專利名稱：注射用脂質(zhì)體藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及以用短鏈脂肪酸作為穩(wěn)定劑的脂質(zhì)體形式的親脂性、難溶活性化合物尢其是二氫吡啶類活性化合物的穩(wěn)定的脂質(zhì)體注射劑。
在許多情況下，需要許多有效的藥用活性化合物的靜脈注射制劑，例如快速初始療法、急危癥和治療嚴(yán)重的臨床病癥。許多活性化合物包括許多二氫吡啶類化合物的水溶性很差，所以，不能將其制成水溶液。另一問題是許多化合物易于水解和氧化。
溶解度和易于水解的問題可以通過使用常見有機溶劑如乙醇、聚乙二醇或丙二醇來解決。但是，大部分這樣的溶劑的局部耐受性差，所以，必須借助中心導(dǎo)管給藥或用輸液稀釋。由于水溶性差，后者可導(dǎo)致過飽和結(jié)晶出現(xiàn)。在相對長時間的靜注治療中，所給與的有機溶劑量在毒物學(xué)上常常是不能接受的。使用增溶肥皂或通過把該活性化合物加入到水溶性十二烷基磺酸鈉或多乙氧基醚溶液中所形成的表面活性劑膠束同樣有問題，因為這樣可以出現(xiàn)像溶血或類似休克癥的嚴(yán)重癥狀。
已知有許多將難溶的活性化合物溶合到毫微粒賦形劑中的方法，這種方法實質(zhì)上不用有毒溶劑和表面活性劑。這包括例如非腸道乳劑、與膠束混合后的卵磷脂膽汁鹽和脂質(zhì)體。在這些體系中，活性化合物以膠態(tài)顆粒出現(xiàn)在水中，所以，只有對水解穩(wěn)定的活性化合物被溶合在其中。
同樣熟悉其中溶合有活性化合物的脂質(zhì)體可用冷凍干燥來穩(wěn)定(參見Betageri等，Liposome Drug Delivevy Systems，TechnomicPublishing AG Basel，1993年，118頁)。在該過程中，需要加入低溫防護劑，依靠其穩(wěn)定膜作用，保證脂質(zhì)體的完整性。已知的低溫防護劑是多元醇類(polyalcohols)如甘油，單糖如葡萄糖，二糖如蔗糖，乳糖或海藻糖和蛋白質(zhì)或氨基酸(參見Y.Otzer等，Influenceof Freezing and Freeze-drying on the Stability of LiposomesDispersed in Agueous Media，Acta Pharm.Technol.，34(3)，1988，129～139頁)。
含二氫吡啶類化合物例如含尼莫地平(Nimodipine)的穩(wěn)定的冷凍干燥脂質(zhì)體制劑已公開在EP-A-560138上。其制備中使用磷脂、常用低溫防護劑和pH穩(wěn)定劑。
但是，顯然某些存在既水溶性差又易于水解和氧化問題的活性化合物不能用迄今已知的方法制成足夠穩(wěn)定的脂質(zhì)體制劑。這尢其適用于像尼莫地平這樣的二氫吡啶類化合物或具如下通式(I)的化合物 其中，R代表具1～6個碳原子烷基，和R′代表氫、鹵素、氰基、二氟甲基或分另具1～4個碳原子的烷基或烷氧基。
作為按照本發(fā)明的脂質(zhì)體，特別合適的二氫吡啶類化合物是尼莫地平或R與R′定義如下的通式I的化合物R代表具1～4個碳原子的烷基，尤其是正丙基或異丙基，和R′代表氫、氟、氯、氰基或三氟甲基，尤其是氫。
該二氫吡啶類化合物依照常用方法制備，例如按German Offenl-egungsschrift 4 117750上所述方法制備。
二氫吡啶類化合物是高活性藥物，尤其能用來治療心肌功能不全。對于該適應(yīng)癥，一種穩(wěn)定、作用迅速的靜注制劑是非常重要的。
所以，本發(fā)明涉及以具有磷脂膜的脂質(zhì)體為基礎(chǔ)的非腸道給藥的穩(wěn)定的藥物制劑，其特征在于它們含如下式II的短鏈脂肪酸作為抗絮凝穩(wěn)定劑H3C—(CH2)n-COOA(II)其中，n代表4～8，尤其是6，A代表氫或1或2價陽離子，尤其是鈉或鉀陽離子，活性化合物與磷脂的重量比是1比20～200，短鏈脂肪酸與磷脂的重量比是1比2～60。
短鏈脂肪酸與磷脂的重量比為1比4～50的脂質(zhì)體制劑最好。
在試圖將根據(jù)EP-A-560138得到的通式I的二氫吡啶類活性化合物轉(zhuǎn)變成脂質(zhì)體的過程中，顯然這些化合物在化學(xué)上和物理上都是不夠穩(wěn)定的(見比較例A)。在室溫下只短期保存2周時間，不需要的分解產(chǎn)物的總量就達到不再允許的程度。此外，加入蒸餾水配制成脂質(zhì)體后，可看到明顯的絮凝和聚集。
使人驚喜的是，如果將具通式II的短鏈脂肪酸或它們的鹽加到該脂質(zhì)體中，就會發(fā)現(xiàn)由具通式I有穩(wěn)定性問題的二氫吡啶類化合物也能得到在化學(xué)上和物理上穩(wěn)定的脂質(zhì)體。
由于加入短鏈脂肪酸或其鹽，使得按照本發(fā)明的脂質(zhì)體具有更高的物理穩(wěn)定性和可以防止脂質(zhì)體配制后出現(xiàn)不需要的絮凝和聚集，這一結(jié)果利用現(xiàn)有技術(shù)的知識是不可能獲得。據(jù)文獻(參見J.H.Crowe等，Effects of Free Fatty Acids and Tvansition Temperature onthe Stability of Dry Liposomes，Biochemica et Biophysica Acta，979，(1989)7～10頁)報到，常用脂肪酸具有去膜穩(wěn)定和fusogenic作用，即促進脂質(zhì)體結(jié)合作用。借助顯微鏡檢查、硅膠層析和激光關(guān)聯(lián)能譜法，證明按照本發(fā)明的濃度范圍加入適度鏈長脂肪酸對脂質(zhì)體粒度無明顯影響，可防止脂質(zhì)體絮凝和聚集，且不引起去穩(wěn)定作用。同時，也證明二氫吡啶類活性化合物完全(100％)溶合到脂質(zhì)體中。
按照本發(fā)明短鏈脂肪酸的濃度為每ml準(zhǔn)備給藥的脂質(zhì)體分散系含0.4～10mg。根據(jù)所用磷脂的量，按重量計，使用一份的短鏈脂肪酸或其鹽，用2～60份、最好4～50份的磷脂。
加入其它輔助劑，尤其是二糖如海藻糖、蔗糖和乳糖作為低溫防護劑是有益的。蔗糖尤其具有最佳的低溫防護作用。低溫防護劑與磷脂之比為0.8～4比1，以1.2～2.5比1為佳。
活性化合物與磷脂之比為1比20～200，以1比30～80為佳，1比30～50最好。
為獲得等滲，也可將一種或一種以上的合適的滲透壓活性劑加到配制介質(zhì)中。已證明合適的滲透壓活性劑為甘油、甘露醇和葡萄糖，尤其是甘油。
如需要時，本發(fā)明的脂質(zhì)體可含其它的輔助劑，例如穩(wěn)定劑如抗氧劑正丁基羥基茴香醚、正丁基羥基甲苯、α-生育酚及其鹽和抗壞血酸和其鹽及脂，以抗壞血酸及其鹽為佳，還例如pH調(diào)節(jié)劑如緩沖劑、酸類或堿類，尤其是抗壞血酸和氫氧化鈉。
按照本發(fā)明可以使用常用的磷脂。優(yōu)選使用的磷脂是具如下通式III的任選自分子內(nèi)兩性離子的表面不帶電荷的磷酸甘油酯 其中，R2和R3相同或不同，各代表飽和或不飽和的具8～24個碳原子的?；?，它們可任選是支鏈和或被取代。
除了具通式III的磷脂外，還可獲得少量不同類型的磷脂如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、磷脂酰甘油和/或磷脂酸。所用的磷脂可以從天然資源如大豆或未加工卵磷脂中純化而得或合成得到。優(yōu)選使用純化的卵磷脂。
采用常用的制備方法可以得到本發(fā)明的脂質(zhì)體，例如采用高壓勻化法、微孔擠壓法、滲析和稀釋方法和超聲分散法，優(yōu)選采用高壓勻化法，例如，采用如微觀流體法(microfluidization)。
所以，本發(fā)明也涉及制備本發(fā)明的脂質(zhì)體的方法，其特征在于按重量比一份的親脂性活性化合物和20～200份磷脂在10～90℃下，優(yōu)選50～80℃，任選加入抗氧劑，任選充入氮氣，攪拌下預(yù)分散在水中，然后，在20～80℃溫度和400～1500巴壓力下在高壓噴射勻化器中勻化成平均粒徑35～200nm，然后，按脂肪酸與磷脂比為1比2～60的比例，將低溫防護劑和具通式II的短鏈脂肪酸或其鹽溶解在該勻化物中，獲得的分散物被冷凍干燥。
該方法的一種變異方法是甚至在分散或高壓噴射勻化過程中也可加入活性化合物和/或低溫防護劑。同樣，也可將短鏈脂肪酸加入配制介質(zhì)中，以便它們在配制過程中只直接與脂質(zhì)體接觸。在這兩種情況下，均可防止配制脂質(zhì)體的絮凝達24小時以上，同時保持脂質(zhì)體平均粒徑和保證活性化合物的化學(xué)穩(wěn)定性。
當(dāng)脂肪酸濃度超過10mg/ml時，脂質(zhì)體出現(xiàn)去穩(wěn)定作用且活性化合物從脂質(zhì)體中逸出，如比較例B所示。如不加入依照本發(fā)明的短鏈脂肪酸，分散物質(zhì)在24小時內(nèi)絮凝，如比較例C中所示。
代表性活性化合物的典型實施例顯示本發(fā)明方法的優(yōu)點和得到的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。另一方觀，比較例A～C顯示按迄今已知方法制備的或超出本權(quán)利要求制劑的產(chǎn)品的不穩(wěn)定性和缺點。所有百分比數(shù)據(jù)均為重量百分比。
典型實施例1在5.5997kg蒸餾水中通入氮氣達30分鐘。通氮后，將16.2g抗壞血酸鈉溶于水中，然后加入580.5g純化的卵磷脂(磷脂酰膽堿＞94％)。使用高速攪拌機在65℃下將該混合分散達30分鐘。在補充蒸發(fā)的水分合，將預(yù)分散物通過膜濾器(孔徑8μm)過濾并轉(zhuǎn)移到高壓勻化器中。
使該分散物質(zhì)在800巴和65℃下通過5passages將其勻化。然后，加入145g活性化合物2-氨基-1，4-二氫-5-氰基-6-甲基-4-(3-苯基喹啉-5-基)吡啶-3-羧酸異丙酯，并使其在低壓(25巴)下均勻分布在該分散系中。然后，使該混合物在65℃800巴下通過20passages而勻化。將該脂質(zhì)體冷卻到室溫。
按每克得到的勻化物中加入168.2mg的蔗糖和0.11mg抗壞血酸并使其溶解。用0.1 N NaOH液調(diào)節(jié)該分散系到pH6.5，通過膜濾器(0.2μm孔徑)無菌過濾，裝入棕色管形瓶中，每瓶裝量2.5 ml，并冷凍干燥。
在冷凍干燥前，脂質(zhì)體平均粒徑為48nm。在用10ml含0.0495％辛酸鈉和1.51％甘油的水溶液配制后，脂質(zhì)體的平均粒徑為57nm。該配制液靜置24小時后，脂質(zhì)體平均粒徑為57nm。24小時內(nèi)該配制分散系中無絮凝和/或沉淀出現(xiàn)。硅膠層析檢查顯示該活性化合物100％地溶合在脂質(zhì)體中。
典型實施例2將1.8561g抗壞血酸鈉溶解在已預(yù)先通入氮氣達10分鐘的638.33g蒸餾水中。將66g純化的卵磷脂(磷脂酰膽堿含量＞94％)加入該溶液中。將該混合物用高速攪拌機在60℃分散30分鐘。然后，用通過氮氣的水補足該混合物到706.2g，并加入1.65g按照典型實施例1的活性化合物。為使該活性化合物均勻分布，將該混合物再分散3分鐘。
將該分散系轉(zhuǎn)移到高壓勻化器中，在60℃和800巴下通過25pass-ages勻化。
然后將637.19g蔗糖溶解到該脂質(zhì)體分散系中，用0.1NNaOH液調(diào)節(jié)該分散系pH到6.5。
無菌過濾后(膜濾器孔徑0.2μm)，將最終分散物質(zhì)灌入棕色管形瓶中，每瓶裝量2.64g，并冷凍干燥。
該冷凍干燥的脂質(zhì)體在40℃下貯存3個月后，活性化合物含量為98.5％，且用10ml含0.0495％辛酸鈉和1.51％甘油的水溶液復(fù)制后24小時內(nèi)無絮凝和/或沉淀出現(xiàn)。
典型實施例3在攪拌下，將12.53g抗壞血酸和2.85g氫氧化鈉溶于4868.18g合乎要求的水中。加入504.8g純化的卵磷酸(＞94％磷脂酰膽堿)并用高剪切混合機分散。
將該分散物質(zhì)通過膜濾器(最大有效孔徑為8μm)過濾，然后在高壓勻化器中(800巴，25cycles)勻化。
在攪拌下，將908.70g的蔗糖溶在該勻化物中。通過溶解0.6g抗血酸和用0.1NNaOH液滴定來調(diào)節(jié)pH到6.5。該過程大約需要0.1516g的NaOH。該全過程在氮氣保護下進行以防止氧化。
加入12.6g的(4R)-4-(2-氯-3-氰基-苯基)-1，4-二氫-2，6-二甲基吡啶-3，5-二羧酸異丙-基2-甲氧基乙酯，攪拌該分散系約12個小時直到該活性化合物全部溶解為止。
將該分散物質(zhì)再次過濾，將入50ml管形瓶中，每支裝量11.88ml(多加0.24ml)，冷凍干燥。
該冷凍產(chǎn)品用于溶在47.184g蒸餾水中的0.725g甘油和0.02375g辛酸鈉溶液配制。
典型實施例44.6583g蒸餾水通氮氣10分鐘，然后將5.7g的抗壞血酸和852.8g葡萄糖溶于水中，用66g0.5M的精氨酸溶液調(diào)節(jié)該溶液到PH6.5。然后加入0.502g活性化合物尼莫地平異丙基(2-甲氧基乙基)-1，4-二氫-2，6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3，5-吡啶和473.8g純化的卵磷脂(＞80％磷脂酰膽堿)。在通氮、75℃下，用高速攪拌機分散該混合物達60分鐘。將分散物質(zhì)過濾(5μm孔徑)，然后將其轉(zhuǎn)移到高壓勻化器中。
在800巴和75℃下，將分散物質(zhì)勻化180分鐘(601/h)。
將勻化物冷卻到30℃以下。
使分散物質(zhì)通過膜濾器(0.2μm孔徑)無菌過濾，裝入棕色玻璃管形瓶中，每支裝量15.30ml，冷凍干燥。
將該脂質(zhì)體用含0.0495％辛酸鈉和1.513％甘油的注射用水配制。至少24小時內(nèi)在配制后分散系中無絮凝和沉淀出現(xiàn)。
典型實施例5在171.6g蒸餾中通氮氣達20分鐘，然后，將200mg抗壞血酸鈉溶在水中，然后，加入10.0g純化的卵磷脂(＞94％磷脂酰膽堿)和200mg的活性化合物依托咪酯(Etomidat)((R)-1-(α-甲基芐基)-5-咪唑-羧酸乙酯)。
在通氮、60℃下，用高速攪拌機分散該混合物20分鐘。補充蒸發(fā)水分后，將該預(yù)分散物轉(zhuǎn)移到高壓勻化器中。
在800巴和60℃下，使該分散物通過5passages勻化。
勻化后，按每克勻化物加入98.9mg蔗糖和1.8mg辛酸鈉并溶解。用0.1N NaOH液調(diào)節(jié)該分散系pH到6.5，并通過膜濾器(0.2μm孔徑)無菌過濾，裝入棕色玻璃管形瓶中，裝量每支20.0g，冷凍干燥。
冷凍干燥前脂質(zhì)體平均粒徑為56nm。用17.16g葡萄糖液(5％)配制后，脂質(zhì)體平均粒徑為61nm。至少4小時內(nèi)復(fù)制分散系中無絮凝和/或沉淀出現(xiàn)。
典型實施例6將1.4g抗壞血酸鈉溶于425g脫氧蒸餾水中。在65℃下，用30分鐘時間，用旋渦混合機將50g純化的卵磷脂(＞80％磷脂酰膽堿)和1.5g Paclitaxel(Taxol)分散到該溶液中。
在725巴和60℃下，通過25cycles使該分散物質(zhì)高壓勻化。
將72g蔗糖和80mg抗壞血酸加到382.32g勻化后的分散物質(zhì)中。加入0.1N NaOH液調(diào)pH到6.5。加水使該分散物質(zhì)成480g。
將該分散物質(zhì)過濾，然后將12.32g的分散物質(zhì)(相當(dāng)于30mgPac-litaxel并追加2.67％)灌入50ml管形瓶中，冷凍干燥。
用29.7g溶在47.174g蒸餾水中的0.725g甘油和0.02375g辛酸鈉的溶液配制該冷凍干燥產(chǎn)品。每30ml配制后分散系中含30mg增溶的Pac-litaxel 。
比較例A(依照EP-A-560138)將49.1g葡萄糖和0.345g抗壞酸溶到253g已預(yù)先通入氮氣10分鐘的蒸餾水中。然后用3.9g0.5M精氨酸溶液調(diào)節(jié)pH到6.5。將27.25g純化的卵磷脂(磷脂酰膽堿含量＞80％)、0.345g按照典型實施例1的活性化合物和通氮后的蒸餾水加到該溶液中，使其總量為345g。在75℃下，用高速攪拌機將該混合物分散30分鐘。過濾后(膜濾器孔徑為5μm)，將該分散物質(zhì)轉(zhuǎn)移到高壓勻化器中，在800巴和75℃下，通過25passages勻化。
將脂質(zhì)體分散終產(chǎn)物經(jīng)無菌過濾(膜濾器孔徑為0.2μm)，灌入棕色玻璃管形瓶中，裝量每支2.1ml，冷凍干燥。
該冷凍干燥后的脂質(zhì)體在40℃下貯存兩周，活性化合物含量降到89.7％。
在高壓勻化后該脂質(zhì)體的平均粒徑是45nm。用9.5ml蒸餾水將該冷凍干燥脂質(zhì)體配制后，脂質(zhì)體平均粒徑為47nm。在配制后24小時之內(nèi)脂質(zhì)體分散粒徑為47nm。在配制后24小時之內(nèi)脂質(zhì)體分散物質(zhì)絮凝并形成沉淀。
比較例B(過量的脂肪酸)將按照典型實施例1制備的脂質(zhì)體用10ml含5％辛酸鈉和1.51％甘油的水溶液配制。該脂質(zhì)體被去穩(wěn)定。只有5.3％的活性化合物仍然溶合在脂質(zhì)體中。
比較例C(無脂肪酸)將按照典型實施例1制備的脂質(zhì)體用10ml含1.51％甘油的水溶液配制。在24小時內(nèi)，該分散系絮凝并形成沉淀。
權(quán)利要求
1.帶有磷脂膜的脂質(zhì)體形式的親脂性、難溶活性化合物的可非腸道給藥的、穩(wěn)定的藥物制劑，其中，活性化合物與磷脂的重量比為1比20～200nm，其特征在于它們含有具如下通式II的短鏈脂肪酸作為穩(wěn)定劑H3C-(CH2)n—COOA(II)其中，n代表4～8，A代表氫或1或2價陽離子；在準(zhǔn)備給藥的溶液中該短鏈脂肪酸的濃度為0.3～10.0mg/ml。
2.按照權(quán)利要求1的藥物制劑，所述短鏈脂肪酸或其鹽與磷脂的重量比為1比2～60。
3.按照權(quán)利要求1的藥物制劑作為活性成分的是二氫吡啶類化合物。
4.按照權(quán)利要求1的藥物制劑含作為活性化合物的尼莫地平或具如下通式1的二氫吡啶類化合物 其中，R代表具1～6個碳原子的烷基，R′代表氫、囟素、氰基、二氟甲基或分別具1～4個碳原子的烷基或烷氧基。
5.按照權(quán)利要求4的藥物制劑作為活性化合物的具通式I的二氫吡啶類化合物，其中R′代表氫、氟、氯、氰基或三氟甲基，和R代表具1～4個碳原子的烷基。
6.具如下通式II的短鏈脂肪酸在制備帶有磷脂膜的脂質(zhì)體形式的親脂性、難溶活性化合物的可非腸道給藥的、穩(wěn)定的藥物制劑中的用途H3C-(CH2)n—COOA(II)其中，n代表4～8，和A代表氫或1或2價陽離子。
7.按照權(quán)利要求1的藥物制劑，其特征在于它們含二糖作為低溫防護劑。
8.按照權(quán)利要求1的藥物制劑，其特征在于按重量比相對于1份的磷脂它們含0.8～4.0份蔗糖作為低溫防護劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及以用短鏈脂肪酸作為穩(wěn)定劑的脂質(zhì)體形式的親脂性、難溶活性化合物尤其是含二氫吡啶類基團的活性化合物的穩(wěn)定的脂質(zhì)體注射劑。
文檔編號A61K31/20GK1128655SQ9511515
公開日1996年8月14日 申請日期1995年9月12日 優(yōu)先權(quán)日1994年9月12日
發(fā)明者H-J·哈曼, P·塞諾, M·赫波思, P·柯卡 申請人:拜爾公司