不會引起任何不期望的生物效應(yīng)，或者不以有害的方式與藥物組合物所包含的其它組分相互作用。以下舉例說明本發(fā)明的某些方面。下述實驗僅以實例方式給出，而不意在限制所附權(quán)利要求中所限定的發(fā)明范圍。實施例本研究4吏用兩種類型的癌細胞A2780和PTX-IO。A2780是大多數(shù)人類卵巢癌的代表性細胞類型，并且已知其不具有藥物抗性。PTX10是A2780的紫杉醇抗性變體。這兩種細胞類型提供了用于比較本發(fā)明組合物針對以下兩種腫瘤類型的有效性的模型用紫杉醇治療有效的典型人類卵巢癌以及用紫杉醇治療無效的腫瘤林系。所有3個試驗的共同實驗條件闡述如下細胞林A2780和PTX-10細胞林來自NationalInstituteofHealth,Bethesda,MD。細胞培養(yǎng)根據(jù)Halicka等人的方法(Int.J.Oncology1:437-48，1997)，將兩種細胞系培養(yǎng)在添加了10%胎牛血清、L-谷氨酰胺和抗生素的RPMI1640中。所有培養(yǎng)基、補充物和抗生素來自LifeTechnologies(GrandIsland,NY)。定期性地檢測培養(yǎng)物的支原體感染。為了維持不同步的指數(shù)生長，這些貼壁細胞常規(guī)地以3xl()S接種在T-75瓶中，于37。C在5。/。C02中孵育5至6天，然后通過胰蛋白酶消化(0.250/。胰蛋白酶/lmMEDTA)以1:10稀釋度再次傳代。利用光學(xué)顯微鏡確定對照細胞和被處理癌細胞的形態(tài)變化和細胞計數(shù)。所有實驗中僅使用不同步的指數(shù)生長細胞。細胞生長抑制和生存力測定MTT試劑盒購自BoehringerMannheim(RocheDiagnosisCorp,Indianapolis,Indiana),以計數(shù)存活細胞。有代謝活力的細胞裂解四氮唑染料(MTT)形成甲臘，其在550至618nm處表現(xiàn)出強的紅色吸收帶。細胞生存力測定的方案由生產(chǎn)商提供，并在我們實驗室中進行了如下改進將卵巢癌細胞以每孔6xl03個細胞的濃度在100細胞培養(yǎng)基的體積中接種在96孔微量滴定板中。24小時后，將各種濃度的20pL化合物等分試樣加至貼壁細胞中。將每種濃度加至3個孔中從而取得平均值。為了消除任何溶劑效應(yīng)，將20用于制備最高濃度化合物的溶劑(以DMSO體19積計，最大為0.5%)加至每個孔中的對照細胞。將所^L于37。C在C02培養(yǎng)箱中孵育72小時。在第3天末，小心地除去培養(yǎng)基而不干擾細胞，并替換為100pL新鮮的細胞培養(yǎng)基。向每個孔中加入10pLMTT試劑，將該板于37。C在C02培養(yǎng)箱中再孵育4小時。向每個孔中加入lOO^LSDS增溶劑(來自BoehringerMannheim)。使所述板在<:02培養(yǎng)箱中靜置過夜，并利用ELISA讀取儀(EL800,Bio-TekInstruments,Inc.)在570nm波長下讀數(shù)。才艮據(jù)以下方程來計算細胞生存力百分數(shù)100%(對照細胞的吸收值-被處理細胞的吸收值)/對照細胞的吸收值將未經(jīng)處理的培養(yǎng)物之對照細胞的生存力定義為100%。使用了3種不同的組合物來處理所述兩種細胞類型，實驗結(jié)果如下所述。實驗l研究了式I化合物對兩種人類卵巢癌細胞系(一種對紫杉醇是敏感的(A2780),另一種對紫杉醇具有抗性(PTX-IO))的抗增殖活性。劑量反應(yīng)曲線表明，與PTX-10相比，A2780細胞系對式I化合物更加敏感。實驗2研究了式V化合物對兩種人類卵巢癌細胞系(一種對紫杉醇是敏感的(A2780)，另一種對紫杉醇具有抗性(PTX-10))的抗增殖活性。劑量反應(yīng)曲線表明，與A2780相比，PTX-10細胞系對式V化合物更加敏感。實驗3研究了式III化合物對兩種人類卵巢癌細胞系(一種對紫杉醇是敏感的(A2780),另一種對紫杉醇具有抗性(PTX-10))的抗增殖活性。劑量反應(yīng)曲線表明，與A2780相比，PTX-10細胞系對式III化合物略微更敏感一些。實驗4進行第二組實驗，以顯示本發(fā)明制劑中的化合物如何彼此協(xié)同作20用。由于實驗工作是在另一實驗室和略微不同的條件下進行的，因此實驗結(jié)果與上述結(jié)果略有不同。在第二組實驗中，MTT試劑盒購自英國的Sigma-Aldridge，由于時間有限，在用藥物處理之前，僅僅將細胞孵育過夜。細胞系也來自不同的來源(在第二組實驗中，直接來自NIH,BethesdaMaryland,USA的MariannePoruch博士)，并且可能儲存條件有所不同。表1顯示了在第二組實驗條件的新體系中檢測3種不同藥物的IC50(微摩爾濃度)。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>使用CalcuSyn'softwarefordoseeffectanalysis"Biosoft2005來計算化合物之間的協(xié)同作用。聯(lián)用指數(shù)(combininationindex,CI)法基于Chou和Talalay描述的方法、Chou和Chou計算機軟件以及CalcuSynTM。根據(jù)之前Chou的描述對CI的范圍和符號進行了精確化。CI<1、=1和>1分別表示協(xié)同作用、相加作用和拮抗作用。下表顯示，用本發(fā)明化合物的不同組合進行處理時，A2780和PTX-10細胞系的卯％有效量(ED90)下的CI。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表2CI的范圍A2780PTX10<0.1非常強的協(xié)同作用0.1—0.3強的協(xié)同作用0.3—0.7協(xié)同作用0.7—0.85中度的協(xié)同作用0.85-0.90輕微的協(xié)同作用0.90—1.104妄近相加作用表3當針對表3中所示的聯(lián)用指數(shù)范圍來分析表2中的數(shù)據(jù)時，可以看出"協(xié)同作用"和"強的協(xié)同作用"兩者的過渡點約為0.3。當組合I+V、I+III和III+V的化合物一起施用于PTX-10細胞系時，全部具有強的協(xié)同作用或協(xié)同作用，這表明所述藥物的所有組合將對紫杉醇抗性細胞系具有協(xié)同作用。結(jié)果表明，這些化合物組合對紫杉醇抗性胂瘤的治療比對紫杉醇敏感型癌癥的治療更加有效。事實上，對于某些組合來說，紫杉醇敏感型癌細胞系顯示出拮抗作用而不是協(xié)同作用。在大部分的工作中，相對于IC50而言所述化合物以約1:1存在。使用1:1比例的結(jié)果顯示出強的協(xié)同作用，因此優(yōu)選的組合物包含約1:1:1比例的式I、V和III的化合物。在實驗工作過程中，也注意到所述組分的某些其它相對比例特別有效。以4:4:1和9:1:2比例的式I、V和III化合物的組合是特別有利的。本發(fā)明的優(yōu)選組合物包含以上述特定比例存在的這些組分。在治療方法中，優(yōu)選以根據(jù)這些比例的用量向有此需要的患者施用活性試劑。本發(fā)明組合物的組分可同時或順序施用，從而使所述組分的血漿水平處于上述的合適比例。組合物實施例口服糖漿25mg式I化合物、2.5mg式III化合物和25mg式V化合物與檸檬酸一水合物(105mg)、氫氧化鈉(18mg)、薄荷調(diào)味劑混合，并用蒸餾水定容至100mL，得到適于口服施用的糖漿。注射用制劑25mg式I化合物、2.5mg式III化合物和25mg式V化合物與適量葡萄糖一水合物(使其等滲)、檸檬酸一水合物(10.5mg)、氫氧化鈉(1.8mg)混合，并用適量注射用水定容至lO.OmL,得到適于注射的制劑。片劑A25mg式I化合物、2.5mg式III化合物和25mg式V化合物與乳糖(55mg)、玉米淀粉l(30mg)、微晶纖維素(35mg)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(15mg)混合。將混合物過篩并與另外的玉米淀粉(60mg)和水混合以形成顆粒，干燥并過篩。加入羧甲基淀粉鈉(23mg)和硬脂酸鎂(2mg)并混合，將混合物壓制成片。片劑B25mg式I化合物和25mg式V化合物與乳糖(52.5mg)、玉米淀粉1(30mg)、微晶纖維素(35mg)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(15mg)混合。將混合物過篩并與另外的玉米淀粉(60mg)和水混合以形成顆粒，干燥并過篩。加入羧甲基淀粉鈉(23mg)和硬脂酸鎂(2mg)并混合，將混合物壓制成片。片劑C25mg式I化合物和2.5mg式III化合物與乳糖(40mg)、玉米淀粉1(20mg)、微晶纖維素(35mg)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(15mg)混合。將混合物過篩并與另外的玉米淀粉(60mg)和水混合以形成顆粒，干燥并過篩。加入羧甲基淀粉鈉(23mg)和硬脂酸鎂(2mg)并混合，將混合物壓制成片。還涉及可用于植入到例如手術(shù)切除卵巢腫瘤或乳腺腫瘤之后留下的腔中的另外的制劑。技術(shù)人員可以利用本領(lǐng)域中可利用的知識來制備這樣的制劑，并且不需要其創(chuàng)造性的貢獻。本發(fā)明人和申請人感謝馬里蘭州NIH的MariannePoruch博士捐贈實,分中使用的某些細胞系。權(quán)利要求1.協(xié)同有效量的下述物質(zhì)在制備用于治療具有治療抗性的腫瘤的藥物中的用途具有式I結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；式I以及下述中的一種或多種具有式II結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中R1是氫、C1-C6烷基，R2是氫、C1-C6烷基或C2-C6?；琑3-R10獨立地是氫、羥基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或C2-C6?；淝疤崾荝3-R10中至少4個是氫；和式II具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中R11-R14獨立地是氫或C1-C6烷基，R15-R20獨立地是氫、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或C2-C6酰基，其前提是R15-R20中至少3個是氫式IV。2.權(quán)利要求l的用途，其中待治療的腫瘤選自前列腺癌、乳癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、曱狀腺癌或骨癌。3.權(quán)利要求l的用途，其中待治療的腫瘤是具有紫杉醇抗性的卵巢癌或乳癌。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項的用途，其中具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而W是曱基，W是氫，R^R"獨立地是氫、曱基、乙基、曱氧基、乙氧基、乙?；虮；?，其前提是R、R"中至少5個是氫。5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中具有式II結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式III的結(jié)構(gòu)式III,6.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而R"-R"是氫，R"-R^獨立地是氫、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙?；虮；?，其前提是R"-R"中至少4個是氫。7.權(quán)利要求6的用途，其中具有式IV結(jié)構(gòu)的化合物是被取代的，從而其具有式v的結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式V。8.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中式III和式V的化合物均存在于藥物中。9.一種組合物，其含有大于約0.5%(重量/重量)的式I化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；以及下述中的一種或多種大于0.5%(重量/重量)的具有本文所述取代的式II化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；和大于0.5%(重量/重量)的具有本文所述取代的式IV化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中所述化合物以協(xié)同有效量存在。10.根據(jù)權(quán)利要求9的組合物，其中根據(jù)式II的化合物是式III化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合。11.根據(jù)權(quán)利要求9或10的組合物，其中根據(jù)式IV的化合物是式V化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合。12.權(quán)利要求9、10或11中任一項的組合物，其中式III和式V的化合物均存在于藥物中。13.—種用于治療對于治療抗性腫瘤有治療需要的人的方法，其包括施用含有以下物質(zhì)的組合物大于或等于約0.5%(重量/重量)的具有式I結(jié)構(gòu)的化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；以及下述中的一種或多種大于0.5%(重量/重量)的具有本文所述取代基的式II化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合；和大于0.5%(重量/重量)的具有本文所述取代基的式iv化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合，其中所述化合物以協(xié)同有效量存在。14.權(quán)利要求13的方法，其中待治療的腫瘤選自前列腺癌、乳癌、子宮內(nèi)膜癌、結(jié)腸癌、肺癌、膀胱癌、睪丸癌、卵巢癌、甲狀腺癌或骨癌。15.權(quán)利要求14的方法，其中待治療的腫瘤是具有紫杉醇抗性的卵巢癌。16.權(quán)利要求13、14和15中任一項的方法，其中根據(jù)式II的化合物是式III化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合。17.權(quán)利要求13至16中任一項的方法，其中根據(jù)式IV的化合物是式V化合物、其可藥用的鹽和酯、選擇性取代的類似物或者一種或多種前述化合物的組合。18.權(quán)利要求13至17中任一項的方法或權(quán)利要求1至8中任一項的用途，其中所述組合物或藥物還包含選自以下的一種或多種抗癌試劑靛紅、紫杉醇、順鉑、喜樹堿、長春新堿、野百合堿、美登素、高三尖杉酯堿、秋水仙素、馬藺子甲素A、馬藺子甲素B、馬藺子甲素C、山油柑堿、苦參堿、氧化苦參堿、姜黃素、杷日素、蚤休皂苷。19.權(quán)利要求13至17中任一項的方法或權(quán)利要求1至8中任一項的用途，其中所述組合物或藥物還包含選自以下的一種或多種免疫刺激劑人參皂苷、阿魏酸、甘露聚糖、菊糖、五加苷A、五加苷B、五加苷C、五加苷D、五加苷E、吉諾糖苷、P-茯苓多糖、菊粉、糖蛋白、干擾素、y-球蛋白、靈芝(GflW0fifer附"/w"V/w附)提取物、云芝(CVw/o/wsvem'co/w)提取物、茯茶(i^^Vi)提取物。20.權(quán)利要求9至12中任一項的組合物，其中所述組合物被配制為陰道栓劑、栓劑或透皮貼劑。全文摘要本發(fā)明涉及對具有治療抗性的腫瘤(therapy-resistantneoplasia)的治療。本發(fā)明的化合物和方法特別適用于治療具有紫杉醇抗性的人類癌癥，尤其是宮頸癌和乳癌。本發(fā)明組合物的組分彼此顯示出強的協(xié)同作用，這使它們可以相對低的量用于治療對傳統(tǒng)化療試劑可能已產(chǎn)生抗性的IV期癌癥或復(fù)發(fā)性癌癥。這些組合物包含冬凌草甲素。文檔編號A61K31/121GK101495108SQ200780017079公開日2009年7月29日申請日期2007年5月10日優(yōu)先權(quán)日2006年5月11日發(fā)明者陳純美申請人:活性植物科技有限公司