專利名稱：一種天山堇菜總黃酮提取純化工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及維吾爾藥成分純化方法，尤其涉及天山堇菜總黃酮提取純化工藝，屬
于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
天山堇菜.多年生草本，高4 7cm，全株光滑。根莖多粗短，主根圓柱狀或倒長(zhǎng)圓 錐形，長(zhǎng)2 5cm，黃白色或淡棕色，具少數(shù)須根。無地上莖和匍甸枝。葉基生，葉片卵狀或長(zhǎng) 圓狀卵形，比較厚，無端鈍，基部收縮成柄，與葉片近多長(zhǎng)，長(zhǎng)1 3cm，寬0. 5 0. 8cm，全緣 或具圓齒；托葉披針形成寬披外形，膜質(zhì)，白色，邊緣有短流蘇狀腺毛，3/4與葉柄合生?；?單生于花梗頂端，有長(zhǎng)梗，花梗與葉等長(zhǎng)或稍超出根生葉，花直徑O. 5 lcm，苞片位于花葶 中部，2片對(duì)生，線狀披針形，沿緣具腺，著生在中部以下；萼片5枚，長(zhǎng)圓狀卵形，先端漸失， 基部有帶狀附屬器，花期6 7月，果期7 8月。濕寒，味辛。天山堇菜具有生濕生寒，成 熟異常膽液質(zhì)，降低過盛的膽液質(zhì)和血液質(zhì)，清熱解毒，消炎退燒，潤(rùn)肺消腫，潤(rùn)喉止咳，通 利二便等功效。全草經(jīng)預(yù)試檢出含黃酮類，揮發(fā)油，氨基酸，生物堿，鞣質(zhì)和黏液質(zhì)等。分布 于我國(guó)新疆大山、昆侖山和帕米爾高原及云南、四川、西藏。國(guó)外中亞地區(qū)亦有分布。
—般的黃酮類化合物的提取方法主要采用有機(jī)溶劑萃取法、乙醇冷浸法，乙醇溶 液回流法。其中溶劑萃取法所用有機(jī)溶劑具有不同程度的毒性，且萃取過程中易乳化，也只 能得到總黃酮總量的50%左右；用醇提法，對(duì)乙醇的需求量過多，成本過高。近年來對(duì)黃酮 的純化方法多才用大孔樹脂，但大孔樹脂的重復(fù)利用度低，使用成本過高。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有提取與純化方法針對(duì)天山堇菜上存在的不足之處，本發(fā)明提供一種天山 堇菜中總黃酮的提取與純化方法，主要用用水做提取劑，節(jié)約溶劑，減壓回流提取，對(duì)活性 成分損害少。同時(shí)，用本發(fā)明方法的天山堇菜提取物用硅膠柱層析，產(chǎn)品中總黃酮質(zhì)量含量 可達(dá)50 %以上，且重現(xiàn)性好，硅膠可重復(fù)使用。
本發(fā)明所述的天山堇菜總黃酮提取純化工藝，其特征是提取純化步驟為
1)取粉碎的天山堇菜，加入藥材質(zhì)量10 30倍體積量的提取劑，先浸泡24小時(shí)， 然后減壓回流提取2 8小時(shí)，收集提取液，過濾； 2)將步驟1得到的過濾液濃縮到10mg/ml，用80-100目或100-200目或200-300 目或300-400目柱層析硅膠純化，裝柱，上樣，用體積分?jǐn)?shù)30% 60%乙醇溶液為洗脫劑洗 脫，洗脫量為1BV 4BV，洗脫速度為lBV/h 4BV/h ; 3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，5(TC真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品。
其優(yōu)選工藝為 以藥材質(zhì)量18倍體積量的蒸餾水為提取劑，減壓回流提取時(shí)間為4小時(shí)，選用 200-300目的硅膠層析，洗脫劑為體積分?jǐn)?shù)40 %乙醇溶液，洗脫用量為2BV，洗脫速度為 2BV。
其中步驟1所采用的提取劑為蒸餾水；步驟2所采用的裝柱方式為濕法裝柱，上
樣的方式為濕法上樣。選用硅膠目數(shù)過大洗脫阻力會(huì)大大增加，硅膠目數(shù)太小，吸附表面積
小，吸附效果不明顯。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn) 1.本發(fā)明提供的天山堇菜總黃酮提取純化工藝操作簡(jiǎn)單、快捷，更適合于工業(yè)生 產(chǎn)和應(yīng)用； 2.所選的硅膠具有吸附量大、解吸率大的功能，可重復(fù)利用；
3.以蒸餾水為溶劑，乙醇為洗脫劑，價(jià)廉、無毒。
具體實(shí)施例方式
為了更好理解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下通過具體的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例l 1)取粉碎的天山堇菜50g，加入藥材質(zhì)量15倍體積量的蒸餾水，先浸泡24小時(shí)， 然后減壓回流提取4小時(shí)，收集提取液，過濾； 2)將步驟1得到的過濾液濃縮到10mg/ml，干燥的200-300目硅膠層析純化，用體 積分?jǐn)?shù)30% 60%乙醇溶液為洗脫劑洗脫，濕法裝柱，濕法上樣，用體積分?jǐn)?shù)50%乙醇溶 液為洗脫劑洗脫，洗脫量為3BV，洗脫速度為2BV/h ; 3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，5(TC真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品2. 87g。
實(shí)施例2 1)取粉碎的天山堇菜50g，加入藥材質(zhì)量15倍體積量的蒸餾水，先浸泡24小時(shí)， 然后減壓回流提取4小時(shí)，收集提取液，過濾； 2)將步驟1得到的過濾液濃縮到10mg/ml，干燥的200-300目硅膠層析純化，用體 積分?jǐn)?shù)30% 60%乙醇溶液為洗脫劑洗脫，濕法裝柱，干法上樣，用體積分?jǐn)?shù)50%乙醇溶 液為洗脫劑洗脫，洗脫量為3BV，洗脫速度為2BV/h ; 3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，5(TC真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品2. 64g。
實(shí)施例3四種硅膠純化天山堇菜總黃酮 分別稱取已處理的80-100目、100-200目、200-300目和300-400目柱層析硅膠4 份(每份相當(dāng)于干硅膠10g)，濕法裝柱，濕法上樣5ml提取濃縮液(10mg/ml)，用體積分?jǐn)?shù) 40%乙醇溶液為洗脫劑洗脫，洗脫量為2BV，洗脫速度為2BV/h，收集洗脫液，測(cè)其吸光度， 計(jì)算總黃酮純度分別為40. 3%、47. 7%、53. 8%、50. 6%，故200-300目的純化效果不錯(cuò)。
實(shí)施例4洗脫劑濃度對(duì)總黃酮回收率的影響 稱取已處理的200-300目柱層析硅膠4份(每份相當(dāng)于干樹脂10g)，濕法裝柱， 濕法上樣5ml提取濃縮液(10mg/ml)，分別用體積分?jǐn)?shù)為30 % 、40% 、50 % 、60 %乙醇溶液 為洗脫劑洗脫，洗脫量為3BV，洗脫速度為3BV/h，收集洗脫液，測(cè)定黃酮的吸光度并計(jì)算總 黃酮的回收率分別為92. 03 % ， 94. 46 % ， 94. 59% ， 96. 67 % ，總黃酮的純度分別為53. 6% ， 58. 2 % ， 57. 8 % ， 54. 1 % ， 56. 8 % ，回收率相近，用40 %乙醇為洗脫劑所得總黃酮的純度高， 且節(jié)省洗脫劑，宜選乙醇溶液濃度為40% 。
實(shí)施例5洗脫劑用量對(duì)純化的影響 稱取已處理的100-200目柱層析硅膠4份(每份相當(dāng)于干樹脂10g)，濕法裝柱，濕法上樣5ml提取濃縮液(10mg/ml)，用體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇溶液為洗脫劑洗脫，洗脫用量分 別為1BV、2BV、3BV、4BV，流速為2BV/h，，收集洗脫液，測(cè)吸光度計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果表明 總黃酮的回收率分別為90.8%、92.5%、93. 1 % 、93. 8% 。總黃酮的回收率接近，洗脫用量過 多會(huì)增加洗脫時(shí)間，同時(shí)造成一定的浪費(fèi)，故選擇2BV的40%乙醇進(jìn)行洗脫。
實(shí)施例6洗脫劑流速對(duì)純化的影響 稱取已處理的100-200目柱層析硅膠4份(每份相當(dāng)于干樹脂10g)，濕法裝柱， 濕法上樣5ml提取濃縮液(lOmg/ml)，用體積分?jǐn)?shù)為40 %乙醇溶液為洗脫劑洗脫，洗脫 量為2BV，流速分別為lBV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h，純化后總黃酮回收率分別為92. 85%， 91.98%，91.09%，87.87%。洗脫劑流速lBV/h比2BV/h的回收率高，但相差不大，為了提 高效率，洗脫劑流速選擇2BV/h。
權(quán)利要求
一種天山堇菜總黃酮提取純化工藝，其特征是提取純化步驟為1)取粉碎的天山堇菜，加入藥材質(zhì)量10～30倍體積量的提取劑，先浸泡24小時(shí)，然后減壓回流提取2～8小時(shí)，收集提取液，過濾；2)將步驟1得到的過濾液濃縮到10mg/ml，用80-100目或100-200目或200-300目或300-400目柱層析硅膠純化，裝柱，上樣，用體積分?jǐn)?shù)30％～60％乙醇溶液為洗脫劑洗脫，洗脫量為1BV～4BV，洗脫速度為1BV/h～4BV/h；3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，50℃真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種天山堇菜總黃酮提取純化步驟，其特征是步驟1所采用 的提取劑為蒸餾水。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種天山堇菜總黃酮提取純化步驟，其特征是步驟2所采用 的裝柱方式為濕法裝柱，上樣的方式為濕法上樣。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種維吾爾中草藥天山堇菜總黃酮成分的提取純化工藝，用水做提取劑，節(jié)約溶劑，減壓回流提取，對(duì)活性成分損害少。同時(shí)，用本發(fā)明方法的天山堇菜提取物用硅膠柱層析，產(chǎn)品中總黃酮質(zhì)量含量可達(dá)50％以上，且重現(xiàn)性好，硅膠可重復(fù)使用。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101757298SQ20091023009
公開日2010年6月30日 申請(qǐng)日期2009年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日
發(fā)明者段洪東, 王世瀟 申請(qǐng)人:段洪東