專利名稱：雙歧桿菌在含中藥培養(yǎng)基中進(jìn)行有氧發(fā)酵的方法
本說明涉及乳酸菌的培養(yǎng)方法，特別是雙歧桿菌的培養(yǎng)方法。
人體腸道內(nèi)存在的有益菌群如雙歧桿菌、類鏈球菌、乳桿菌等能調(diào)節(jié)人體微生態(tài)平衡，降解細(xì)菌毒素及人體代謝廢物。人體菌群生態(tài)失調(diào)，能引起多種疾病發(fā)生，因此國(guó)內(nèi)外均應(yīng)用乳酸菌制品作為保健品或藥品，用于治療胃腸疾病、心腦血管疾病、增強(qiáng)免疫力及抗腫瘤。乳酸菌制品中又以雙歧桿菌活菌制品以及雙歧桿菌與其它乳酸菌，如類鏈球菌、乳桿菌等復(fù)合多菌株活菌制品效果最佳。
目前雙歧桿菌的培養(yǎng)都需在厭氧條件下，因此發(fā)酵時(shí)要充入二氧化碳和氮?dú)?，而且培養(yǎng)基中要加入牛心浸液，鮮牛奶等，工業(yè)生產(chǎn)投資成本較高。同時(shí)由于雙歧桿菌的培養(yǎng)條件，包括培養(yǎng)基，與其它乳酸菌，如類鏈球菌，乳桿菌等，的培養(yǎng)條件差異很大，因此不能在同發(fā)酵罐中同時(shí)培養(yǎng)雙歧桿菌和其它乳酸菌，對(duì)生產(chǎn)復(fù)合多菌株活菌制品帶來困難。
本發(fā)明的目的在于提供一種雙歧桿菌成本較低，能有氧發(fā)酵培養(yǎng)的方法，并使雙歧桿菌能與其它乳酸菌同罐共生培養(yǎng)。
本發(fā)明的方法如下。
首先馴化雙歧桿菌將從BS或GAM培養(yǎng)基中培養(yǎng)出的雙歧桿菌轉(zhuǎn)接種到由一般乳酸菌培養(yǎng)基之營(yíng)養(yǎng)成份，如豆芽汁、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、奶粉等與枸杞子、薏苡仁，丹參、黃芪四種中藥中的任意一種或一種以上的水煮提取液組成的中藥培養(yǎng)基中，通入CO2和N2進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，然后將所得到的雙歧桿菌菌種再回接到BS或GAM培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，雙歧桿菌如此在兩種培養(yǎng)基中交替反復(fù)培養(yǎng)不少于30代后，在上述方法配制的中藥培養(yǎng)基中進(jìn)行有氧培養(yǎng)，將所得菌種再在中藥培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，雙歧桿菌如此有氧培養(yǎng)與厭氧培養(yǎng)交替進(jìn)行不少于100代的篩選后，便得到優(yōu)良的馴化的微需氧的雙歧桿菌菌種。
中藥培養(yǎng)基可以如下配制取100份(重量)水加入枸杞子、薏苡仁、丹參、黃芪四種中藥之一種或幾種，每種中藥加入0.5-10份，煮沸10-15分鐘后，過濾，加入豆芽汁、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、奶粉等一般乳酸菌培養(yǎng)基之營(yíng)養(yǎng)成份，攪拌均勻，經(jīng)高壓滅菌后即得到中藥培養(yǎng)基。
將馴化后的雙歧桿菌接種到上述的由一般乳酸菌培養(yǎng)基之營(yíng)養(yǎng)成份與枸杞子、薏苡仁、丹參、黃芪四種中藥中的一種或一種以上的水煮提取液配制成的中藥培養(yǎng)基中，進(jìn)行有氧發(fā)酵培養(yǎng)。
將馴化后的雙歧桿菌也可以接種到由一般乳酸菌培養(yǎng)基之營(yíng)養(yǎng)成份與枸杞子、薏苡仁、丹參、黃芪四種中藥中的一種或幾種再加入酸棗仁或甘草，或同時(shí)加入酸棗仁和甘草的水煮提取液配制成的中藥培養(yǎng)基中，進(jìn)行有氧發(fā)酵培養(yǎng)。
雙歧桿菌有氧發(fā)酵培養(yǎng)所采用的中藥培養(yǎng)基與馴化雙歧桿菌的中藥培養(yǎng)基的配制方法相同。
為了方便地制取雙歧桿菌與其它乳酸菌，如類鏈球菌、乳桿菌等復(fù)合多菌株活菌制品，可以將雙歧桿菌和其它乳酸菌同時(shí)接種到中藥培養(yǎng)基中，同時(shí)進(jìn)行有氧發(fā)酵培養(yǎng)。在中藥培養(yǎng)基中也可加入酸酸棗仁或/和甘草。
采用本發(fā)明的雙歧桿菌有氧發(fā)酵培養(yǎng)方法，可以改變雙歧桿菌過去的厭氧發(fā)酵為有氧發(fā)酵，菌株生長(zhǎng)正常，從而減少了工業(yè)生產(chǎn)的投資，降低了生產(chǎn)成本，特別是采用6種中藥水煮提取液配制的中藥培養(yǎng)基進(jìn)行雙歧桿菌有氧發(fā)酵培養(yǎng)，雙歧桿菌的生長(zhǎng)比較穩(wěn)定與采用BS或GAM培養(yǎng)基基本一致，若進(jìn)行雙歧桿菌與基它乳酸菌同罐共生有氧發(fā)酵培養(yǎng)，則雙歧桿菌與其它乳酸菌如類鏈球菌、乳桿菌等都能生長(zhǎng)良好，克服了雙歧桿菌不能與其它乳酸菌同罐發(fā)酵培養(yǎng)的困難，簡(jiǎn)化了制取復(fù)合多菌株活菌制品的工藝。用本發(fā)明制取的雙歧桿菌制品同樣具有明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)和預(yù)防性抗腫瘤效果等雙歧桿菌的藥效作用。
以下是實(shí)施例。
實(shí)施例1.雙歧桿菌的馴化取100份(重量)水，加入2份薏苡仁，6份枸杞子，2份黃芪，2份丹參，煮沸10分鐘后，過濾，得中藥水煮提取液。取100份(重量)中藥煮提取液加入10份豆芽汁，0.5份蛋白胨，0.5份酵母膏，2份葡萄糖，0.2份牛奶粉，攪拌均勻，高壓來菌后，得到中藥培養(yǎng)基。
從BS培養(yǎng)基中將兩歧雙歧桿菌轉(zhuǎn)接到上述中藥培養(yǎng)基中，在37-38℃進(jìn)行厭氧培養(yǎng)16小時(shí)，然后將得的雙歧桿菌回接到BS培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧培氧16小時(shí)。雙歧桿菌如此在兩種培養(yǎng)基中交替反復(fù)進(jìn)行厭氧培養(yǎng)30代后，將所得雙歧桿菌在上述的中藥培養(yǎng)基中在37-38℃進(jìn)行有氧培養(yǎng)16小時(shí)隨后，將有氧培養(yǎng)的雙歧桿菌再在上述中藥培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)16小時(shí)。雙歧桿菌如此經(jīng)有氧培養(yǎng)與厭氧培養(yǎng)交替進(jìn)行100代篩選后，得到優(yōu)良的馴化的雙歧桿菌菌種。
實(shí)施例2，取100份(重量)水，加入5份薏苡仁，煮沸10分鐘后過濾，得中藥水煮提取液，取100份(重量)此中藥水煮提取液加入10份豆芽汁，0.5份蛋白胨，0.5份酵母膏，2份葡萄糖，0.2份牛奶粉，攪拌均勻，高壓來菌后得到中藥培養(yǎng)基。
取此中藥培養(yǎng)基100份(體積)接種馴化后的雙歧桿菌5份(體積)(含菌量107-108個(gè)/ml)在37-38℃進(jìn)行有氧發(fā)酵培養(yǎng)12小時(shí)，所得發(fā)酵液每毫升中含雙歧桿菌107—108個(gè)。
分別用枸杞子、丹參、黃芪代替薏苡仁做上述實(shí)驗(yàn)，所得發(fā)酵液中雙歧桿菌的含量分別為枸杞子≥108個(gè)/ml；丹參≥108個(gè)/ml；黃芪107-108個(gè)/ml。
實(shí)施例3.取100份(重量)水，加入6份枸杞子，5份薏苡仁，5份枸杞子，5份丹參煮沸10分鐘后過濾，得中藥水煮提取液。取100份(重量)此中藥水煮提取液加入10份豆芽汁，0.5份蛋白胨，0.5份酵母膏，2份葡萄糖，0.2份牛奶粉，攪拌均勻，高壓滅菌后，得到中藥培養(yǎng)基。
取此中藥培養(yǎng)基100份(體積)接種馴化后的雙歧桿菌5份(體積)(含菌量108個(gè)/ml)在37-38℃進(jìn)行有氧發(fā)酵培養(yǎng)12小時(shí)，所得發(fā)酵液中含雙歧桿菌數(shù)≥108個(gè)/ml。
實(shí)施例4，取100份(重量)水，加5份薏苡仁，2份枸杞子，2份黃芪，2份丹參，2份甘草，2份酸棗仁，煮沸10分鐘后，過濾，得中藥水煮提取液。取100份(重量)中藥水煮提取液加入10份豆芽汁，0.5份蛋白胨，0.5份酵母膏，2份葡萄糖，0.2份牛奶粉，攪拌均勻，高壓滅菌后得到中藥培養(yǎng)基。
取此中藥培養(yǎng)基100份(體積)接種馴化后的雙歧桿菌1份(體積)，保加利亞乳桿菌0.5份(體積)類鏈球菌0.1份(體積)，(含菌量均為≥107個(gè)/ml)在37-38℃有氧發(fā)酵培養(yǎng)16小時(shí)，得到含多菌株的發(fā)酵液。發(fā)酵液中含總菌數(shù)≥108個(gè)/ml，其中雙歧桿菌占60-80％，類鏈球菌和乳桿菌各占10-20％。制成口服液有較好的口感。保健功效動(dòng)物試驗(yàn)表明該產(chǎn)品中雙歧桿菌具有生物拮抗與抗腫瘤功能，該產(chǎn)品具有抗疲、抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，同時(shí)該產(chǎn)品還可調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)腸道微生態(tài)平衡，治療多種腸道胃道病，對(duì)放療、化療引起免疫功能下降也有顯著療效。
權(quán)利要求
1.一種雙歧桿菌有氧發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是將馴化后的雙歧桿菌菌種接種到在一般乳酸菌培養(yǎng)基之營(yíng)養(yǎng)成份與枸杞子、薏苡仁、丹參、黃芪四種中藥中的一種或一種以上的水煮提取液配制成的中藥培養(yǎng)基中，進(jìn)行有氧發(fā)酵培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙歧桿菌有氧發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是在中藥培養(yǎng)基中可以加入酸棗仁或甘草，或同時(shí)加入酸棗仁和甘草的水煮提取液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的雙歧桿菌有氧發(fā)酵培，養(yǎng)方法，其特征是可以將其它乳酸菌同雙歧桿菌同時(shí)接種到中藥培養(yǎng)基中，同時(shí)進(jìn)行有氧發(fā)酵培養(yǎng)方法。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙歧桿菌有氧培養(yǎng)方法，其特征是雙歧桿菌的馴化可按以下方法進(jìn)行將從BS或GAM培養(yǎng)基中培養(yǎng)出的雙歧桿菌轉(zhuǎn)接種到中藥培養(yǎng)基中，進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，然后將所得到的雙歧桿菌菌種再回接到BS或GAM培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，雙歧桿菌如此在兩種培養(yǎng)基交替反復(fù)培養(yǎng)不少于30代，隨后在中藥培養(yǎng)基中進(jìn)行有氧培養(yǎng)，將所得菌種再在中藥培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，如此有氧與厭氧交替進(jìn)行不少于100代的篩選后，得到優(yōu)良的馴化的微需氧的雙歧桿菌菌種。
全文摘要
一種雙歧桿菌的有氧發(fā)酵方法，它是利用枸杞子、丹參等中藥提取液與一般乳酸菌培養(yǎng)基之營(yíng)養(yǎng)成分配制成中藥培養(yǎng)基，進(jìn)行雙歧桿菌有氧發(fā)酵培養(yǎng)。采用本發(fā)明之方法可以將雙歧桿菌與其它乳酸菌如類鏈球菌、乳桿菌同罐發(fā)酵培養(yǎng)。
文檔編號(hào)A61K35/74GK1114354SQ94111369
公開日1996年1月3日 申請(qǐng)日期1994年6月23日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月23日
發(fā)明者肖俊方 申請(qǐng)人:江蘇省紡織(集團(tuán))總公司實(shí)業(yè)開發(fā)分公司