專利名稱：：一種液態(tài)中藥制劑的中間體及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含水蛭單味藥材制劑的中間體及其制備方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：一、水蛭研究進(jìn)展水蛭功效為破血、逐瘀、消癥?？捎糜诎Y瘕痞塊，血瘀經(jīng)閉，跌打損傷，血小板增多癥，及腦出血。水蛭始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》"主逐惡血，瘀血，月閉，破血瘕積聚，無(wú)子，利水道。"《本草綱目》"咸走血，苦勝血。水蛭之咸苦，以除蓄血，乃肝經(jīng)血分藥，故能通肝經(jīng)聚血。"水蛭屬高度特化的環(huán)節(jié)動(dòng)物，目前已知全世界共有300多種，我國(guó)分布有62種[2]。水蛭主含蛋白質(zhì)，此外含有17種氨基酸，包括人體必需的8種氨基酸，還含有Zn、Mn、Fe、Co、Cr、Se、Mo、Ni等14種元素。不同種吸血習(xí)性不同。日本醫(yī)蛭、菲牛蛭、歐洲醫(yī)蛭屬吸血蛭類；而寬體金線蛭、尖細(xì)金線蛭為非吸血蛭類。不同種水蛭中活性成分不同，大致可分為兩類一類直接作用于凝血系統(tǒng)成分，包括凝血酶抑制劑以及其它抑制血液凝固的物質(zhì)，是水蛭活血化瘀的物質(zhì)基礎(chǔ)；二是其它蛋白酶抑制劑等活性成分，如胰蛋白酶抑制劑、糜蛋白酶抑制劑、粒細(xì)胞彈性蛋白酶和組織蛋白酶G抑制劑。水蛭中的主要有效成分為蛋白、多肽類成分。由于蛋白多肽進(jìn)入體內(nèi)后可以被酶迅速代謝降解，生物半衰期短，一般具有較強(qiáng)的親水性，不易透過生理屏障，表觀分布容積小，加上胃腸道和肝臟的首過效應(yīng)等原因，其生物利用度通常較低，特別是口服給藥，其生物利用度更低，一般只有10%左右[5]。水蛭水煎液的醇溶部分可直接阻斷凝血反應(yīng)的最后步驟——纖維蛋白原(Fbg)與凝血酶的相互作用；非醇溶部分可直接水解纖維蛋白(Fb)，并且對(duì)Fbg和Fb的水解有相對(duì)的選擇性。這表現(xiàn)在一方面，它們對(duì)Fbg和Fb的水解作用明顯強(qiáng)于對(duì)牛血清白蛋白(BSA)的作用；另一方面，它們對(duì)Fbg和Fb的a鏈的水解作用強(qiáng)于對(duì)e鏈和Y鏈的作用。10%水蛭粉混懸液口服給予病理"血瘀"小鼠，能使其全血、血漿及全血還原粘度明顯降低。水蛭的乙酸乙酯提取物能使大鼠的凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)和活化的部分凝血酶時(shí)間(APTT)顯著延長(zhǎng)；正己垸部分和水溶液部分能使大鼠的PT顯著延長(zhǎng)；而正丁醇部分能使大鼠的ATPP顯著延長(zhǎng)。由于水蛭的有效部位分布較廣，以單獨(dú)的提取溶劑提取，不能保證提取出所有的有效成分，而且提取后有效成分的提取率較低，大量的有效成分被水解、破壞，生物利用度低。故水蛭藥材較適宜直接粉碎入制劑，既可保證有效成分不損失，又不會(huì)使某些成分水解、破壞，而且成品率高，中間過程無(wú)損失。二、超微粉碎研究進(jìn)展1、超微粉碎原理及意義超微粉碎技術(shù)是使物料微細(xì)及超細(xì)化的機(jī)械加工方法，是提供超微粉體的重要手段之一。近20年來(lái)，該項(xiàng)技術(shù)獲得迅速發(fā)展，國(guó)外已廣泛應(yīng)用于冶金、陶瓷、紡織及航空航天等工業(yè)領(lǐng)域。中藥行業(yè)引入微粉概念始于20世紀(jì)90年代末，雖然起步較晚，但由于粉碎是中藥生產(chǎn)及應(yīng)用中的基本加工技術(shù)，因此超微粉碎也愈來(lái)愈引起人們的關(guān)注，超微粉碎技術(shù)已顯露出特有的優(yōu)勢(shì)和廣闊的應(yīng)用前景。在中藥材的粉碎過程中，藥材受到強(qiáng)烈的正向擠壓力和切向剪切力的作用，運(yùn)用高速、高能量進(jìn)行粉碎，細(xì)胞被擠壓、剪切，細(xì)胞壁被撕裂、斷開，細(xì)胞被破碎成碎片或被壓破，所得到的粉末粒徑一般達(dá)300目以上、中心粒徑達(dá)1025um，細(xì)胞破壁率達(dá)95%以上，"破壁"的藥粉其所含化學(xué)成分直接暴露出來(lái)，與傳統(tǒng)的中藥藥粉(化學(xué)成分存在于完整的細(xì)胞壁內(nèi))相比，產(chǎn)生了"質(zhì)"的變化，初步的藥理實(shí)驗(yàn)已證實(shí)細(xì)胞級(jí)超細(xì)微粉能明顯提高藥效，在中藥現(xiàn)代化方面有廣泛應(yīng)用。其原理目前初步認(rèn)為細(xì)胞破壁后的超微粉末可以全部保留其中的各種成分，細(xì)胞級(jí)超細(xì)微粉易被小腸吸著、停留時(shí)間長(zhǎng)，利于吸收，同時(shí)直接暴露的化學(xué)成分易于透膜吸收，大大提高了其生物利用度。中藥超微粉碎給中藥劑型改革和中藥現(xiàn)代化帶來(lái)了一場(chǎng)革命，提高了細(xì)胞破壁率、比表面積、有效成分溶出度、生物利用度，能增強(qiáng)藥理作用、減少用藥量、節(jié)省藥材和保護(hù)藥材資源，同時(shí)還可改善氣味、口感，提高藥品質(zhì)量，相對(duì)目前常規(guī)粉碎、水煎煮或有機(jī)溶劑提取等方法具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)。尤其對(duì)于樹脂類藥材、動(dòng)物藥及貴重藥材如血竭、水蛭、麝香、牛黃等，由于這些藥材中成分不明確，不宜提取，大多經(jīng)常規(guī)粉碎后入丸散應(yīng)用，而引入超微粉碎技術(shù)后，使原有物料處于一種超微細(xì)粉末的"新的狀態(tài)"，充分發(fā)揮超微細(xì)粉獨(dú)特的理化性質(zhì)，中藥的有效成分不但不會(huì)丟失或減少，而且還會(huì)被人體充分吸收利用，中醫(yī)藥的特色將得到更大的發(fā)揮。超微粉碎技術(shù)可使藥材中的有效成分直接暴露出來(lái)，而不是使有效成分從細(xì)胞壁(膜)釋放，從而使藥物起效更加迅速、充分，其粒度細(xì)膩、均勻，表面積增加，孔隙率增大，吸附性和溶解性增強(qiáng)，藥物能較好地分散、溶解于胃液中，增大與胃黏膜的接觸面積，從而更易被胃腸道吸收，大大提高了生物利用度。藥材經(jīng)過超微粉碎，沒有新的物質(zhì)生成，傳統(tǒng)中藥固有的藥效學(xué)基礎(chǔ)物質(zhì)沒有發(fā)生質(zhì)的變化，從而保持了傳統(tǒng)中藥的性味和功能主治。因此，超微粉碎技術(shù)較好地處理了中藥研發(fā)過程中繼承與創(chuàng)新的關(guān)系問題，既發(fā)揮了現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，又秉承了傳統(tǒng)中藥治病保健的固有特性。在中醫(yī)藥發(fā)展中，限制中藥臨床應(yīng)用的一個(gè)重要因素就是中藥的味覺和口感較差，吞咽困難。中藥超微細(xì)粉的平均粒度一般在20wm以下，其顆粒度已低于口腔顆粒感覺閾值，直接服用或煎煮后全服基本上沒有口服顆粒感，無(wú)論是成人還是兒童均能適應(yīng)。通過水蛭入藥方式的比較研究，表明生水蛭經(jīng)超微粉碎，90%的粒度為普通散的1/4，50%的粒度為普通散的1/15，且顏色變淺，腥味降低，質(zhì)地細(xì)膩，利于吞服。2、中藥超微粉碎存在的問題由于受傳統(tǒng)常規(guī)粉碎方法的影響，目前所有超微粉碎方法都是將所需藥材直接進(jìn)行粉碎，得到粉碎物后再進(jìn)行其他處理。在實(shí)踐中，水蛭藥材經(jīng)普通的超微粉碎方法粉碎后，能提高粉碎度，粒度大大減小，比表面積較普通粉大大增大。但在制備、貯存過程中，由于微粉的表面能大，粒間存在范德華力、液橋力、靜電力等，表面電荷數(shù)增多，微粉顆粒具有強(qiáng)烈的相互吸附、團(tuán)聚傾向，使粒度增大，影響了超微粉碎的效果；同時(shí)，由于微粉與空氣中水分的結(jié)合面積增大，因而極易吸潮，流動(dòng)性變差，對(duì)環(huán)境的要求也相應(yīng)提高，極不方便直接制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種新的超微粉碎方法，以提高水蛭的粉碎效率，并簡(jiǎn)化制劑過程。本發(fā)明目的是這樣實(shí)現(xiàn)的取水蛭藥材，常規(guī)粉碎過2080目篩，粉碎物加35倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎2060分鐘，即得。在以上技術(shù)方案中，粉碎物與液體分散介質(zhì)的重量比優(yōu)選為1:3.54;聚乙二醇一丙二醇一甘油一吐溫的重量比優(yōu)選為48:0.2h00.5:00.5。最優(yōu)方案為取水蛭，常規(guī)粉碎過50目篩，加3.52倍的聚乙二醇一400和0.28倍的丙二醇，混勻，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合50分鐘，出料，即得。在上述方案中，振動(dòng)式微粉機(jī)的工作溫度可以為室溫或通冷卻水、液氮等低溫下操作。其研究過程如下(1)分散劑的種類濕法超微粉碎常用到的分散劑為水、乙醇及聚乙二醇400，本品分別以此三種溶劑分散，優(yōu)選最好的分散劑。試驗(yàn)方法取水蛭藥材粗粉(50目)250g，各取三份，分別加入水、乙醇、聚乙二醇400900g，各置振動(dòng)式微粉機(jī)中，分別超微粉碎混合30分鐘，觀察各微粉的狀態(tài)，測(cè)定粒度(D50)、多肽的含量，考察穩(wěn)定性。粒度(D50)及穩(wěn)定性的考察方法同前。結(jié)果見下表。表分散劑種類考察試驗(yàn)結(jié)果分散劑藥液狀況粒度(D50)穩(wěn)定性水粉碎效果較差12.34分層明顯60%乙醇較為細(xì)膩12.28分層明顯聚乙二醇粉碎效果好，細(xì)膩9.44不分層注采用Winner幾9200便攜式高分辨激光粒度分析儀測(cè)定微粉粒度。以上試驗(yàn)結(jié)果表明，水、乙醇、聚乙二醇400為分散劑超微粉碎的粒度D50均能達(dá)到IOim左右，達(dá)到細(xì)胞級(jí)破壁粉碎。但以水、60%乙醇作分散劑超微粉碎后，放置易分層沉降；而且水和60%乙醇均不能直接制成制劑，需要蒸去水、乙醇等溶劑，在蒸干過程中，微粉的顆粒易引起積聚，不便制劑。以聚乙二醇400為分散劑超微粉碎，聚乙二醇400的稠度適中，有表面活性劑作用，使得粉碎順利，而且可直接制劑成型，省去了工藝操作。聚乙二醇400與藥材在微粉機(jī)中高度混合，形成高度均質(zhì)化的液態(tài)分散體系，能夠明顯改善微粉的表面性質(zhì)，減少表面電荷數(shù)，增加微粉潤(rùn)濕性、制劑的穩(wěn)定性；對(duì)多肽、蛋白質(zhì)類成分具有物理的和化學(xué)的修飾作用，能夠增加其溶解度和穩(wěn)定性，消除機(jī)體的免疫破壞作用，明顯提高藥物的生物利用度。故本品選擇以聚乙二醇400作為分散劑。因聚乙二醇400吸水性較強(qiáng)，一般在以聚乙二醇400為基質(zhì)的軟膠囊制劑中通常加入聚乙二醇400量8%的丙二醇以保持內(nèi)外水分平衡，試驗(yàn)對(duì)加入丙二醇的分散劑進(jìn)行了考察。試驗(yàn)方法取水蛭藥材粗粉(50目)250g，加入聚乙二醇400880g，丙二醇70g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合30分鐘，觀察微粉的狀態(tài)，測(cè)定粒度(D50)，考察穩(wěn)定性。粒度(D50)及穩(wěn)定性的考察方法同前。結(jié)果見下表。表聚乙二醇400中加入丙二醇試驗(yàn)考察結(jié)果分散劑藥液狀況粒度(D50)穩(wěn)定性聚乙二醇400中粉碎效果好，黏度適中，流動(dòng)性好，細(xì)膩9.50不分層加入8%的丙二醇經(jīng)過試驗(yàn)篩選，以聚乙二醇400中加入8%的丙二醇為分散劑，和單獨(dú)以聚乙二醇400為分散劑的效果基本相當(dāng)，故本品選擇以聚乙二醇400中加入8%的丙二醇的作為濕法超微粉碎的分散劑。(2)微粉的方式對(duì)超微粉碎的方式進(jìn)行了考察。試驗(yàn)方法①樣品1:取水蛭藥材粗粉(50目)250g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎30分鐘，即得；②樣品2:取水蛭藥材粗粉(50目)250g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎30分鐘，取出，再加聚乙二醇400880g，丙二醇70g，混勻，膠體磨研磨5分鐘，即得；③樣品3:取水蛭藥材粗粉(50目)250g，加聚乙二醇400880g，丙二醇70g,混勻，置振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎混合30分鐘，即得。對(duì)各份樣品分別測(cè)定其粒度(D50)，濕法微粉觀察沉降情況，以此考察其穩(wěn)定性。粒度(D50)測(cè)定方法同上。結(jié)果見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>以上試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品1——干法超微粉碎，在放置過程中，由于表面能較高，帶的電荷多，易團(tuán)聚，粒度變大；樣品2——先干法超微粉碎再與分散劑膠體磨研磨，其粒度較小，在放置一天后發(fā)現(xiàn)沉降分層現(xiàn)象，其穩(wěn)定性較差；樣品3——藥材與分散劑一起超微粉碎混合，穩(wěn)定性較好，放置過程中一直為均一的混懸液，未出現(xiàn)沉降情況，而且粒度較小，變化不大，故本品選擇將水蛭藥材和基質(zhì)一起超微粉碎。(3)分散劑的比例對(duì)所優(yōu)選的水蛭藥粉與分散劑的比例進(jìn)行了考察。試驗(yàn)方法①取水蛭200g，以l:2的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)400g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得；②取水蛭200g，以l:3的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)600g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得；③取水蛭200g，以l:3.8的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)760g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得；④取水蛭200g，以l:4.6的比例加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)920g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎混合30分鐘，出料，即得。通過以不同的藥粉和分散劑的比例進(jìn)行濕法超微粉碎，考察藥液的性狀和粒度(|)50)。結(jié)果見下表。表基質(zhì)比例的選擇試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>以上試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)藥粉和基質(zhì)的比例為l:3.8時(shí)，藥液均勻、細(xì)膩，流動(dòng)性好，放置24小時(shí)不分層；粒度較小；而藥粉和基質(zhì)比例為(1:3)時(shí)藥液較為粘稠，流動(dòng)性差；比例為(1:4.6)時(shí)藥液較稀，用基質(zhì)量大，浪費(fèi)輔料，增加成本。故本品選擇以藥粉一基質(zhì)(1:3.8)的比例進(jìn)行超微濕法粉碎，所得的液體分散體流動(dòng)性好，穩(wěn)定，能滿足制劑成型的要求。(4)超微粉碎的時(shí)間本品對(duì)濕法超微粉碎時(shí)間進(jìn)行了考察。試驗(yàn)方法取水蛭藥材粗粉(50目)250g，加入聚乙二醇400880g，丙二醇70g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合，分別在第20分鐘、第30分鐘、第40分鐘、第50分鐘取樣，觀察不同時(shí)間微粉的狀態(tài)，測(cè)定其粒度(D50)及多肽的含量。粒度(D50)的測(cè)定方法同上。結(jié)果見下表。表超微粉碎時(shí)間的考察試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注多肽的含量測(cè)定方法照紫外一可見分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)測(cè)定。對(duì)照品溶液的制備取牛血清白蛋白對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每lml含0.3mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取待測(cè)樣品2.0g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水80ml，超聲處理30分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，以微孔濾膜(0.45m)濾過，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、l.Oml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再分別加堿性銅試液l.Oml，搖勻，室溫放置10分鐘，各加入福林試液(取儲(chǔ)備液(1—16))4.0ml，搖勻，于55'C水浴中保溫5分鐘，取出，冷至室溫。以0管為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)，在650nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以牛血清白蛋白的濃度與對(duì)應(yīng)的吸收度計(jì)算回歸方程。測(cè)定法精密取供試品溶液lml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自"分別加堿性銅試液l.Oml"起依法操作，測(cè)得樣品的吸收度，從回歸方程中計(jì)算多肽的含量。以上試驗(yàn)結(jié)果表明，超微粉碎20分鐘、30分鐘的粒度D50偏大，多肽的含量稍低；粉碎40分鐘、50分鐘的粒度均較小，二者粒度測(cè)定結(jié)果及多肽的含量均相當(dāng)，優(yōu)選為50分鐘。上述方法制備的超微粉比水蛭常規(guī)粉可減量1/32/3的水蛭原料應(yīng)用，而且療效相當(dāng)。上述的水蛭的超微粉碎中間體可用于制備治療癥瘕痞塊，血瘀閉經(jīng)，跌打損傷，高脂血癥或心腦血管疾病的藥物。上述超微粉碎方法可用于制備軟膠囊劑、液體硬膠囊劑。有益效果水蛭藥材中含有大量的酶類、蛋白質(zhì)、多肽類成分，提取過程中易水解，或遇熱破壞，不適合提取，不耐熱，而且有報(bào)道顯示水、乙醇、乙酸乙酯等提取的部位均為有效部位，以單獨(dú)的提取溶劑提取均不能保證提取出所有的有效成分，故水蛭藥材較適宜直接粉碎入制劑，既可保證有效成分不損失，又不會(huì)使某些成分水解、破壞，而且成品率高，中間過程無(wú)損失。聚乙二醇是一種高吸水性大分子物質(zhì)，蛋白質(zhì)、多肽經(jīng)聚乙二醇處理后，可攜載大量的水分子，從而使其體積增大510倍，原來(lái)不溶于水的蛋白質(zhì)、多肽類藥物經(jīng)聚乙二醇處理，不僅能提高溶解性，還可提高流動(dòng)性，可保護(hù)蛋白質(zhì)、多肽免遭體內(nèi)免疫系統(tǒng)的破壞，大大延長(zhǎng)了藥物的作用時(shí)間，還可減少藥物的毒副作用。如抗腫瘤藥物喜樹堿經(jīng)聚乙二醇處理后，可大大降低毒性，并提高治療效果；再如紫杉醇經(jīng)聚乙二醇處理，可延長(zhǎng)其在體內(nèi)的作用時(shí)間。藥物經(jīng)聚乙二醇處理，可減少用藥量、延長(zhǎng)藥效及降低用藥成本。故本品擬在超微粉碎的基礎(chǔ)上，藥材中另加入聚乙二醇400，一起在振動(dòng)式微粉機(jī)中超微粉碎，高度混合，通過聚乙二醇400的溶解和助表面活性作用，使藥物粉碎的粒度更小，比表面積更大，大大改善微粉的表面性質(zhì)——使表面電荷減少、氣膜消失、藥材微粉被充分的潤(rùn)濕，更利于藥品的吸收利用，增加有效成分的生物利用度，更大限度的發(fā)揮療效，以便使處方藥量降低，節(jié)約藥材，降低成本。濕法超微粉碎特別適合樹脂類藥物、難溶性藥物、動(dòng)物類藥物、貴細(xì)藥物、礦物類藥物等不宜提取藥物的小處方制劑。通過濕法超微粉碎，使藥物中的水溶性、脂溶性的成分與聚乙二醇400等基質(zhì)一起高度混合，聚乙二醇400能幫助藥物潤(rùn)濕，有助表面活性的作用，使藥物表面改性，促進(jìn)水溶性成分的溶解吸收，增加脂溶性成分的溶解性，使藥物自乳化，高度混合成均一的混懸液或乳液，易于吸收利用，達(dá)到減量應(yīng)用，降低成本，提高生物利用度的目的。超微濕法粉碎有以下特點(diǎn)(1)粉碎后形成高度均質(zhì)化的液態(tài)分散體系(即廣義的乳劑)，保證了親脂性與親水性藥物的同步吸收，藥物有效成分的利用度大大增加。(2)加液濕法超微粉碎比正常干法粉碎的效率高，微粉的粒度更小，比表面積更大，微粉的表面性質(zhì)大大改善(電荷減少，氣膜消失，被聚乙二醇400充分潤(rùn)濕)，對(duì)腸壁的吸附作用增強(qiáng)，在胃腸內(nèi)的停留時(shí)間延長(zhǎng)，能進(jìn)一步提高藥物的生物利用度，利于節(jié)約藥材，降低生產(chǎn)成本。(3)經(jīng)過超微粉碎機(jī)的高頻振蕩，與藥物達(dá)到了高度混合的狀態(tài)，藥材微粒高度分散在聚乙二醇400等基質(zhì)中，形成均一的混懸液或乳液，避免了顆粒間的吸附、聚集，增加了制劑的穩(wěn)定性。(4)所選用的基質(zhì)聚乙二醇400，為水溶性，具有助表面活性的作用，經(jīng)與藥物高度混合，可以起到包覆、修飾藥物的作用，對(duì)于半衰期短，體內(nèi)易流失的肽類、蛋白類藥物能起到緩釋、控釋的作用。(5)以聚乙二醇400等為基質(zhì)采用超微濕法粉碎工藝制備的樣品，工藝操作簡(jiǎn)單，無(wú)繁瑣的后續(xù)處理工作，可直接壓制成軟膠囊劑或液體硬膠囊劑。(6)以植物油、聚乙二醇400等為基質(zhì)制成的一般的軟膠囊，其生物利用度均較低，粒度大(有砂粒感)，放置易析出沉淀。而采用藥物與聚乙二醇400等基質(zhì)一起在振動(dòng)式微粉機(jī)中高度混合，即采用濕法超微粉碎，能大大減小顆粒的粒度，能夠使藥物成分和基質(zhì)處于高度混合均一的乳化狀態(tài)，達(dá)到表面改性的作用，能高度混合成均一的混懸液或乳液。由此可見，本發(fā)明取得了突出的技術(shù)效果，達(dá)到了發(fā)明目的。為進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明所取得的有益效果，發(fā)明人從粉碎效果、超微混合物穩(wěn)定性和藥理試驗(yàn)三方面進(jìn)行說(shuō)明一、粉碎效果試驗(yàn)方法①取水蛭250g，按常規(guī)方法粉碎，過80目篩，即得；②取水蛭粗粉碎，過50目篩，稱取250g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合30分鐘，出料，即得。③取水蛭粗粉碎，過50目篩，稱取250g,加入分散劑(含8%丙二醇的聚乙二醇400)950g，混勻，置振動(dòng)式微粉機(jī)(BFM-6型貝利微粉機(jī))中，超微粉碎混合30分鐘，出料，即得。以所得的樣品的性狀、顯微結(jié)構(gòu)、粒度(D50)、溶出度、穩(wěn)定性進(jìn)行考察。試驗(yàn)結(jié)果常規(guī)粉碎的中心粒徑為150180um(可過篩檢查)，色澤不均一，有砂粒感；普通超微粉碎的粉末細(xì)膩均一，粒度D50為11.45咖，但易結(jié)塊；加液濕法超微粉碎中心粒徑為8.70um,細(xì)膩均勻，流動(dòng)性好，而且穩(wěn)定性較好。結(jié)果見下表。表比較三種粉碎方法的考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>二、制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)?zāi)康目疾旒右簼穹ǔ⒎鬯樗贸善返姆€(wěn)定性試驗(yàn)方法將加液濕法超微粉碎所得的樣品壓制成軟膠囊，采用室溫留樣觀察法測(cè)定樣品2個(gè)月內(nèi)的穩(wěn)定性，觀察沉降情況及測(cè)定粒度。試驗(yàn)結(jié)果加液濕法超微粉碎所得混合物，穩(wěn)定性好，無(wú)分層現(xiàn)象，粒度基本沒有增大，可初歩確定以該方法解決留粉藥材制備軟膠囊易分層、沉淀等長(zhǎng)期困擾的難題，結(jié)果見下表。表加液超微粉碎軟膠囊穩(wěn)定性考察<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>三、藥理試驗(yàn)驗(yàn)證為進(jìn)一步驗(yàn)證本發(fā)明在為了證明本發(fā)明藥物制劑在提高生物利用度，節(jié)約藥材、提高藥效方面的貢獻(xiàn)，發(fā)明人依據(jù)其功能主治，進(jìn)行了動(dòng)物對(duì)比藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。1、試驗(yàn)準(zhǔn)備(1)藥物依本發(fā)明最優(yōu)方案得到的水蛭微粉混合物(以下稱濕法水蛭微粉)；活血通脈膠囊(經(jīng)常規(guī)粉碎后的水蛭)。息隱(米非司酮)片，由上海華聯(lián)制藥有限公司提供，批號(hào)050314。總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)測(cè)定試劑盒，批號(hào)分別為011M042、010M050、012L028,均由上海名典生物工程有限公司提供。ADP，批號(hào)11003，TBO生物公司。前列腺素F2a測(cè)定試劑盒(PGF2a)，美國(guó)Sigma公司。羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，由北京化學(xué)試劑公司提供，批號(hào)20060628。戊巴比妥鈉，北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)20061019。肝素鈉注射液，天津市生物化學(xué)制藥廠，批號(hào)20060506，規(guī)格1.25萬(wàn)單位/2ml。己烯雌酚，批號(hào)0512071，天津金耀氨基酸有限公司，規(guī)格0.5mg/mL。(2)儀器QX-200全血血小板聚集儀，上海醫(yī)大儀器廠產(chǎn)品。Spctrumlab53power紫外分光光度計(jì)，上海棱光技術(shù)有限公司產(chǎn)品。WX-753B型多部位微循環(huán)顯微鏡。G)動(dòng)物Wistar大鼠和昆明種小鼠，均為SPF級(jí)，均由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，許可證號(hào)均為SCXK(鄂)2004-0007。2、濕法水蛭微粉抗大鼠靜脈血栓形成的作用(1)方法取Wistar大鼠50只，雄性，200300g，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只。①濕法水蛭微粉低劑量組，0.10g水蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.13g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.17g水蛭/kg;對(duì)照組，活血通脈膠囊0.2g水蛭/kg;⑤空白對(duì)照組，灌服等體積的0.5%CMC-Na溶液。灌胃每天1次，連續(xù)7天。末次給藥后lh，各組動(dòng)物腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉，剖腹分離下腔靜脈，于左腎靜脈下穿一絲線結(jié)扎下腔靜脈管，造成淤血，關(guān)閉腹腔。6h后，用內(nèi)徑為lmm的玻璃毛細(xì)管插入鼠內(nèi)眥靜脈叢取血，至毛細(xì)管血柱達(dá)5mm，每隔30s折斷毛細(xì)管一段，檢查有無(wú)出現(xiàn)凝血絲，計(jì)算毛細(xì)管采血到出現(xiàn)血凝絲時(shí)間，即為凝血時(shí)間。再次打開腹腔，于結(jié)扎下方2cm處夾閉血管，縱行剖開，取出血栓，記錄血栓有無(wú)并稱重。(2)結(jié)果結(jié)果表明，微粉各劑量組均可明顯延長(zhǎng)凝血時(shí)間，降低血栓濕重，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異；微粉的低劑量組與活血通脈膠囊組的效果相當(dāng)，二者無(wú)顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強(qiáng)于活血通脈膠囊。結(jié)果見下表。表濕法水蛭微粉對(duì)大鼠靜脈血栓形成的影響(x士s，n=10)組別劑量(g水蛭/kg)凝血時(shí)間(s)血栓濕重(mg)微粉低劑量組0.1096.00±29.39*17.80±5.02***微粉中劑量組0.13108.00±37.95**14.34±3.23***微粉高劑量組0.17123.00±35.92***13.16±3.15***活血通脈膠囊組0.2099.00士40.12^14.96±3.71***空白對(duì)照組—66.00±30.9825.31±4.31與空白對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。3、濕法水蛭微粉對(duì)大鼠創(chuàng)傷性瘀斑的治療作用(1)方法取Wistar大鼠50只，雌雄各半，200士20g，背部脫毛5cmx4cm，24h后用老虎鉗夾大鼠脫毛區(qū)皮膚，以造成大鼠皮下出血為度，面積4cmx3cm。12h后隨機(jī)分為5組，每組10只①濕法水蛭微粉低劑量組，0.10g7jC蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.13g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.17g水蛭/kg;④對(duì)照組，活血通脈膠囊0.2g水蛭/kg;空白對(duì)照組，灌服等體積的0.5n/。CMC-Na溶液。灌胃每天1次，連續(xù)5天。每天給藥時(shí)用觸摸和肉眼觀察腫脹和瘀斑消退情況，并測(cè)量剩余面積，按下表進(jìn)行記分。表創(chuàng)傷性瘀斑的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>與空白對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。4、濕法水蛭微粉對(duì)小鼠急性高脂血癥的影響(l)方法取雄性小鼠120只，20±2g，按體重性別隨機(jī)分為6組，每組20只①濕法水蛭微粉低劑量組，0.20g水蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.27g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.33g水蛭/kg;④對(duì)照組，活血通脈膠囊0.40g水蛭/kg;⑤空白對(duì)照組，灌服等體積的0.5n/。CMC-Na溶液。正常組，同體積的生理鹽水。灌胃每天1次，連續(xù)7天。末次給藥后2h，除正常組外，其它各組動(dòng)物腹腔注射75X新鮮蛋黃乳劑20ml/kg，禁食過夜。10h后各組給相應(yīng)藥物1次，再2h后每組取其中的IO只動(dòng)物檢測(cè)血小板聚集功能，摘眼球取血，50ul肝素鈉溶液抗凝，在全血血小板聚集儀上，測(cè)定給誘導(dǎo)劑ADP5ul，lmin和5min的血小板聚集率；另10只摘眼球取血，3000r/min離心10min，分離血清，檢測(cè)總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平。(2)結(jié)果結(jié)果表明，微粉各劑量組均可明顯降低總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白水平，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異；微粉各劑量組能夠明顯抑制急性高脂血癥小鼠血小板聚集功能，降低血小板聚集率，從而起到防治血栓形成的作用。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強(qiáng)于活血通脈膠囊。結(jié)果見下表。表濕法水蛭微粉對(duì)小鼠急性高脂血癥的影響(X±s，n=i0)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與空白對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))，*P<0.05,***P<0.001。表濕法水蛭微粉對(duì)急性高脂血癥小鼠血小板聚集功能的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與空白對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))，***P<0.001。5、濕法水蛭微粉對(duì)大鼠子宮微循環(huán)障礙的影響(1)方法取Wistar大鼠50只，雌性，200±20g，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只①濕法水蛭微粉低劑量組(含水蛭1.00%);濕法水蛭微粉中劑量組(含水蛭1.33%);③濕法水蛭微粉高劑量組(含水蛭1.67%);對(duì)照組，活血通脈膠囊(含水蛭2.00%);⑤空白對(duì)照組，灌服等體積的0.5。/。CMC-Na溶液。各組動(dòng)物腹腔注射3.5%戊巴比妥鈉麻醉，仰臥固定于解剖臺(tái)上，沿腹中線下腹壁切開2cm，拉出一側(cè)子宮及其韌帶，固定于盛有10ml生理鹽水的微循環(huán)恒溫浴槽中，制備完畢后穩(wěn)定20min，然后用多部位微循環(huán)顯微鏡在內(nèi)45度角反射光源照射下，選擇并固定視野，用標(biāo)尺測(cè)量一、二級(jí)微動(dòng)脈(A)及微靜脈(V)口徑，按七級(jí)標(biāo)準(zhǔn)觀察血液流態(tài)及毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)目，隨即向浴槽內(nèi)滴加0.25%的PGF2a，觀察記錄子宮韌帶動(dòng)脈及微靜脈口徑、血流速度及毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)目，然后分別向浴槽內(nèi)滴入相應(yīng)濃度的藥品0.21111，觀察給藥后的各項(xiàng)指標(biāo)變化并記錄。(2)結(jié)果結(jié)果表明，微粉各劑量組均能明顯增加微動(dòng)脈及微靜脈口徑、血流速度及毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)目，與給藥前比較有顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強(qiáng)于活血通脈膠囊。結(jié)果見下表。表濕法水蛭微粉對(duì)大鼠子宮血管口徑的影響(X±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表濕法水蛭微粉對(duì)大鼠子宮血流速度和毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>加藥后與加PGF2a后比較(配對(duì)t檢驗(yàn))，*P<0.05。6、濕法水蛭微粉對(duì)大鼠子宮肌瘤的抑制作用(1)方法取Wistar大鼠240只，雌性，200-250g，按體重隨機(jī)分為6組，每組40只①濕法水蛭微粉低劑量組，0.10g水蛭/kg;②濕法水蛭微粉中劑量組，0.13g水蛭/kg;③濕法水蛭微粉高劑量組，0.17g水蛭/kg;對(duì)照組，活血通脈膠囊0.2g水蛭/kg;⑤陽(yáng)性藥組，息隱片0.07g/kg;⑥空白對(duì)照組，灌服等體積的0.5。/。CMC-Na溶液。灌胃每天1次，連續(xù)7天。各組肌肉注射雌激素，次日在給激素的同時(shí)分5d、10d、15d、20d各組處死10只，用游標(biāo)卡尺測(cè)量子宮長(zhǎng)度和直徑。(2)結(jié)果結(jié)果表明，微粉各劑量組均可明顯減少子宮肌瘤模型大鼠的子宮長(zhǎng)度及直徑，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強(qiáng)于活血通脈膠囊。結(jié)果見下表。表濕法水蛭微粉對(duì)大鼠子宮長(zhǎng)度的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表濕法水蛭微粉對(duì)大鼠子宮直徑的影響(X±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>與空白對(duì)照組比較(t檢驗(yàn))，*P<0.05，***P<0.001。結(jié)論在劑量較低的情況下，濕法水蛭微粉依然可有效延長(zhǎng)凝血時(shí)間、抗血栓形成、減輕創(chuàng)傷性瘀斑的嚴(yán)重程度，能降低高脂血癥動(dòng)物模型的膽固醇和甘油三酯的水平，抑制急性高脂血癥小鼠血小板聚集功能，降低血小板聚集率；可增加子宮微動(dòng)脈靜脈口徑、血流速度及毛細(xì)血管網(wǎng)交點(diǎn)數(shù)目，改善子宮微循環(huán)，并能抑制子宮肌瘤，表明濕法水蛭微粉具有活血化瘀、通脈止痛、降血脂、防治血栓形成的作用；可用于治療跌打損傷、治療癥瘕痞塊及血瘀經(jīng)閉。濕法水蛭微粉低劑量(大鼠0.10g水蛭/kg、小鼠0.20g水蛭/kg)與活血通脈膠囊(大鼠0,20g水蛭/kg、小鼠0.40g水蛭/kg)比較作用相當(dāng)，劑量是活血通脈膠囊的1/2，兩組比較無(wú)顯著性差異。因此，濕法水蛭微粉的作用明顯強(qiáng)于活血通脈膠囊。具體實(shí)施例方式下面列舉實(shí)施例，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，各實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明實(shí)施例1取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過50目篩；取聚乙二醇400440g，丙二醇35g，混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合50分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，將其直接用于壓制軟膠囊。實(shí)施例2取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過50目篩；取聚乙二醇400345g，丙二醇30g，吐溫70g,混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合60分鐘，出料，制得中心粒徑小于25Pm的超微混合物，可直接用于灌制液體硬膠囊。實(shí)施例3取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過20目篩；取聚乙二醇400400g，丙二醇100g，混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合40分鐘，出料，制得中心粒徑小于25pm的超微混合物，即得。實(shí)施例4取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過80目篩；取聚乙二醇400400g，丙二醇25g，甘油25g,吐溫25g混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合30分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，即得。實(shí)施例5取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過20目篩；取聚乙二醇400440g，丙二醇20g，吐溫15g，混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合50分鐘，出料，制得中心粒徑小于25ym的超微混合物，即得。實(shí)施例6取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過60目篩；取聚乙二醇400430g，丙二醇25g，甘油10g，吐溫10g，混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合60分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，即得。實(shí)施例7取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過30目篩；取聚乙二醇400440g，丙二醇25g，甘油10g,混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合40分鐘，出料，制得中心粒徑小于25um的超微混合物，即得。實(shí)施例8取水蛭，洗凈，低溫干燥，粉碎過80目篩；取聚乙二醇400440g，甘油25g，吐溫10g，混勻，制成基質(zhì)，加入水蛭粉125g，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合50分鐘，出料，制得中心粒徑小于25txm的超微混合物，即得。權(quán)利要求1、一種新的液態(tài)中藥制劑的中間體，其特征在于該中間體是按如下方法制得的取水蛭藥材，常規(guī)粉碎過20～80目篩，粉碎物加3～5倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎20～60分鐘，即得。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑中間體，其特征在于粉碎物與液體分散介質(zhì)的重量比為1:3.54。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的制劑中間體，其特征在于聚乙二醇一丙二醇一甘油一吐溫的重量比為48:0.21:00.5:00.5。4、根據(jù)權(quán)利要求l、2或3所述的制劑中間體，其特征在于是按如下方法制得的取水蛭，常規(guī)粉碎過50目篩，加3.52倍的聚乙二醇一400和0.28倍的丙二醇，混勻，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合50分鐘，出料，即得。5、一種制備如權(quán)利要求l所述液態(tài)中藥制劑中間體的方法，其特征在于該方法為取水蛭藥材，常規(guī)粉碎過2080目篩，粉碎物加35倍量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎2060分鐘，即得。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于粉碎物與液體分散介質(zhì)的重量比為1:3.54。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于聚乙二醇一丙二醇一甘油一吐溫的重量比為4~8:0.21:00.5:00.5。8、根據(jù)權(quán)利要求5、6或7所述的制備方法，其特征在于該方法為取水蛭，常規(guī)粉碎過50目篩，加3.52倍的聚乙二醇一400和0.28倍的丙二醇，混勻，置振動(dòng)式微粉機(jī)中，超微粉碎混合4050分鐘，出料，即得。9、權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)在制備用于治療癥瘕痞塊、血瘀閉經(jīng)、跌打損傷、高脂血癥或心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。10、權(quán)利要求5至8中任一項(xiàng)方法在制備軟膠囊劑、液體硬膠囊劑、口服乳劑及相關(guān)原料藥中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種液態(tài)中藥制劑的中間體及其制備方法和用途，包括一種單味水蛭超微粉制劑的粉碎方法，特別是一種濕法超微粉碎技術(shù)制備水蛭超微粉制劑的粉碎方法。該方法是將水蛭藥材常規(guī)粉碎后再加適量的聚乙二醇、丙二醇、甘油、吐溫中任意一種或幾種的組合物，一起超微粉碎后得到所需的制劑中間產(chǎn)物，再將此中間產(chǎn)物制成所需劑型。應(yīng)用該方法可以提高粉碎效率，降低產(chǎn)品中的原料用量。文檔編號(hào)A61K35/62GK101185658SQ20071017550公開日2008年5月28日申請(qǐng)日期2007年9月30日優(yōu)先權(quán)日2007年9月30日發(fā)明者劉國(guó)飛,周小明申請(qǐng)人:北京凱瑞創(chuàng)新醫(yī)藥科技有限公司