專利名稱：梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種梓醇的新用途，具體是梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應用，以及在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
缺血性腦卒中后遺癥是指患者急性腦梗塞發(fā)作經(jīng)治療存活后而遺留不同程度的偏癱、失語、意識輕度障礙等局灶性癥狀。腦卒中是危害人類生命和健康的常見病和多發(fā)病，全球每年約有1500萬腦卒中患者，其中缺血性腦卒中占有相當大的比例(75%-85%)。而現(xiàn)在認為，缺血性腦卒中發(fā)生過程中，實質(zhì)上是缺血再灌注造成的損傷。腦缺血再灌注損傷病理生理機制包括許多方面，其中氧化損傷和過度的炎癥反應不僅影響局部的血液供
應，而且可以直接破壞組織結(jié)構(gòu)。大量實驗研究表明，缺血后再灌注早期產(chǎn)生的黏附因子和細胞因子構(gòu)成了缺血性損傷向炎癥性損傷轉(zhuǎn)變的基礎，大腦炎癥系統(tǒng)的激活，促炎因子與抑炎因子之間的平衡失調(diào)，促進了炎癥過程的發(fā)生發(fā)展，可導致神經(jīng)細胞進一步損害；并可使自由基的連鎖反應激化，破壞組織結(jié)構(gòu)而加重組織損傷，引起遲發(fā)性神經(jīng)功能損害。腦缺血再灌注早期，產(chǎn)生大量自由基，遠遠超過機體的清除能力，如果氧自由基得不到及時清除，將引起脂質(zhì)過氧化反應，形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物。SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶，可清除自由基，保護受損細胞，常作為清除氧自由基能力的主要指標。丙二醛是氧自由基攻擊脂質(zhì)導致過氧化的代謝產(chǎn)物，其含量反映體內(nèi)氧自由基的生產(chǎn)水平及對組織的損傷程度。在既往報道的大量缺血性腦卒中病例中，僅少數(shù)患者完全恢復，大多數(shù)患者殘留有不同程度的神經(jīng)功能障礙即后遺癥狀，主要表現(xiàn)為肢體運動感覺功能障礙。缺血性腦卒中后遺癥狀可伴隨患者持續(xù)加重直到死亡，給患者帶來了很大的痛苦，也給家庭造成了很大的經(jīng)濟負擔。但是，迄今為止，缺血性腦卒中后遺癥尚無特殊的良效藥物治療，相對而言，中藥具有毒副作用小，適合長期服用，成本低的優(yōu)點。因此，發(fā)掘中醫(yī)藥寶庫，創(chuàng)新缺血性腦卒中后遺癥治療理論，尋找治療缺血性腦卒中后遺癥更為有效的中藥制劑，已經(jīng)倍受國內(nèi)外的關(guān)注。
HQ H
梓醇化學結(jié)構(gòu)式梓醇是一種環(huán)烯醚萜單糖苷類化合物，分子式C15H22010。梓醇廣泛分布于合瓣花亞綱、馬錢科醉魚草屬、玄參科泡梧屬及地黃屬、柴葳科樟屬、列當科肉蓯蓉屬、車前科車前屬等植物中，來源及其豐富。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種梓醇的新用途，即梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應用。本發(fā)明所說的梓醇的新用途，是梓醇在制備改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用，梓醇具有改善缺血性腦卒中再灌注損傷能量代謝障礙的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒 中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用，梓醇具有抗缺血性腦卒中再灌注損傷氧化應激的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用，梓醇具有抑制缺血性腦卒中再灌注損傷炎癥反應的作用。根據(jù)上述的梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物、以及改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用，其特征是梓醇在藥物中的含量為O. 1-99%。本發(fā)明在現(xiàn)有的腦缺血再灌注損傷認識的基礎上，采用線栓法腦缺血再灌注損傷大鼠模型，觀察梓醇對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)缺損功能的影響、對腦缺血損傷大鼠腦能量代謝紊亂的影響、對腦缺血損傷大鼠腦皮層氧化應激的影響，以及對腦缺血損傷大鼠腦皮層炎癥因子及其轉(zhuǎn)錄因子的影響。結(jié)果表明(I)對神經(jīng)功能缺損癥狀的影響梓醇給藥組可明顯的改善神經(jīng)缺損癥狀，明顯改善橫木行走能力、提高抓握力量(同模型組相比較，P < O. 05，P < O. 01)，且作用明顯好于陽性對照藥天保寧，表明梓醇對腦缺血再灌注損傷大鼠恢復早期具有神經(jīng)保護作用，能明顯的改善腦缺血神經(jīng)功能缺損癥狀，促進受損的肢體運動感覺功能恢復。(2)對能量代謝障礙的影響梓醇組能顯著降低腦組織中乳酸的含量，明顯提高丙酮酸、Na+, K+-ATPase和Ca2+，Mg2+_ATPase的含量(同模型組相比較，P < O. 05，p
<0.01)，上述作用與陽性對照藥天保寧，表明梓醇可以促進腦缺血再灌注損傷大鼠恢復早期能量代謝障礙的改善，增強能量及改善乳酸酸中毒癥狀。(3)對氧化應激的影響梓醇組能顯著提高腦皮質(zhì)中SOD活力、減少MDA含量(同模型組相比較，P < O. 05，P < O. 01)，上述作用與陽性對照藥丁苯酞相似，表明梓醇可以促進腦缺血再灌注損傷大鼠恢復早期腦皮質(zhì)SOD的活性，減少脂質(zhì)過氧化，具有抗氧化應激作用。
具體實施例方式實施例I對神經(jīng)功能缺損癥狀的影響
1.1 目的采用線栓法腦缺血再灌注損傷大鼠模型，觀察梓醇對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)缺損功能的影響，以確定其是否具有促進缺血性腦卒中后遺癥狀恢復的作用。I. 2試驗材料I. 2. I 動物健康SD雄性大鼠，體重240_280g。I. 2. 2 藥物I. 2. 2. I 受試藥 梓醇，白色或無色粉末，稱O. 3g粉末，用去離子水溶至100ml，灌胃給藥lml/100g體重。I. 2. 2. 2 陽性藥天保寧浙江康恩貝制藥股份有限公司生產(chǎn)，臨床每日用量為6片。配制方法取片劑7片，研磨成粉后用去離子水溶解定溶至100ml，灌胃給藥lml/100g體重。丁苯酞石藥集團恩必普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，臨床每日用量為O. 6g。配制方法用注射器抽取7粒膠囊內(nèi)容物，用食用油稀釋成20ml，灌胃給藥O. 2ml/100g體重。I. 2. 3主要實驗儀器YLS-12A大小鼠抓力測試儀，山東科學技術(shù)設備站生產(chǎn)。I. 3方法與結(jié)果I. 3. I大鼠腦缺血再灌注(MCAO)模型的制備參照文獻方法制作MCAO模型。大鼠用10%水合氯醛O. 35g/kg腹腔注射麻醉，分離右側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈及頸外動脈，于頸外動脈與頸內(nèi)動脈分叉處作一切口，從切口處插入頭端成圓球形的光滑釣魚尼龍線，插入深度18-19mm左右，實現(xiàn)大腦中動脈阻塞導致腦缺血。結(jié)扎切口處，固定尼龍線，逐層縫合肌肉和皮膚。2h后將尼龍線頭端輕輕拔出到近切口處，實現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組大鼠除不栓塞大腦中動脈外，余處理同缺血組。I. 3. 2分組與給藥將神經(jīng)癥狀1-3分的大鼠分成模型組；梓醇15mg/kg,30mg/kg,60mg/kg給藥組；天保寧O. 7片/kg陽性對照組；依達拉奉7mg/kg陽性對照組。以及假手術(shù)組。缺血后3d至14d灌胃給藥，依達拉奉組腹腔注射給藥，假手術(shù)組與模型組給予等量食用油灌胃和相應生理鹽水腹腔注射，每天一次。I. 3. 3 方法I. 3. 3. I橫木行走實驗橫木行走實驗評價運動的協(xié)調(diào)和整合缺損。橫木寬2. Ocm,長120cm,厚I. Ocm,距地面80cm水平懸空放置，橫木一端連接一個暗盒，用噪音刺激大鼠通過橫木走進暗盒。評分標準不能呆在橫木上，O分；能呆在橫木上但不能動，I分；試圖通過，但從橫木上摔下，2分；走上橫木，但損傷的后肢滑落次數(shù)超過50%，3分；超過I次但不到50%，4分；僅滑落I次，5分；順利通過，6分。術(shù)前訓練5d，每天一次，讓所有大鼠評到6分為止。以缺血3、6、9、12、14d為觀察時間點進行檢測。I. 3. 3. 2抓握力量測試抓握力量測試評價抓握力量的大小。大鼠兩前肢抓住拉力測試儀的拉力橫桿，測試者左手先固定拉力板，右手向后拉住鼠尾，松開左手，右手加力向后拉拽大鼠身體，大鼠為了不從橫桿滑脫會抓握橫桿不放，直至滑脫，讀取使大鼠滑脫的最大拉力值，每只測2次，取最大值。以缺血3、6、9、12、14d為觀察時間點進行檢測。I. 4.結(jié)果見表 1_1、1_2、1_3，表 1_4、1_5、1_6。表1-1梓醇對MCAO模型大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響(^ ±s)
組另|J~ ~木后3天 木后6夫 η 木后9天 η 木后12關(guān) η 木居14天假手術(shù) 9 0±0**9 0±0 林 9 0±0林9 0±0**9 0±0**
模型 11 1.54±0.82 10 1.20±0.42 10 1.30±0.95 9 1.00±0.00 8 1.00±0.00梓醇 9 1.44土0.73 9 I. 11±0.33 9 0·44±0·53* 9 0.44±0.53林 9 0.44±0.53林天保寧 9 1·44±0.73 9 1.22±0.44 9 0.67±0· 50* 8 0.63±0.52* 8 0.63±0.52*注與模型組比較*p < O. 05，林p < O. 01。從表1-1可見，假手術(shù)組大鼠沒有神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，各缺血組大鼠神經(jīng)癥狀表現(xiàn)明顯，但隨著時間的延長而逐漸的自行恢復，而給藥組大鼠的神經(jīng)缺損的恢復速度明顯快于模型組，但從術(shù)后9天開始其恢復速度逐漸減慢，在觀察期內(nèi)仍然有部分大鼠未能完全恢復到正常水平。術(shù)后9、12、14d各給藥組與模型組比較均具有顯著性差異。表1-2梓醇對MCAO模型大鼠橫木行走能力的影響(;士s)
組別 η術(shù)后3天 η 術(shù)后6天 η 術(shù)后9天 n 術(shù)后12天 η術(shù)后14天手術(shù) 9 6 土 O**9 6 土 O**9 6 土 O**9 6 士 O**9 6 士 O**
模型 11 2.00±1.48 10 3·00±1.56 10 3·00±2.05 9 3.33±1.94 8 3.88±1.73梓醇 9 2.33±2, 18 9 3·67±1.66 9 4·56±1.81* 9 4.89±1.76* 9 5.22土 1.20*天保寧 9 2.33±2.40 9 3.67±1.50 9 4. 11±1.62 8 5. 13±0.84* 8 5.25±0·89*注與模型組比較*ρ < O. 05，**ρ < O. 01。從表1-2可見，假手術(shù)組大鼠橫木行走能力沒有變化，各缺血組大鼠橫木行走能力隨著時間的延長而明顯改善，而給藥組大鼠的橫木行走能力的恢復速度明顯快于模型組，但在觀察期內(nèi)仍然有個別大鼠未完全恢復到正常水平。在術(shù)后9、12、14山梓醇301^/kg、60mg/kg組，均能夠促進大鼠行走能力的恢復，與模型組比較行走評分顯著提高，(P
<O. 05);天保寧組分別在術(shù)后9d和12d促進大鼠行走能力的恢復，與模型組比較具有顯著性差異，且在術(shù)后14d均表現(xiàn)出明顯的促進橫木行走能力恢復的作用。表1-3梓醇對MCAO模型大鼠抓握力量的影響(—x 士s)
組別 η術(shù)后3天_η 術(shù)后6夭 η 術(shù)后9天 η 術(shù)后12天 η 術(shù)后14天
假手術(shù) 9 699. 8±63. 7** 9 780. 4±71. I** 9 750. 0±86. 3** 9 840. 9±87· 8* 9 960. 8±84. O**模型 11 550. 5± 108. 9 10 608.9 土 88.0 10 555. 6± 155. 3 9 692. 3 土 161. 5 8 718. 1±92. O梓醇 9 552.3 土 118.8 9 642.7±45.8 9 668. 3± 102. 2* 9 786. 2 土 87. O 9 831. I ± 123. I*天保寧 9 531.6±83.4 9 647, 2土 105. 7 9 703·7±107. I* 8 786. 8±108. 5 8 810.4±98. 9*注與模型組比較*p < O. 05，林P < O. 01。從表1-3可見，腦缺血后大鼠前肢的抓握力量顯著降低，缺血9d，各給藥組與模型組比較，均能明顯增加大鼠的前肢抓握力量，P < O. 05，P < O. 01 ;缺血14d，與模型組比較，梓醇30mg/kg、60mg/kg組,天保寧組能明顯增加大鼠的前肢抓握力量，p < O. 05。表1-4梓醇對MCAO模型大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響(;±s)
權(quán)利要求
1.梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述，梓醇在制備改善缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述，梓醇具有改善缺血性腦卒中再灌注損傷能量代謝障礙的作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述，梓醇具有抗缺血性腦卒中再灌注損傷氧化應激的作用。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的梓醇新用途，其特征是梓醇在藥物中的含量為10-99%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種梓醇的新用途，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。具體是梓醇在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷藥物中的應用，以及在制備治療缺血性腦卒中再灌注損傷神經(jīng)功能缺損癥狀藥物中的應用。
文檔編號A61P9/10GK102885838SQ20111020281
公開日2013年1月23日 申請日期2011年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月20日
發(fā)明者玄振玉, 黃孝春, 蔡垠, 魏惠華, 陳葉明 申請人:蘇州玉森新藥開發(fā)有限公司