專利名稱：人干擾素在制備治療或預防hpv相關疾病的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，特別涉及人干擾素在制備治療HPV相關疾病的藥物中的用途。
背景技術：
宮頸糜爛是婦科臨床最常見的一種疾病，是慢性宮頸炎的一種常見病理改變。表現(xiàn)為宮頸外口處的宮頸陰道部外觀呈細顆粒狀的紅色區(qū)。近年國內(nèi)外研究表明人乳頭瘤病毒(HPV)感染與宮頸糜爛的發(fā)病有關，而宮頸HPV感染是宮頸癌的主要致病原因，因此，合并HPV感染的宮頸糜爛有進展為宮頸癌的可能，與宮頸癌的發(fā)病密切相關。臨床研究表明，宮頸糜爛患者HPV感染與宮頸局部病變輕重，是否合并其他感染及患者的年齡、職業(yè)、生育史等諸多因素有關。傳統(tǒng)的宮頸糜爛的治療主要以物理療法為主，將宮頸糜爛面柱狀上皮破壞，使其脫落壞死而被新生的復層鱗狀上皮所覆蓋，治愈宮頸糜爛。而對于合并有病毒感染的宮頸糜爛來說，目前較新的治療方法為局部應用抗病毒藥物如干擾素等進行治療，取得了一定的治療效果。干擾素通過其特異性的抗病毒作用，有效清除宮頸局部病毒感染的同時，提高機體免疫功能，促進宮頸糜爛的愈合。宮頸癌早期及宮頸不典型增生臨床上均表現(xiàn)為慢性宮頸炎的改變，持續(xù)性宮頸HPV感染最終可能導致宮頸癌的發(fā)生。因此，對合并HPV感染的宮頸糜爛進行早期有效的治療，可預防病變的進一步發(fā)展，使病變在早期階段即得到治療，可能在預防其向宮頸癌的進一步轉變方面起作用。宮頸癌(cervical cancer)是最常見的婦科惡性腫瘤之一,在全球婦女癌癥死亡率中位居第二，嚴重威脅著婦女的健康和生活質量。其發(fā)生發(fā)展已呈現(xiàn)出年輕化的趨勢，每年約有50萬新發(fā)病例，其中80%在發(fā)展中國家，由于地區(qū)間的不同宮頸癌發(fā)病有很大差異，我國約占世界1/3，嚴重危害著我國婦女的健康與生命安全。在近年來的研究中發(fā)現(xiàn)，HPV(人乳頭瘤病毒)與宮頸炎的發(fā)生關系密切，尤其一些高危型的HPV是引起宮頸癌的重要因素，在宮頸癌的活檢組織中幾乎都能找到HPV感染。我國作為一個發(fā)展中國家是子宮頸癌的高發(fā)地區(qū)，每年平均有132300例新發(fā)病例，總發(fā)病率為0.27%。。大量流行病學調(diào)查和分子生物學研究表明，人乳頭瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)，尤其是高危型HPV(high-risk HPV，hr_HPV)生殖道持續(xù)感染是引發(fā)子宮頸癌及的CIN重要病原學因素。據(jù)統(tǒng)計，在所有子宮頸癌的病例中超過99%可被檢測到高危型HPV DNA。HPV感染后從正常宮頸細胞向宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的轉化是多因素參與、漸進發(fā)展的過程，高危型人乳頭瘤病毒持續(xù)感染是宮頸細胞惡性轉化中的必要因素。大量流行病學和分子生物學研究資料表明，HPV與子宮頸癌及癌前病變密切相關，尤其是高危型HPV(high-risk HPV, hr-HPV)生殖道持續(xù)感染是引發(fā)子宮頸癌及CIN的重要病原學因素。大部分HPV感染無臨床癥狀或亞臨床感染，但可致嚴重后果，HPV感染預示宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)的存在。也有研究發(fā)現(xiàn)，持續(xù)攜帶HPV強烈提示感染者處于繼發(fā)癌前病變的高度危險中。據(jù)統(tǒng)計，在所有子宮頸癌的病例中超過99%可被檢測到高危型HPV DNA。研究表明，伴有HPV感染的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)進一步可發(fā)展為宮頸癌。
人類乳頭瘤病毒(HPV)屬乳頭瘤病毒家族，是特殊的DNA病毒，具有將正常細胞永生化的能力及高度種屬特異性和特殊嗜上皮性，病毒DNA以整合形成存在于宿主細胞中。HPV是一種無包膜的雙鏈閉環(huán)小分子DNA病毒,屬乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬。其感染具有種屬特異性，HPV與多種疾病密切相關，是迄今已被肯定的DNA腫瘤病毒之一，HPV主要感染人的皮膚或粘膜上皮細胞，引發(fā)感染部位的良、惡性病變。目前已知HPV6、11、42、43、44等與性傳播疣或尖銳濕疣有關，屬低危型，一般不誘發(fā)癌變；而HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68屬高危型，與子宮頸癌及子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)的發(fā)生相關。分子生物學研究結果顯示，90%以上宮頸癌伴有HPV感染，主要為HPV16、18亞型。由于從HPV感染一宮頸上皮內(nèi)瘤變-宮頸癌，需要一個較為漫長的過程，一般為10年時間，且宮頸上皮內(nèi)瘤變是可以逆轉的病變，而早期宮頸癌5年治愈率高達90%。因此，積極防治HPV感染，特別是高危型HPV感染對預防和降低子宮頸癌的發(fā)生具有重要的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題為提供人干擾素在制備治療HPV相關疾病的藥物中的用途。優(yōu)選地，所述人干擾素選自人干擾素α、人干擾素β和人干擾素Y。優(yōu)選地，所述人干擾素α選自人干擾素a lb、人干擾素a 2a、人干擾素a 2b和所述三種蛋白的衍生物及類似物。 優(yōu)選地，所述人干擾素為天然人干擾素或重組人干擾素。優(yōu)選地，所述HPV相關疾病為單純型HPV感染。在本發(fā)明的具體實施方式
中，針對單純型HPV感染，研究本發(fā)明所述復方制劑組和對照組在第6個月時轉陰率之間的差異，結果顯示單純型HPV感染在6個月治療后，復方制劑組的總有效率和轉陰率明顯高于對照組?？傆行?FAS集，復方制劑組為69. 81%,對照組為57. 89%，復方制劑組大于對照組；而PPS集對照組大于復方制劑組，復方制劑組為77. 62%，對照組為62. 26%，復方制劑組和對照組有明顯統(tǒng)計學差異。轉陰率FAS集，復方制劑組為69. 18 %，對照組為52. 63 % ；PPS集，復方制劑組為76. 92 %，對照組為56. 60 %。可見本發(fā)明所述復方制劑組對單純型HPV感染有顯著的治療效果。優(yōu)選地，所述HPV相關疾病為高危型HPV生殖道持續(xù)感染。更優(yōu)選地，所述HPV相關疾病為宮頸糜爛、尖銳濕疣、生殖器皰疹或口唇皰疹、帶狀皰疫、皮膚癌、宮頸癌、扁平撫、宮頸上皮細胞瘤變。在本發(fā)明的具體實施方式
中，所述藥物的制備方法如下步驟I :在人干擾素原液中加入人血白蛋白得到混合溶液，使白蛋白終濃度為1% -5%，加入與混合溶液等體積的穩(wěn)定劑混勻，水浴加熱O. 5-3min，冷凍干燥成粉末；所述穩(wěn)定劑選自SDS，尿素和巰基乙醇的混合物，甘氨酸，肝素，海藻糖，維生素C或還原型谷胱甘肽。步驟2 :稱取羧甲基纖維素鈉50-200g、甘油500_1500ml、山梨酸10_20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至60-100°C混勻，待基質冷卻至10-40°c時，調(diào)pH至4. 0-9. 5，備用;步驟3 :將步驟I人干擾素粉末加至步驟2制備的基質混合均勻，分裝即得。優(yōu)選地，所述藥物的制備方法中每IOOOg基質中加入干擾素粉末
I.OXlO6-L OXlO9 國際單位。優(yōu)選地，所述人干擾素為人干擾素a 2b。 本發(fā)明實施例制備的制劑為人干擾素，具有抗病毒，抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性，增強機體抗病毒能力，同時還具有消除DNA結構損傷的功能，從而導致細胞遺傳機制的恢復，使損傷修復。它通過激活靶細胞的抗病毒基因，產(chǎn)生抗病毒蛋白，抑制病毒DNA的復制和mRNA的轉錄，從而起到抑制病毒的作用。而且干擾素尚可激活自然殺傷細胞、巨噬細胞，調(diào)控主要組織相容性抗原的表達。臨床試驗顯示，本發(fā)明制得的藥物制劑治療HPV感染有一定療效，而對高危型及單純型HPV病毒感染有顯著的治療效果。與現(xiàn)有的注射用干擾素相比，本發(fā)明所述制劑具有無痛、方便、有效、無副作用等優(yōu)點，其透皮吸收性好，能達到局部抗病毒有效抑制細胞増殖的作用；另外，其穩(wěn)定性佳，常溫保存3個月效價幾乎沒有變化，具有良好的臨床應用前景。本發(fā)明對于防治HPV感染，特別是高危型HPV感染，預防和降低子宮頸癌的發(fā)生具有重要的臨床意義。
具體實施例方式本發(fā)明公開了人干擾素在制備治療HPV相關疾病的藥物中的用途，本領域技術人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進エ藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的應用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技木。為了使本領域的技術人員更好地理解本發(fā)明的技術方案，下面結合具體實施例對本發(fā)明作進ー步的詳細說明。實施例I、制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據(jù)人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為5% (W/V)，然后根據(jù)加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩(wěn)定劑SDS，混勻，水浴加熱O. 5-3min，冷卻，分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備精確稱取羧甲基纖維素鈉200g、甘油500ml、山梨酸20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至100°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至40°C時，調(diào)pH至7. 5，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO9國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例2、制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據(jù)人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為1% (W/V)，然后根據(jù)加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩(wěn)定劑還原型谷胱甘肽，混勻，水浴加熱O. 5min，冷卻，分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備 精確稱取羧甲基纖維素鈉50g、甘油1500ml、山梨酸IOg混合后，加注射用水至IOOOOg,加熱至60°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至10°C時，調(diào)pH至4. 0，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO6國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例3制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據(jù)人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為3% (W/V)，然后根據(jù)加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩(wěn)定劑維生素C，混勻，水浴加熱2min,冷卻，分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備精確稱取羧甲基纖維素鈉100g、甘油750ml、山梨酸15g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至80°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至30°C時，調(diào)pH至9. 5，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO8國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例4制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據(jù)人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為2% (W/V)，然后根據(jù)加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩(wěn)定劑肝素，混勻，水浴加熱
2.5min,冷卻,分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備精確稱取羧甲基纖維素鈉80g、甘油600ml、山梨酸18g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至90°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至20°C時，調(diào)pH至6. 0，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO7國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例5、HPV轉陰率臨床研究I.試驗總體設計本試驗采用多中心、隨機、開放、平行、空白對照設計。試驗組(實施例I的制劑組)和對照組(安慰劑組)入組患者的比例為2 I。計劃共入選432例病例，其中試驗組為288例，對照組為144例。實施例I制備的試驗藥物的用法為一次一支，隔日用藥一次，連續(xù)使用10次為I個療程。2.治療周期的確定試驗目的主要是探索人干擾素對于HPV轉陰率的影響，根據(jù)文獻報道HPV病毒的復制周期是8-12周，因此用藥周期為3個月。
3.樣本量估算3. I計劃共入選432例病例，其中試驗組為288例，對照組為144例。研究實施步驟按照下表進行。
權利要求
1.人干擾素在制備治療或預防HPV相關疾病的藥物中的用途。
2.根據(jù)權利要求I所述的用途，其特征在于，所述人干擾素選自人干擾素α、人干擾素β和人干擾素Y。
3.根據(jù)權利要求2所述的用途，其特征在于，所述人干擾素α選自人干擾素alb、人干擾素a 2a、人干擾素a 2b和所述三種蛋白的衍生物及類似物。
4.根據(jù)權利要求I所述的用途，其特征在于，所述人干擾素為天然人干擾素或重組人干擾素。
5.根據(jù)權利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相關疾病為單純型HPV感染。
6.根據(jù)權利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相關疾病為高危型HPV生殖道持續(xù)感染。
7.根據(jù)權利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相關疾病為宮頸糜爛、尖銳濕疣、生殖器皰疹或口唇皰疹、帶狀皰疹、皮膚癌、宮頸癌、扁平疣、宮頸上皮細胞瘤變。
8.根據(jù)權利要求I所述的用途，其特征在于，所述藥物的制備方法如下 步驟I :在人干擾素原液中加入人血白蛋白得到混合溶液，使白蛋白終濃度為1% -5%,加入與混合溶液等體積的穩(wěn)定劑混勻，水浴加熱O. 5-3min，冷凍干燥成粉末； 步驟2 :稱取羧甲基纖維素鈉50-200g、甘油500-1500ml、山梨酸10_20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至60-100°C混勻，待基質冷卻至10-40°C時，調(diào)pH至4. 0-9. 5，備用； 步驟3 :將步驟I人干擾素粉末加至步驟2制備的基質混合均勻，分裝即得。
9.根據(jù)權利要求I所述的用途，其特征在于，所述藥物的制備方法中每IOOOg基質中加入干擾素粉末I. OX IO6-L OX IO9國際單位。
10.根據(jù)權利要求8或9所述的用途，其特征在于，所述人干擾素為人干擾素a2b。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，公開了人干擾素在制備治療或預防HPV相關疾病的藥物中的用途。臨床試驗顯示，人干擾素治療HPV感染有療效，尤其是單純型HPV感染和高危型HPV生殖道持續(xù)感染有顯著的治療效果。本發(fā)明對于防治HPV感染，特別是單純型HPV感染，預防和降低宮頸糜爛、宮頸癌的發(fā)生具有重要意義，具有良好的臨床應用前景。
文檔編號A61P17/12GK102614497SQ20121010494
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月11日 優(yōu)先權日2012年4月11日
發(fā)明者凌娟, 吳艷, 張國輝, 戴向榮, 李小羿 申請人:兆科藥業(yè)(合肥)有限公司