專利名稱：虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物制備領(lǐng)域，涉及虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的新應(yīng)用。近三十年來，全球惡性腫瘤發(fā)病數(shù)以年均3% 5%的速度遞增，世界衛(wèi)生組織報(bào)告 顯示，2020年全世界惡性腫瘤發(fā)發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50%，全球每年新增惡性腫瘤發(fā)患者 人數(shù)將達(dá)到1500萬人，全球因惡性腫瘤發(fā)死亡的人數(shù)預(yù)計(jì)將達(dá)到700萬人/年，每5秒就 有1人死于癌癥。惡性腫瘤對(duì)人類健康和生命的威脅很大，它和心血管疾患已成為醫(yī)學(xué)上 的兩大難關(guān)，在全世界構(gòu)成死亡原因的頭兩位。對(duì)惡性腫瘤的治療，傳統(tǒng)的方法包括手術(shù)、 放射治療和化學(xué)治療，目前化學(xué)治療是晚期惡性腫瘤的主要治療手段之一，雖然近年來分 子靶向藥物層出不窮，但大多數(shù)靶向藥物單藥有效率很低，常常需和化療藥物聯(lián)合才能取 得較好的療效，一些療效較好的分子靶向藥物在治療失敗后，仍需采用化療等治療手段，因 此，化療在惡性腫瘤治療中仍處于基礎(chǔ)地位，但目前臨床上廣泛使用的化療藥物療效有限， 毒性作用較大，經(jīng)幾次應(yīng)用后還會(huì)發(fā)生耐藥，亟需尋找新的高效低毒的化療藥物。近年來，采用傳統(tǒng)中藥等植物提取物探討惡性腫瘤治療的新途徑引起了人們的關(guān) 注，從傳統(tǒng)中藥提取的抗腫瘤藥物如冬凌草甲素、黃連素、姜黃素的體外實(shí)驗(yàn)表明可抑制多 種腫瘤細(xì)胞的增殖，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示該類藥物不良反應(yīng)小，從植物中提取的紫杉醇、喜樹堿、 長(zhǎng)春新堿等藥物已在臨床上廣泛應(yīng)用。因此篩選新型抗腫瘤的植物藥，確定其抗腫瘤作用 并探討其機(jī)制，已成為當(dāng)今腫瘤治療研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一?；⒄溶帐菑幕⒄鹊母稍锔o中提取的第4種單體，故又名虎杖結(jié)晶4號(hào)，也可稱為 白藜蘆醇苷。分子式=C2tlH22O8，分子量390. 131468，化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明虎杖苷對(duì)心肌細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、抗血小板聚集、改善微循環(huán) 等有顯著作用，此外還能減輕多種因素造成的組織器官損傷，具有保護(hù)肝細(xì)胞，降血脂及抗 脂質(zhì)過氧化等作用，例如張霖等人發(fā)表的文章探討了虎杖苷對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠胰島 素抵抗(IR)以及血清腫瘤壞死因子α (TNF-α)的影響，具體方法為健康雄性SD大鼠44 只，隨機(jī)分為正常組(A)和模型組(M)，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周，造模成功后將模型組 隨機(jī)分為5組空白模型組(B)、虎杖苷高劑量組(C_l)、虎杖苷中劑量組(CJ)、虎杖苷低 劑量組(C_3)、非諾貝特組(D)，每組7只，高脂飼料持續(xù)8周后，A組、B組予以生理鹽水灌 胃，5 ml/次，C_1、C_2、C_3分別以160、80、40 mg · kg—1 · cf1虎杖苷混懸液灌胃，D組以100 mg · kg"1 · cf1非諾貝特混懸液灌胃.持續(xù)4周后處死動(dòng)物，分離血清，檢測(cè)、計(jì)算各組大鼠 空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FNS)、胰島素抵抗指數(shù)(頂1)、胰島素敏感指數(shù)(ISI) ,TNF-a背景技術(shù)水平。結(jié)果顯示虎杖苷高劑量組與模型組頂1、ISI、TNF-α水平存在顯著差異(Ρ<0. 05， Ρ<0. 01)，且在改善頂方面虎杖苷高劑量組優(yōu)于西藥對(duì)照組(Ρ<0. 01)，可知虎杖苷能改善 NAFLD大鼠體內(nèi)頂狀態(tài)，降低TNF- α水平，是其治療非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的可能 作用機(jī)制(參見張霖，呂志平.時(shí)珍國醫(yī)國藥.2010，21(4))?，F(xiàn)有技術(shù)書中，未見關(guān)于虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供虎杖苷的新應(yīng)用，即虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明同時(shí)提供一種抗腫瘤藥物，所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。上述抗腫瘤藥物除了包括主要成分虎杖苷外，需要的時(shí)候還可以加入一種或多種 藥學(xué)上可接受的載體；所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn) 劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等；所述藥物的劑型包括膠囊、片 劑或注射劑，均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。上述技術(shù)方案中，所述腫瘤包括乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、白 血病。
上述抗腫瘤藥物可以以單藥的形式用于治療腫瘤，或者與其他化療藥物以及放射 治療聯(lián)合用于惡性腫瘤的綜合治療。由于上述技術(shù)方案的應(yīng)用，本發(fā)明相對(duì)現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷處理的乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、 白血病等細(xì)胞的增殖均受到明顯的抑制，細(xì)胞周期分析則顯示細(xì)胞周期S期阻滯和細(xì)胞凋 亡；低濃度虎杖苷還具有抑制腫瘤細(xì)胞遷移和粘附的作用。2、本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷在增加惡性腫瘤治療效果、降低腫瘤患者復(fù)發(fā)、 轉(zhuǎn)移發(fā)生率的同時(shí)，較目前臨床常用的化療藥物毒副作用明顯減低，從而提高惡性腫瘤患 者的生存期和生活質(zhì)量。


附圖1為實(shí)施例一中指數(shù)生長(zhǎng)的乳腺癌和肺癌細(xì)胞在不同濃度虎杖苷作用下的 生長(zhǎng)情況；附圖2為實(shí)施例二中虎杖苷對(duì)肺癌細(xì)胞Α549細(xì)胞周期和凋亡的影響。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述 實(shí)施例一1. 1材料人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231及MCF-7，肺癌細(xì)胞株ΑΜ9、NCI-H1975,卵巢 癌細(xì)胞株SK0V3，肝癌細(xì)胞株SMMC-7721，宮頸癌細(xì)胞株Hela，白血病細(xì)胞株HL-60、K562， 鼻咽癌細(xì)胞株CNE-I購于美國細(xì)胞收藏中心(ATCC)，實(shí)驗(yàn)室保存和培養(yǎng)；D-MEM、RPMI1640 培養(yǎng)基干粉，小牛血清，胰酶粉末購自Gibco公司；標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量、SDS-PAGE上樣緩沖液、RIPA蛋白裂解液、TE電泳緩沖液、IOX轉(zhuǎn)膜液、30%Acry-BiS、TriS-Hcl、過硫酸銨(AP)、 SDS、四甲基乙二胺(TEMED)、碘化丙啶(PI)購自江蘇碧云天生物技術(shù)研究所；二甲基亞砜 (DMSO)、瓊脂糖和Tween-20來自上海高科技生物工程有限公司；bcl_2、bax, MMP-2、MMP-9 等抗體購自美國Santa Cruzs生物技術(shù)公司。RNase A和10 mg/mL proteinase K購自美 國 Sigma Aldrich 公司。1. 2細(xì)胞培養(yǎng)各細(xì)胞分別培養(yǎng)于含10%小牛血清，谷氨酸胺及100萬U/L青霉素 和鏈霉素的D-EME或RPMI1640培養(yǎng)基。細(xì)胞置于5%C02，37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每2_3天傳 代1次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。1. 3 MTT法在藥物處理前M小時(shí)細(xì)胞(6 X 104/mL)接種至96孔板中，每個(gè)濃度 設(shè)6個(gè)平行孔。加入不同濃度的虎杖苷繼續(xù)培養(yǎng)M，48或72小時(shí)。細(xì)胞培養(yǎng)液中加入20 mLMTT (5 mg/mL)繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。吸棄培養(yǎng)液，每孔加入150 mL DMS0，搖床輕柔振蕩10 分鐘。最后采用酶標(biāo)儀(A570 nm/A630 nm吸光值)檢測(cè)光密度，采用細(xì)胞存活率=加藥 組值/對(duì)照組值X 100%方式計(jì)算細(xì)胞存活率。采用上述方法，在指數(shù)生長(zhǎng)的乳腺癌MDA-MB-231和肺癌A549細(xì)胞培養(yǎng)中加入同 濃度的虎杖苷，處理24，48和72小時(shí)后完成MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)，重復(fù)三次不同實(shí)驗(yàn)，將結(jié) 果(平均值士誤差)繪制成圖，得圖1，圖1顯示不同濃度的虎杖苷對(duì)乳腺癌MDA-MB-231 和肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率，并顯現(xiàn)劑量-效應(yīng)和處理時(shí)間-效應(yīng)的關(guān)系。采用上述方法，計(jì)算虎杖苷對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的50%生長(zhǎng)抑制濃度(IC5tl)，將結(jié)果繪 制成表，得表1。表1、虎杖苷對(duì)不同腫瘤細(xì)胞50%生長(zhǎng)抑制濃度(IC5tl)
權(quán)利要求
1.虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
2.一種抗腫瘤藥物，其特征在于所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。
全文摘要
本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物制備領(lǐng)域，涉及虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的新應(yīng)用。本發(fā)明同時(shí)提供一種抗腫瘤藥物，所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷處理的乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、白血病等細(xì)胞的增殖均受到明顯的抑制，細(xì)胞周期分析則顯示細(xì)胞周期S期阻滯和細(xì)胞凋亡；低濃度虎杖苷還具有抑制腫瘤細(xì)胞遷移和粘附的作用。本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷在增加惡性腫瘤治療效果、降低腫瘤患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移發(fā)生率的同時(shí)，較目前臨床常用的化療藥物毒副作用明顯減低，從而提高惡性腫瘤患者的生存期和生活質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102058609SQ20101061599
公開日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者張玉松, 樊賽軍 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)