專利名稱：一種治療卵巢早衰的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，具體涉及一種治療卵巢早衰的中藥組合物及其制備 方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
卵巢早衰(Premature Ovarian Failure, P0F)是指婦女40歲以前因某種原因引 起以閉經(jīng)、不孕、雌激素缺乏及促性腺激素升高為特征的一種疾病?；颊叩穆雅輧?nèi)無卵母 細胞或雖有原始細胞，但對促性腺激素無反應(yīng)，表現(xiàn)為雌激素水平低下、促性腺激素水平升 高。臨床上患者表現(xiàn)為閉經(jīng)、不孕，兼有面色潮紅、烘熱汗出、情緒波動、白帶減少、性欲低 下、陰部干燥、生殖器及第二性征逐漸退化的類更年期癥狀，影響患者的生活質(zhì)量?，F(xiàn)代醫(yī)學認為本病病因復(fù)雜，目前還不是十分清楚。理論上P0F發(fā)病機制為先天 性卵泡數(shù)量少、卵泡閉鎖增加、卵泡成熟障礙等。中醫(yī)學認為，本病屬“血枯”、“血隔”、“閉 經(jīng)”、“不孕”等范疇。其病因有學者將其歸納為以下幾個方面腎氣不足，腎精虧耗是本病 發(fā)病的基本病因；氣血虛弱，是本病發(fā)病的重要病因；其次情志郁結(jié)，氣血暗耗，沖任失調(diào) 或六淫時毒，浸淫胞脈，擾亂沖任是本病發(fā)病的主要誘因。在治療方面，西醫(yī)不外乎恢復(fù)，保養(yǎng)，替代卵巢功能這幾方面。到目前為止還沒有 確切有效的方法能恢復(fù)卵巢的功能。常用的治法有激素替代療法(HRT)，誘導(dǎo)排卵，輔助 贈卵技術(shù)，自體或異體卵巢移植技術(shù)，免疫抑制治療，補充鈣劑或降鈣素治療。中醫(yī)治療以腎為本，常見的有⑴單方驗方治療，如歸腎丸加減、一貫煎加減等； (2)成藥治療，如烏鱉口服液、仙樂雄膠囊等；(3)中藥人工周期治療；(4)中西醫(yī)結(jié)合治療， 如中西藥人工周期療法等；(5)針灸治療等。主要是通過補腎益氣、養(yǎng)血活血來改善癥狀。近10年來P0F的發(fā)生率有升高趨勢，其發(fā)病率在婦女中占1 % 3%，占繼發(fā)性閉 經(jīng)的2% 10%。由于其可導(dǎo)致自主神經(jīng)功能紊亂，新陳代謝障礙，雌激素靶器官萎縮及退 行性變從而產(chǎn)生軀干及精神癥狀，表現(xiàn)為不孕，并因體內(nèi)低雌激素水平而出現(xiàn)一系列癥狀， 如潮熱、出汗、陰道干澀、白帶減少、頭暈、情緒波動、失眠及性欲減退、骨質(zhì)疏松，嚴重影響 婦女的生活質(zhì)量，是當今生殖醫(yī)學和生殖健康研究的熱點和難點。西醫(yī)治療采用HRT方法， 停用后復(fù)發(fā)率高，且長期應(yīng)用可能誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌，而且患有子宮肌瘤、乳腺增生、 糖尿病及血栓等血液系統(tǒng)疾病的患者，不宜采取，還有部分婦女對激素的使用有心理障礙。 因此，探討中藥治療取代激素治療很有必要。發(fā)明人在多年的科研實踐和臨床經(jīng)驗中反復(fù)總結(jié)，發(fā)現(xiàn)了本發(fā)明的組合物對治療 卵巢早衰具有良好的效果，本發(fā)明組合物的處方由熟地黃、山茱萸、當歸、白芍、淫羊藿、丹 參等中藥組成。方中熟地黃、山茱萸滋陰補肝腎，為君藥；當歸、白芍、丹參補血、活血通經(jīng)； 淫羊藿補腎陽；丹參還可清心除煩。本發(fā)明組合物主要用于肝腎陰虛型卵巢早衰。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療卵巢早衰的中藥組合物；
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本發(fā)明的另一目的是提供一種治療卵巢早衰的中藥組合物的制備方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種治療卵巢早衰的中藥組合物，該組合物是由包含如下重量份的中藥原料制成 的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3。上述中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1。上述中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃3 山茱萸3 當歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1。上述中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃3 山茱萸3 當歸2 白芍2淫羊藿2 丹參2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15 % 30 %，攪拌，離心，取上清液，加入 乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時，減壓濃縮至相對密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時，合 并提取液，減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%，靜 置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液，減 壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物，還可以是由如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3 桂枝2 6。
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該中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1桂枝2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液， 加入乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，濃縮 至浸膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時，合并 提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時，減壓濃縮至相對密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時，合 并提取液，減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%，靜 置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液，減 壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入8倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提 取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物，還可以是由如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3桃仁2 6。該中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1桃仁2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；
(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液， 加入乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III;(4)取桃仁加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，濃縮 至浸膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時，合并 提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時，減壓濃縮至相對密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時，合 并提取液，減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%，靜 置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液，減 壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入8倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提 取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物，還可以是由如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3知母2 6。該中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1知母2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液， 加入乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III;
(4)取知母加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，濃縮 至浸膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時，合并 提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時，減壓濃縮至相對密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時，合 并提取液，減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%，靜 置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液，減 壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取知母加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入8倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提 取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物處方中熟地黃中多糖成分具有補血和抗衰老作用，山茱萸中 多糖成分有抗氧化及抗衰老作用，當歸中水溶性成份具有補血和調(diào)節(jié)免疫和物質(zhì)代謝的功 能。因此，熟地黃、山茱萸、當歸采用加水煎煮、濃縮，浸膏經(jīng)兩次醇沉，取沉淀減壓干燥，得 到多糖部分。白芍中總皂苷類成分具有免疫調(diào)節(jié)、護肝、改善睡眠、抗缺氧作用，淫羊藿苷對 卵泡顆粒細胞分泌E2有直接刺激作用，也促進腎上腺皮質(zhì)細胞分泌皮質(zhì)酮，丹參的脂溶性 類有效成分具有抗血小板聚集和抗血栓形成，改善微循環(huán)作用，抗氧化損傷和高脂損傷，多 途徑發(fā)揮心肌、肝細胞保護作用和抗炎等多種作用。所以，丹參采用醇提濃縮干燥的方法制 備中間體，淫羊藿、白芍采用水煎煮醇沉，浸膏減壓干燥。本發(fā)明還提供了采用藥劑學中常規(guī)的制藥方法和上述的制備方法將本發(fā)明的中 藥組合物制備成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液等制劑的技術(shù)方案。本發(fā)明的中藥組合物可以用來治療卵巢早衰，發(fā)明人對本發(fā)明提供的技術(shù)方案進 行了藥效學實驗研究，用以證明本發(fā)明中藥組合物的治療作用。下述實驗用于進一步說明 本發(fā)明的效果，但不限制本發(fā)明。本發(fā)明組合物對卵巢早衰的實驗研究1試驗材料1. 1 藥物本發(fā)明組合物實施例1組合物藥物中間體(以下簡稱“實施例1藥物”)17-雌二醇Sigma，批號 016kll94 ；1. 2 動物Balb/c小鼠雌性，8 9周齡，18 22g，來源上海西普爾-必凱實驗動物公司， 合格證號SCXK (滬)2003-0002
1. 3 試劑豬卵透明帶蛋白(pZP4)，復(fù)旦大學附屬婦產(chǎn)科研究所免疫室自制，制備參見實驗 方法磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7. 4) :Na2HP04 1. 44g, KH2P04 0 . 24g, NaCl 8. Og, KC1 0. 2g, 加蒸餾水定容至1000ml，高壓滅菌后于室溫保存異丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)上海申能博彩生物科技公司Ni-NTA Agarose :Qiagen，批號 12190983離心超濾管(5KD):Milipore, Amicon Ultra-15BCA-100蛋白定量試劑盒上海申能博彩生物科技有限公司完全弗氏佐劑(CFA):Sigma，批號 054k8931不完全弗氏佐劑(IFA) :Sigma，批號025k8910胎牛血清(FBS):GIBC0，批號 4987161640 培養(yǎng)液GIBC0，批號 31800刀豆蛋白(ConA):Sigma，批號 C 2010羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)國藥集團上?；瘜W試劑公司，批號F2000027小鼠脾臟淋巴細胞分離液(EZ-S^jp Mouse)達科為生物技術(shù)公司，批號 33R020703羊抗鼠雌二醇(E2)測定試劑盒(ELISA):Adlitteram diagnosticlaboratories, Inc.批號 0708辣根過氧化物酶標記的羊抗小鼠IgG抗體，上海華美生物工程公司，批號576807包被緩沖液(0. 05M碳酸鹽緩沖，pH9. 6) :Na2C03 1. 59g，NaHC032. 93g，加蒸餾水定 容至 1000ml ；洗滌緩沖液(PBST，pH7.4) :PBS+0. 05% Tween-20封閉液及抗體稀釋液PBST+5% FCS底物緩沖液(pH5.0) 0. 2M Na2HP04 (28 . 4g/L) 25. 7ml, 0. 1M 檸檬酸(19. 2g/ L)24. 3ml，加蒸餾水 50mlTMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液TMB(10mg/5ml無水乙醇)0. 5ml，底物緩沖液 (PH5. 5) 10ml,0. 75% H20232 u 1 ；終止液(2M H2S04)蒸餾水178. 3ml，逐滴加入濃硫酸(98% )21. 7ml ；1.4 儀器潔凈操作臺(細菌)上海凈化設(shè)備廠垂直面對面超凈臺(細胞)上海上凈凈化設(shè)備公司振蕩培養(yǎng)箱國華電器有限公司，BS-2F低溫離心機:Beckman, GS—15R小型臺式離心機:Eppendorf,5424型電泳圖像分析系統(tǒng)儀Alpha Innotech. Corporation酶標儀Bio_Rad，Model 3550C02 培養(yǎng)箱Heal Force，HF90熒光正置顯微鏡0LYMPUS，BX51
電熱恒溫水浴槽上海精宏實驗設(shè)備公司，DKB-8A液閃發(fā)光測定儀美國PerkinElmer(PE)公司，MicroBeta 1450微量振蕩器江蘇海門其林醫(yī)用儀器廠，MH-1型電子天平:METTER AE260 Delta RangepH 儀Fisher Scientific，Model 102實驗方法2. 1重組豬卵透明帶蛋白(pZP4)的表達與純化將pET28a(+)-pZP4重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)大腸桿菌中。含重組質(zhì)粒的大腸 桿菌于37°C振蕩培養(yǎng)至0D600達到0. 6，加入終濃度為0. 5mmol/L的IPTG，37°C誘導(dǎo)表達 5h，離心收集菌液沉淀。因為重組蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式存在，故在變性條件下使 用Ni-NTA Agarose純化蛋白。將蛋白純化洗脫液裝入離心超濾管中，PBS(pH7. 4)4°C脫鹽 濃縮，收集到的蛋白溶液經(jīng)0. 22 P m濾器過濾后，分裝保存于一 20°C備用。使用BCA蛋白定 量試劑盒對蛋白溶液定量。2. 2卵巢早衰小鼠模型制備、分組給藥2. 2.1模型制備每天上午9:00取雌性Balb/c小鼠陰道脫落細胞制備涂片，于光學顯微鏡下觀察 其性周期。2周后篩選出性周期正常小鼠90只，隨機選取10只小鼠作為正常對照組，其余 小鼠以6His-pZP4重組蛋白作為抗原進行免疫制備卵巢早衰小鼠模型。方法如下將50iU 含有5 y g抗原的PBS溶液與50 u 1 CFA充分乳化，于小鼠兩后腳掌和皮下進行多點注射。 之后每隔2周以等量抗原與IFA乳化液加強免疫1次，共加強免疫2次。正常對照組小鼠 同時以100 ill緩沖液PBS進行免疫。2. 2. 2分組給藥第3次免疫后第7天于小鼠眼球后靜脈叢取血，離心取血清測定E2。根據(jù)E2含量 篩選出造模成功小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，分別為本發(fā)明實施例1藥物的高、 中、低三個劑量組(15. 0,7. 5,3. 75g/kg)、雌激素組(0. 13mg/kg)及模型對照組(與正常對 照組給予等量的0. 5% CMC-Na)。實施例1藥物的人臨床用量為60g生藥/d，換算成小鼠 臨床等效劑量60 X 0. 0026 X 50 = 7. 8g生藥/kg，此劑量即為中劑量，2倍臨床等效劑量為 高劑量，0.5倍臨床等效劑量為低劑量。卵巢早衰及卵巢儲備功能下降，目前一般用雌激素 補充療法，人臨床用量為lmg/d，換算成小鼠臨床等效劑量為1X0. 0026X50 = 0. 13mg/kg。 各組小鼠每天灌胃一次(雌激素組灌胃3天，間隔1天)，給藥容積為0. 2ml/10g，共給藥20 天。于末次給藥后一小時從小鼠眼球后靜脈叢取血，分離出血清，-20°C儲存?zhèn)溆?。并行頸 椎脫白處死小鼠，無菌條件下摘取脾臟及卵巢。2. 3檢測指標2. 3. 1陰道脫落細胞涂片觀察每天用無菌棉簽蘸適量生理鹽水取雌性Balb/c小鼠陰道脫落細胞制備涂片，于 光學顯微鏡下觀察其性周期隨時間的變化。2. 3.2血清E2的測定ELISA方法測定。2. 3. 3重組抗原體外誘導(dǎo)脾淋巴細胞增殖反應(yīng)
無菌條件下取小鼠脾臟研磨，于200目尼龍網(wǎng)過濾收集細胞，以小鼠脾臟淋巴 細胞分離液分離淋巴細胞。臺盼藍染色檢測細胞活率> 95%，以含20%胎牛血清的 RPMI-1640培養(yǎng)液制備細胞懸液，調(diào)整細胞濃度為2X106cells/ml。取細胞懸液100 yl 加入96孔圓底細胞培養(yǎng)板內(nèi)(3復(fù)孔)，隨后加入100 ill RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋的重組 6His-pZP4抗原(10u g/ml,20u g/ml)或ConA(20 y g/ml，陽性對照)及 RPMI-1640 (空白對 照)，置于37°C ,5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前18h，每孔加20 u l3H_TdR(30 u Ci/ ml)。將每孔細胞用多頭細胞收集儀收集至凈化濾紙上，紅外線干燥后，放入閃爍液中，于3 射線計數(shù)儀測量cpm值。計算細胞增殖活性，以刺激指數(shù)(stimulateindex，SI)表示SI =(抗原刺激后cpm值-抗原未刺激cpm值)/抗原未刺激cpm值。2. 3. 4ELISA方法測定血清抗pZP4抗體滴度96孔酶標板每孔加入100 ill含有0. 5 ii g重組6His-pZP4蛋白的包被緩沖液，4°C 過夜。PBST洗板3次，含5%小牛血清的PBST溶液37°C封閉lh。再洗板3次，將血清按一 定比例進行3倍倍比稀釋后于37°C孵育lh，PBS作為陰性對照。再洗板6次，用辣根過氧 化物酶標記的羊抗小鼠IgG抗體(1 1000稀釋)37°C孵育lh。再洗板6次，于各反應(yīng)孔 中加入臨時配制的TMB底物溶液100111，371孵育151^11，最后用211 H2S04 50 yl終止顯色 反應(yīng)。以630nm為參照波長，測定0D450?？寡遄罡呦♂尪瘸赎栃哉?0D450彡0. 2)，其 稀釋度的倒數(shù)即為抗血清效價。2. 3. 5自身免疫性卵巢組織炎形態(tài)學觀察收集的卵巢經(jīng)10%中性福爾馬林固定，由實驗設(shè)計非知情人員進行石蠟包埋、切 片，常規(guī)HE染色，在光學顯微鏡下計數(shù)黃體及各個時期濾泡數(shù)量。2. 4統(tǒng)計學分析應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS 11. 5. 0的多因素方差分析模塊進行數(shù)據(jù)分析，P < 0. 05表示 差異有統(tǒng)計學意義。3實驗結(jié)果3. 1陰道脫落細胞涂片改變卵巢的主要功能表現(xiàn)為周期性排卵及分泌相應(yīng)性激素水平的周期性變化，同時， 伴有陰道上皮細胞學的周期性變化。由于雌二醇分泌減少，造成動情周期延長，動情期縮 短、動情間期延長，所以動情周期的紊亂可以作為反映性激素分泌與代謝失衡的敏感指標。 小鼠動情周期一般為4 5天，包括動情前期、動情期、動情后期和動情間期。第2次免疫 后2周，正常對照組動情周期無明顯變化，而抗原免疫組大多數(shù)小鼠周期變的不規(guī)則，主要 表現(xiàn)為動情期延長至2 4天或動情間期延長至3 5天。第3次免疫后1周，依據(jù)血清 E2含量篩選出造模成功小鼠50只，隨機分為實施例1藥物的高、中、低三個劑量組，雌激素 組和模型對照組5組，每組10只。在隨后的3周內(nèi)，正常對照組動情周期未見明顯變化；模 型對照組大部分小鼠周期延長至7 9天，或持續(xù)處于動情間期；雌激素組周期紊亂，以動 情期延長為主，或持續(xù)處于動情期；實施例1藥物的低劑量組小鼠周期變化與模型對照組 小鼠相似；實施例1藥物的中劑量組小鼠周期不規(guī)則，表現(xiàn)為動情期或間期延長；實施例1 藥物的高劑量組小鼠周期大多數(shù)為6 7天，動情期2 3天，間期3 4天。3. 2各組小鼠的血清E2含量比較與模型組相比，雌激素組小鼠和實施例1藥物的高劑量組小鼠的血清氏濃度明顯升高，其差別具有顯著性意義(P < 0. 01)，見表1。
表1各組小鼠的血清E2濃度 注與正常組比較，AP<0.01 ；與模型組比較廣P<0.013. 3重組抗原體外誘導(dǎo)脾淋巴細胞增殖能力的測定不同濃度的重組6His_pZP4蛋白在體外均可誘導(dǎo)免疫后小鼠脾淋巴細胞發(fā)生增 殖，且增殖能力有正相關(guān)趨勢。與模型組比較，重組抗原誘導(dǎo)實施例1的本發(fā)明組合物中、 高劑量組小鼠脾淋巴細胞的增殖能力顯著降低(P < 0. 05)，誘導(dǎo)雌激素組小鼠脾淋巴細胞 的增殖能力沒有明顯變化(P > 0. 05)，見表2。表2重組抗原對各組小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)的作用(SI，I 士SD) 注與模型組比較，*P < 0. 05 ；正常組中抗原未刺激的cpm值高于抗原刺激后的 cpm值3. 4各組小鼠血清抗pZP4抗體效價比較雌激素組小鼠和實施例1藥物各組小鼠的血清抗PZP4抗體滴度較模型組小鼠都 有下降，但只有實施例1藥物高劑量組的差異具有統(tǒng)計學意義(P < 0. 05)，見表3。表3藥物對小鼠抗pZP4抗體滴度的影響 注與模型組相比，乍< 0.05;正常組的抗體滴度低于1 100
3. 5自身免疫性卵巢組織損傷的形態(tài)學分析實驗結(jié)果見表4。表4小鼠卵巢病理變化平均積分值(X±SD)
正常組 模型組 雌激素組 實施例1藥物高
劑量組 實施例1藥物中
劑量組 實施例1藥物低 劑量組注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0.01光鏡下見模型組小鼠的卵巢組織表現(xiàn)為各期卵泡數(shù)量較正常組明顯減少，包括原 始卵泡、初級卵泡、次級卵泡；黃體數(shù)量減少，多數(shù)呈萎縮狀態(tài)，體積較小，中央部有較為明 顯的退行性變；卵巢間質(zhì)致密，有多量閉鎖卵泡和間質(zhì)腺(發(fā)育退變的卵泡)，未見明顯的 炎癥細胞浸潤。雌激素組和實施例1藥物低、中、高劑量組各組小鼠卵巢組織各期卵泡數(shù) 及黃體數(shù)較正常組少，但較模型組增多，部分黃體細胞發(fā)育良好，部分有萎縮現(xiàn)象。其中 實施例1藥物高劑量組小鼠初級卵泡和次級卵泡的數(shù)量與模型組比較具有統(tǒng)計學差異(P < 0. 05)。4.結(jié)論上述各項檢測指標結(jié)果表明，本研究成功地建立了自身免疫性卵巢損傷的小鼠動 物模型；實施例1藥物灌服模型組小鼠后，能改善卵巢的生殖內(nèi)分泌功能和卵巢內(nèi)各期卵 泡和黃體的發(fā)育狀況，并可在一定程度上抑制自身免疫損傷作用。三種不同劑量比較，以實 施例1藥物高劑量組的效果最佳，由此可以證明，本發(fā)明實施例1藥物具有治療卵巢早衰的 作用。采用與上述實驗相同的方法對本發(fā)明實施例11組合物藥物中間體(以下簡稱“實 施例11藥物”)、實施例14組合物藥物中間體(以下簡稱“實施例14藥物”)的進行實驗 研究。實驗結(jié)果見表5、6、7、8、9、10、11、12 各組小鼠的血清E2含量比較，結(jié)果見表5，表6。表5各組小鼠的血清E2濃度
14 注與正常組比較，AP<0.01 ；與模型組比較廣P < 0. 01表6各組小鼠的血清氏濃度 注與正常組比較，△P<0.01；與模型組比較**P<0.01重組抗原體外誘導(dǎo)脾淋巴細胞增殖能力的測定，結(jié)果見表7，表8 。 表7重組抗原對各組小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)的作用(SI，I 士SD) 注與模型組相比較，*P<0.05；正常組中抗原未刺激的CPM值高于抗原刺激后的cpm值表8重組抗原對各組小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)的作用(SI，Ｘ±ＳＤ) 注與模型組比較，*P < 0. 05 ；正常組中抗原未刺激的cpm值高于抗原刺激后的cpm值
各組小鼠血清抗PZP4抗體效價比較，結(jié)果見表9、表10。 表9藥物對小鼠抗pZP4抗體滴度的影響 注與模型組相比，乍< 0.05;正常組的抗體滴度低于1 100
表10藥物對小鼠抗pZP4抗體滴度的影響
注與模型組相比，乍< 0.05;正常組的抗體滴度低于1 100 自身免疫性卵巢組織損傷的形態(tài)學分析，結(jié)果見表11，表12。 表11小鼠卵巢病理變化平均積分值彳X±SD) 注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0.01表12小鼠卵巢病理變化平均積分值(X±SD)
注與模型組比較，*P< 0. 05, **P < 0.01結(jié)論上述各項檢測指標結(jié)果表明，實施例11藥物與實施例14藥物灌服模型組小 鼠后，能改善卵巢的生殖內(nèi)分泌功能和卵巢內(nèi)各期卵泡和黃體的發(fā)育狀況，并可在一定程 度上抑制自身免疫損傷作用。三種不同劑量比較，以實施例11藥物與實施例14藥物的高 劑量組的效果最佳。綜上實驗可以證明，本發(fā)明的中藥組合物可以有效治療卵巢早衰。有益效果1、本發(fā)明組合物的處方由熟地黃、山茱萸、當歸、白芍、淫羊藿、丹參等中藥組成。 方中熟地黃、山茱萸滋陰補肝腎，當歸、白芍、丹參補血、活血通經(jīng)；淫羊藿補腎陽；丹參還 可清心除煩。本發(fā)明的中藥組合物組方合理，配伍得當，通過實驗研究表明，本發(fā)明組合物 對于治療肝腎陰虛型卵巢早衰，效果顯著。2、本發(fā)明的中藥組合物處方中熟地黃中多糖成分具有補血和抗衰老作用，山茱萸 中多糖成分有抗氧化及抗衰老作用，當歸中水溶性成份具有補血和調(diào)節(jié)免疫和物質(zhì)代謝的 功能。因此，熟地黃、山茱萸、當歸采用加水煎煮、濃縮，浸膏經(jīng)兩次醇沉，取沉淀減壓干燥， 得到多糖部分。白芍中總皂苷類成分具有免疫調(diào)節(jié)、護肝、改善睡眠、抗缺氧作用，淫羊藿苷 對卵泡顆粒細胞分泌E2有直接刺激作用，也促進腎上腺皮質(zhì)細胞分泌皮質(zhì)酮，丹參的脂溶 性類有效成分具有抗血小板聚集和抗血栓形成，改善微循環(huán)作用，抗氧化損傷和高脂損傷， 多途徑發(fā)揮心肌、肝細胞保護作用和抗炎等多種作用。所以，丹參采用醇提濃縮干燥的方法 制備中間體，淫羊藿、白芍采用水煎煮醇沉，浸膏減壓干燥。將以上膏粉碎，混勻，即得本發(fā) 明組合物。本發(fā)明提供的制備方法簡便，易操作，而且可以有效地提取得到組合物的有效成 分。3、本發(fā)明提供了多種藥物劑型的制備方法，將本發(fā)明組合物制備成一定的藥物劑 型能夠更加地方便服用，提高治療效果。
具體實施例方式實施例1:膠囊劑處方熟地黃180g 山茱萸180g 當歸180g白芍180g 淫羊藿180g 丹參90g
制備方法(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1. 5小時，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%， 靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量二氧化硅，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實施例2 膠囊劑熟地黃240g 山茱萸240g 當歸160g白芍160g 淫羊藿160g丹參80g制備方法⑴取丹參，加入4倍量70 %乙醇提取3次，每次0. 5小時，合并提取
液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8倍量水煎煮提取3次，每次0.5小時，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4倍量水煎煮提取3次，每次1小時，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中的 一種或多種)，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實施例3 膠囊劑熟地黃210g山茱萸210g當歸140g白芍140g 淫羊藿140g丹參140g。制備方法⑴取丹參，加入5倍量75%乙醇回流提取3次，每次0. 5小時，合并提
取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入9倍量水提取3次，每次0. 5小時，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；
(3)取當歸、熟地、山茱萸加入12倍量水提取1次，每次3小時，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中的 一種或多種)，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒，即得。實施例4 顆粒劑熟地黃240g 山茱萸240g 當歸240g白芍160g 淫羊藿80g 丹參160g。制備方法⑴取丹參，加入6倍量75 %乙醇提取3次，每次0. 5小時，合并提取
液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入10倍量水提取3次，每次0. 5小時，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入11倍量水提取1次，每次3小時，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中 的一種或多種)，干燥，粉碎，加入合適的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、PEG300、PEG400、 PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、微晶纖維素等或液體粘合劑如乙醇、明膠漿、淀粉漿、糖 漿等一種或多種)，制粒，整粒制成顆粒劑lOOOg，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5克，一日3次。實施例5 片劑熟地黃180g 山茱萸180g 當歸180g白芍120g 淫羊藿180g丹參120g。制備方法(1)取丹參，加入7倍量80%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入11倍量水提取2次，每次1小時，合并提取液，濃縮，放冷， 加入乙醇使含醇量達65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達80 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入10倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃
縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，入 適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇及其他藥劑學常用 的稀釋輔料等一種或多種)，混合，干燥，粉碎，加入適量的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、 PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖 維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等或液體粘合劑 如乙醇、明膠漿、淀粉漿等一種或多種)，制顆粒，加入潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂富 馬酸鈉等一種或多種)，整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實施例6:軟膠囊熟地黃300g 山茱萸150g 當歸300g白芍100g 淫羊藿100g丹參100g。制備方法(1)取丹參，加入8倍量80%乙醇回流提取2次，每次1小時，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入12倍量水煎煮提取2次，每次1小時，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入9倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中的 一種或多種)，干燥，粉碎，與合適的輔料(如PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、 PEG1000、PEG1500及植物油系列等，防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等；增溶劑如吐 溫系列等一種或多種，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等一種或多種)，以任何方式混 勻后，裝入膠囊中，制成1000粒軟膠囊，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實施例7: 口服液熟地黃150g 山茱萸150g 當歸300g白芍250g 淫羊藿100g丹參150g。制備方法(1)取丹參，加入9倍量85%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入13倍量水提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 85%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 85%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；
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(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入到沸水里，熱處理適當時間，冷藏，濾過，加入輔料嬌味劑的如蔗糖、蜂蜜、木糖醇、甜菊 糖、麥芽糖醇等一種或多種；防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等一種或多種；增溶劑 如吐溫系列等，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等等一種或多種)，濾過，灌封，制成 lOOOmL，滅菌，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5毫升，一日3次。實施例8 濃縮丸熟地黃200g 山茱萸150g 當歸200g白芍200g 淫羊藿200g丹參50g。制備方法⑴取丹參，加入10倍量85%乙醇提取1次，每次1. 5小時，合并提取
液，濃縮，得浸膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入14倍量水煎煮提取1次，每次1. 5小時，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達85%，靜置，取上清液濃縮，得浸膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入7倍量水煎煮提取3次，每次1小時，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 90%，靜置，取沉淀部分，得浸膏III ；(4)取以上I、II、III三份浸膏，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，泛制成 丸，低溫干燥，制成濃縮丸5000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次10 15粒，一日3次。實施例9:咀嚼片熟地黃275g 山茱萸165g 當歸110g白芍110g 淫羊藿220g丹參110g。制備方法⑴取丹參，加入11倍量90%乙醇回流提取1次，每次1. 5小時，合并
提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入15倍量水提取1次，每次2小時，合并提取液，濃縮，放冷， 加入乙醇使含醇量達75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達90 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入6倍量水提取3次，每次1小時，合并提取液，濃縮至 浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達30 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達95 %， 靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖或甘露糖醇等稀釋輔料 中的一種或多種)混合，干燥，粉碎，得到細粉與適量的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、 PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖 維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等等或液體粘合劑如乙醇、淀粉漿、糊精漿等一種或多種)混合制顆粒，加入適量矯味劑(如甘露醇、蔗糖、 木糖醇、甜菊糖、麥芽糖醇、薄荷腦、四丁醇、橙皮油、桂皮油、各種香精等一種或多種)、潤滑 劑(如硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂富馬酸鈉、月桂醇硫酸鎂等一種或多種)、崩解劑(如羧甲基 淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素、預(yù)膠化淀粉、微 晶纖維素、大豆多糖、海藻酸、處理瓊脂等一種或多種)整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實施例10 滴丸熟地黃200g 山茱萸120g 當歸200g白芍200g 淫羊藿160g丹參120g。制備方法⑴取丹參，加入12倍量90%乙醇提取1次，每次2小時，合并提取液，
濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量水煎煮提取1次，每次2. 5小時，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達90%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入5倍量水煎煮提取3次，每次1小時，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達30 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，將 聚乙二醇-4000與浸膏粉以1 6 1 5的比例熔融混合，甲基硅油作冷卻劑，滴制成滴 丸1000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實施例11 膠囊劑處方熟地黃180g 山茱萸180g 當歸180g 白芍180g淫羊藿180g丹參90g 桂枝180g制備方法(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1.5小時，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%， 靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入8倍量75%乙醇提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量二氧化硅，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實施例12:顆粒劑熟地黃240g 山茱萸240g 當歸240g 白芍160g淫羊藿80g 丹參160g 桂枝100g制備方法⑴取丹參，加入6倍量75%乙醇回流提取3次，每次0. 5小時，合并提
取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入10倍量水煎煮提取3次，每次0. 5小時，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入11倍量水煎煮提取1次，每次3小時，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入6倍量水煎煮提取2次，每次3小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入6倍量80%乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水煎 煮提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中 的一種或多種)，干燥，粉碎，加入合適的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、PEG300、PEG400、 PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、微晶纖維素等或液體粘合劑如乙醇、明膠漿、淀粉漿、糖 漿等一種或多種)，制粒，整粒制成顆粒劑lOOOg，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5克，一日3次。實施例13 片劑熟地黃240g 山茱萸240g 當歸240g 白芍160g淫羊藿80g 丹參160g 桂枝180g制備方法(1)取丹參，加入7倍量80%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入11倍量水提取2次，每次1小時，合并提取液，濃縮，放冷， 加入乙醇使含醇量達65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達80 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入10倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃
縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入12倍量水提取3次，每次1小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備用；藥渣加入9倍量85%乙醇提取2次，每次3小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的 浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間 體，入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇及其他藥劑 學常用的稀釋輔料等一種或多種)，混合，干燥，粉碎，加入適量的粘合劑(固體粘合劑如 PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、 羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等或液 體粘合劑如乙醇、明膠漿、淀粉漿等一種或多種)，制顆粒，加入潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石 粉、硬脂富馬酸鈉等一種或多種)，整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實施例14 膠囊劑處方熟地黃180g 山茱萸180g 當歸180g 白芍180g淫羊藿180g丹參90g 桃仁180g。制備方法⑴取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1. 5小時，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%， 靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III (4)取桃仁加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入8倍量75%乙醇提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的 浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量二氧化硅，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實施例15 軟膠囊熟地黃300g 山茱萸150g 當歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 桃仁180g。制備方法⑴取丹參，加入8倍量80%乙醇回流提取2次，每次1小時，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入12倍量水提取2次，每次1小時，合并提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達80 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入9倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至 浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達80 %， 靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入12倍量水提取3次，每次1小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入9倍量75%乙醇回流提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取 得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中 的一種或多種)，干燥，粉碎，與合適的輔料(如PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、 PEG1000、PEG1500及植物油系列等，防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等；增溶劑如吐 溫系列等一種或多種，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等一種或多種)，以任何方式混 勻后，裝入膠囊中，制成1000粒軟膠囊，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實施例16: 口服液熟地黃300g 山茱萸150g 當歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 桃仁150g。制備方法(1)取丹參，加入9倍量85%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入13倍量水煎煮提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達85%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次1. 5小時，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 85%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入7倍量水煎煮提取3次，每次1. 5小時，合并提取液，濃縮至浸膏， 備用；藥渣加入10倍量85%乙醇提取1次，3小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水煎煮提取 得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入到沸水里，熱處理適當時間，冷藏，濾過，加入輔料嬌味劑的如蔗糖、蜂蜜、木糖醇、甜 菊糖、麥芽糖醇等一種或多種；防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等一種或多種；增溶 劑如吐溫系列等，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等等一種或多種)，濾過，灌封，制成 lOOOmL，滅菌，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5毫升，一日3次。實施例17 濃縮丸
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處方熟地黃180g 山茱萸180g 當歸180g 白芍180g淫羊藿180g丹參90g 知母180g。制備方法(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1. 5小時，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%， 靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達80%，靜置12小時，上清液減壓濃縮至60°C相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置12小時，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入8倍量75%乙醇提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的 浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 泛制成丸，低溫干燥，制成濃縮丸5000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次10 15粒，一日3次。實施例18 咀嚼片熟地黃300g 山茱萸150g 當歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 知母130g。制備方法(1)取丹參，加入8倍量80%乙醇回流提取2次，每次1小時，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入12倍量水煎煮提取2次，每次1小時，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入9倍量水煎煮提取2次，每次2小時，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入12倍量水煎煮提取3次，每次1小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入9倍量75%乙醇回流提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水 煎煮提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間 體，加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀 鹽、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖或甘露糖醇等稀釋輔 料中的一種或多種)混合，干燥，粉碎，得到細粉與適量的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、 PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等等或液體粘合 劑如乙醇、淀粉漿、糊精漿等一種或多種)混合制顆粒，加入適量矯味劑(如甘露醇、蔗糖、 木糖醇、甜菊糖、麥芽糖醇、薄荷腦、四丁醇、橙皮油、桂皮油、各種香精等一種或多種)、潤滑 劑(如硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂富馬酸鈉、月桂醇硫酸鎂等一種或多種)、崩解劑(如羧甲基 淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素、預(yù)膠化淀粉、微 晶纖維素、大豆多糖、海藻酸、處理瓊脂等一種或多種)整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實施例19 滴丸熟地黃300g 山茱萸150g 當歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 知母170g。制備方法(1)取丹參，加入9倍量85%乙醇回流提取2次，每次1小時，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入13倍量水提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達 85%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次1. 5小時，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達 85%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入7倍量水提取3次，每次1.5小時，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入10倍量85%乙醇提取1次，3小時，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸 膏合并，混勻，干燥，得干膏VI;(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 將聚乙二醇-4000與浸膏粉以1 6 1 5的比例熔融混合，甲基硅油作冷卻劑，滴制成 滴丸1000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。
2權(quán)利要求
一種治療卵巢早衰的中藥組合物，其特征在于該組合物是由包含如下重量份的中藥原料制成的熟地黃 2～6 山茱萸2～6 當歸2～6 白芍2～6淫羊藿 2～6 丹參1～3。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2山茱萸2當歸2白芍2 淫羊藿2丹參1。
3.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃3山茱萸3當歸2白芍2 淫羊藿2丹參1。
4.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃3山茱萸3當歸2白芍2 淫羊藿2丹參2。
5.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當歸2 6 白芍2 6 淫羊藿2 6丹參1 3 桂枝2 6。
6.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當歸2 6 白芍2 6 淫羊藿2 6 丹參1 3 桃仁2 6。
7.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當歸2 6 白芍2 6 淫羊藿2 6 丹參1 3 知母2 6。
8.如權(quán)利要求1 4所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的中藥組合物制備方法，其特征在于(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時，合并提取液，減壓回收乙醇并 濃縮至相對密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1.5小時，合并提取 液，減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達70%，靜置，上 清液減壓濃縮至相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達80%，靜置，上 清液減壓濃縮至相對密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至 相對密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達20%，充分攪拌，離心，，靜置， 取上清液，加入乙醇使含醇量達85%，靜置，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
10.如權(quán)利要求5所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15% 30%，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，濃縮至浸 膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時，合并提取 液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
11.如權(quán)利要求6所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15% 30%，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，濃縮至浸 膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時，合并提取 液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
12.如權(quán)利要求7所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達15% 30%，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取知母加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時，合并提取液，濃縮至浸 膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時，合并提取 液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
13.如權(quán)利要求8 12所述的制備方法，其特征在于采用藥劑學中常規(guī)的制藥方法制 備成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液體制劑。
14.如權(quán)利要求1 7所述的中藥組合物，其特征在于該組合物在制備治療卵巢早衰藥 物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療卵巢早衰的中藥組合物，該組合物是由包含如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2～6重量份，山茱萸2～6重量份，當歸2～6重量份，白芍2～6重量份，淫羊藿2～6重量份，丹參1～3重量份。本發(fā)明還提供了上述的中藥組合物的制備方法，可將中藥組合物制備成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液體制劑的技術(shù)方案。
文檔編號A61P15/08GK101850016SQ20091013407
公開日2010年10月6日 申請日期2009年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月31日
發(fā)明者劉濤, 孫永城, 尚強, 李淼, 王振中, 章晨峰, 蕭偉, 鄒燕萍 申請人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司