專利名稱：作為用于治療癌癥的抗增殖劑的取代的吡咯類化合物的制作方法
發(fā)明概述本發(fā)明涉及某些作為抗增殖劑的取代的吡咯類化合物。這些化合物及其藥用鹽適用于治療和/或控制細(xì)胞增殖性疾病，尤其是癌癥。本發(fā)明還涉及含有該化合物的藥物組合物及其治療和/或預(yù)防癌癥，特別是治療或控制實(shí)體腫瘤的用途。
“烷基”指具有1-15，優(yōu)選地1-10個碳原子的直鏈或支鏈飽和的脂族烴。烷基可如下文具體描述的被取代。此外，該烷基鏈可包括一個或多個代替碳原子的雜原子。具有1-6個，優(yōu)選地1-4個碳原子的“低級烷基”是優(yōu)選的。典型的低級烷基包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，2-丁基，戊基，己基等。
“鏈烯基”指具有1-15，優(yōu)選地1-10個碳原子，最優(yōu)選1-6個碳原子的直鏈或支鏈的脂族不飽和烴。
“烷氧基”指通過氧連接到該分子的剩余部分的烷基(例如RO-，如甲氧基，乙氧基等)。
“芳基”指任選地可含有一個或多個相同或不同的雜原子的具有5-10個原子且由1或2個環(huán)構(gòu)成的芳環(huán)。在該定義中，芳基包括雜芳基。優(yōu)選的雜芳基包括代替一個或多個碳的單個的或任何組合的氮，硫，或氧。在該定義中的芳基的實(shí)例是苯基，吡啶，咪唑，吡咯，三唑，呋喃，嘧啶。
“環(huán)烷基”指含有3-8個原子的非芳族的，部分或完全飽和的環(huán)狀脂族烴基。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
“有效量”指顯著地抑制增殖和/或預(yù)防人腫瘤細(xì)胞，包括人腫瘤細(xì)胞系的分化的至少一種式I的化合物及其藥用鹽的量。
“雜原子”指選自氮，硫，或氧的原子。雜原子是獨(dú)立地選擇的且可代替一個或多個碳原子。
“雜環(huán)”指含有至少一個雜原子的3-到10-元非芳族，部分或完全飽和烴基。這種環(huán)系包括嗎啉，吡咯烷，哌啶，哌嗪。
“IC50”指抑制50％的具體的檢測活性所需的本發(fā)明的特定的化合物的濃度。尤其，IC50可如下文實(shí)施例26所述進(jìn)行測定。
“藥用鹽”指常規(guī)的酸加成鹽或堿加成鹽，其保留了式I的化合物的生物有效性和特性且由合適的非毒性有機(jī)或無機(jī)酸或有機(jī)或無機(jī)堿形成。酸加成鹽的實(shí)例包括衍生于無機(jī)酸如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，磷酸和硝酸的那些，衍生于有機(jī)酸如乙酸，酒石酸，水楊酸，甲磺酸，丁二酸，檸檬酸，蘋果酸，乳酸，富馬酸等的那些。堿加成鹽的實(shí)例包括衍生于銨，鉀，鈉和氫氧化季銨如氫氧化四甲銨的那些。
“藥用”，如藥用載體，賦形劑等，指對給藥特定的化合物的受試者藥理可接受的和基本上無毒性的。
“藥物活性代謝物”指藥物可接受的和有效的式I化合物的代謝產(chǎn)物。
針對式I化合物的“血漿轉(zhuǎn)化”指這種化合物在37℃下的人或嚙齒類動物血漿中30分鐘-6小時降解(酶解或非酶解)給出3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮，式I化合物的一種藥物活性代謝物，及其藥物活性代謝物。通常，此轉(zhuǎn)化以在給定時間段類的百分降解給出。
“聚乙二醇”或“PEG”基代表通式HO(CH2CH2O)nR8的結(jié)構(gòu)，其中n平均來說介于2-1500，優(yōu)選地15-150之間，平均分子量為500-5000道爾頓，并且其中R8是羧基或低級烷基，優(yōu)選地甲基或乙基。PEG基可與本發(fā)明的化合物反應(yīng)以得到也在本發(fā)明的范圍內(nèi)的聚乙二醇化(pegylated)的化合物。
“前藥”指可在生理?xiàng)l件下轉(zhuǎn)化成或通過溶劑解成藥物活性化合物的化合物。前藥可以在對受治者給藥時是失活的，但在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性化合物。
“穩(wěn)定性”是指式I化合物在靜脈內(nèi)給藥所用的典型的溶液中抵抗降解的能力的總體評價。具體地，其指任何給定的式I化合物在乙腈和鹽水或葡萄糖水中于72小時內(nèi)釋放3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮的能力。如果檢測到低于1％的3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮，則式I化合物的“穩(wěn)定性”是“非常好的”，如果檢測到低于2.5％的3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮，則式I化合物的“穩(wěn)定性”是“良好的”，而如果在室溫下72小時的溫育中檢測到低于5％的3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮，則式I化合物的“穩(wěn)定性”是“中等的”。
取代的烷基中的“取代的”指取代可發(fā)生在一個或多個位置，并且除非另外指明，在各取代位置的取代基獨(dú)立地選自給定的備選取代基。
“取代的氨基”指用另一基團(tuán)，優(yōu)選地低級烷基(如甲基或乙基)單或二取代的氨基。
發(fā)明詳述具體地，本發(fā)明涉及下式的取代的吡咯類化合物 及其藥用鹽，其中R選自-CH2OPO3R1R2，-CH2OH，-CH2OCOR3，-CH2OCO2R3，-CH2OCONHR3，和-CONHR3；R1和R2選自H，Na，和NH4并且是相同的，除非R1或R2是H，在這種情況下，另一個可是不同的，或者備選地，R1和R2一起代表鈣。
R3選自任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的烷基；任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的鏈烯基；任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的環(huán)烷基；雜環(huán)基，其中當(dāng)包括N作為雜原子時，該N任選地可被低級烷基和-COR7取代，芳基，其任選地被一個或多個選自CO2R4，羥基，烷氧基，聚乙二醇，OPO3R1R2，和烷基的取代基取代，其中所述烷基本身可被羥基，烷氧基，羧基和取代的氨基取代，條件是，當(dāng)芳基代表吡啶時，該氮可被低級烷基取代；R4選自H，Na和低級烷基；R5和R6各自獨(dú)立地選自H，低級烷基，和-COR7，或者備選地，基團(tuán)-NR5R6一起形成5或6元的雜環(huán)環(huán)；和R7是任選地可被羧基，聚乙二醇，取代的氨基取代的低級烷基。
式I化合物具有抗增殖的活性，具體地，它們抑制細(xì)胞周期的G2/M期的細(xì)胞分裂并且通常被稱為“G2/M期的細(xì)胞-周期”抑制劑。這些化合物是美國專利5057614的抗癌治療劑的穩(wěn)定的，可溶的前藥并且因此適于連續(xù)輸注給藥。
本發(fā)明還涉及含有治療有效量的任何一種或多種上述化合物和藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明也涉及有效量的式I化合物和/或其藥用鹽治療實(shí)體瘤，尤其是乳腺腫瘤和結(jié)腸腫瘤的用途。
在式I化合物的優(yōu)選的實(shí)施方案中，R選自-CH2OPO3R1R2，-CH2OCOR3，-CH2OCO2R3，-CH2OCONHR3，和-CONHR3，優(yōu)選地選自-CH2OPO3R1R2，-CH2OCOR3，和-CONHR3，最優(yōu)選地選自-CH2OPO3R1R2和-CH2OCOR3。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R是-CH2OCO-吡啶，其中該吡啶上的N原子被低級烷基，最優(yōu)選甲基和乙基取代，從而產(chǎn)生季氮原子。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1和R2獨(dú)立地選自H和Na。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3是含有任選地可被-COR7取代的至少一個N原子的雜環(huán)基。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3是被-OPO3R1R2取代的芳基，并且R1和R2獨(dú)立地選自H或Na。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3是被選自-CO2Na，聚乙二醇和-CH2CH2N(CH2CH2)2的基團(tuán)取代的芳基。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3是被-CO2Na取代的低級烷基。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，基團(tuán)NR5R6一起形成5或6元的雜環(huán)環(huán)，優(yōu)選哌啶或吡咯烷。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R5和R6各自獨(dú)立地選自H，甲基和乙基。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R7是被聚乙二醇取代的乙基。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚乙二醇具有分子量約750護(hù)。路線I還用于制備式I化合物，其中R是-CH2OH。反應(yīng)路線I 如路線Ia中所述，將通過在堿如碳酸鈉和相轉(zhuǎn)移催化劑如硫酸氫四丁基銨的存在下，在二氯甲烷和水中已知的羧酸或通過已知的方法制備的羧酸和ClCH2OSO2Cl反應(yīng)所制備的氯甲基酯與3-(1-甲基-3-吲哚基)到約5000道爾頓。
在式I化合物的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，R是-CH2OCOR3，其中R3是被具有分子量約750到約5000道爾頓的聚乙二醇取代的乙基。
以下是優(yōu)選的式I化合物的實(shí)例磷酸單-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基]鈉鹽，O-[2-[[2，5-二氫-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基]甲氧基羰基]乙基]-O’-甲基聚乙二醇2000，磷酸單-(4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基)酯鈉鹽，三氟乙酸1-甲基-3-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲氧基羰基]-吡啶鎓鹽，1-羥基甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；和O-[2-[[[2，5-二氫-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基]甲氧基]羰基]甲基]-O’-甲基聚乙二醇2000。
本文公開和上述通式包括的化合物可呈現(xiàn)出互變異構(gòu)和結(jié)構(gòu)異構(gòu)現(xiàn)象。本發(fā)明包括這些化合物的任何互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)異構(gòu)體，或這些異構(gòu)體的混合物，并且不限于在上式范圍內(nèi)的所用的任一互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物的合成本發(fā)明的化合物可通過本領(lǐng)域已知的方法制備。在實(shí)施例中提供了合成這些化合物的合適的方法。一般地，可根據(jù)以下合成路線制備這些化合物。
可如下的路線I所述制備式I化合物，其中R是CH2OCOR3，其中R3定義如上，條件是如果R3含有羥基，羥烷基，氨基，氨基烷基，單烷基氨基，或羧基時，該基團(tuán)首先用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)保護(hù)基保-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮[如EP專利03288026的例舉的制備]反應(yīng)。
或者，將3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮[如Davis US專利5057614的例舉的制備]用甲醛處理得到羥甲基中間體2。然后，用已知的方法酯化此中間體。典型地，在EDC和二甲基氨基吡啶的存在和室溫下，用已知的羧酸或通過已知的方法制備的羧酸在諸如二氯甲烷的溶劑中處理羥甲基中間體2幾小時?；蛘?，用已知的?；然蛲ㄟ^已知的方法制備的酰基氯處理羥甲基中間體2。
為了制備其中R3含有雜芳基環(huán)的結(jié)構(gòu)3的化合物，可通過與烷基碘如CH3I在諸如乙腈的溶劑中反應(yīng)進(jìn)一步修飾該雜原子如N?；蛘?，其中R3含有合適地保護(hù)的羥基，羥烷基，氨基，氨基烷基，單烷基氨基的結(jié)構(gòu)3的化合物可通過已知的方法首先除去保護(hù)基而被進(jìn)一步修飾。然后，可通過本領(lǐng)域已知的方法將氨基或羥基修飾成所需的酰胺或酯。
可如下的路線II所述制備式I化合物，其中R是CH2OPO3R1R2，且其中R1和R2定義如上。反應(yīng)路線II 典型地，通過使用三苯膦和偶氮二羧酸乙酯的mitsunobu反應(yīng)偶聯(lián)羥甲基中間體2和合適地保護(hù)的磷酸酯，得到其中Y代表合適的保護(hù)基的結(jié)構(gòu)4的化合物。通過任何標(biāo)準(zhǔn)的方法除去該保護(hù)基得到磷酸5。特別地，當(dāng)Y代表芐基時，可通過使用環(huán)己二烯和鈀碳作為催化劑除去該保護(hù)基。然后，可通過標(biāo)準(zhǔn)方法將化合物5轉(zhuǎn)化成其鹽，如單鉀鹽6。
可如下的路線III所述制備式I化合物，其中R是-CH2OCO2R3，且其中R3定義如上。反應(yīng)路線III 典型地，在二甲基氨基吡啶和1，5-二氮雜雙環(huán)(4.3.0)壬-5烯的存在下，在諸如THF的溶劑中于5-20℃的溫度下，用已知的氯甲酸酯或用已知的方法制備的氯甲酸酯處理羥甲基中間體2得到所需的碳酸酯。
可如下的路線IV所述制備式I化合物，其中R是-CH2OCONHR3，且其中R3定義如上。反應(yīng)路線IV 典型地，在諸如THF的溶劑中于0℃的溫度下，用諸如正丁基鋰或雙(三甲基甲硅烷)酰胺鋰的強(qiáng)堿去質(zhì)子化羥甲基中間體2。然后，在同樣的溶劑中，用雙(對-硝基苯基)碳酸酯，隨后用已知的胺或用已知的方法制備的胺處理所產(chǎn)生的陰離子。
可如下的路線V所述制備式I化合物，其中R是-CONHR3，且其中R3定義如上，條件是，如果R3含有羥基，羥烷基，氨基，氨基烷基，單烷基氨基，或羧基，那么用常規(guī)的保護(hù)基保護(hù)這些基團(tuán)。反應(yīng)路線V 典型地，在諸如THF的非質(zhì)子傳遞溶劑中于0℃的溫度下，用諸如正丁基鋰或雙(三甲基甲硅烷)酰胺鋰的強(qiáng)堿去質(zhì)子化3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮[如EP專利03288026的例舉的制備]。然后，用雙(對-硝基苯基)碳酸酯，隨后用已知的胺或用本領(lǐng)域已知的方法制備的胺處理所得的陰離子。
通過已知的方式，用合適的堿處理，可將式I的酸性化合物轉(zhuǎn)化成其藥用鹽。合適的鹽不僅包括衍生于無機(jī)堿如鈉，鉀或鈣鹽的那些，還包括衍生于無機(jī)堿如乙二胺，單乙醇胺或二乙醇胺的那些。通過已知的方式，用合適的酸處理可進(jìn)行式I的堿性化合物對藥用鹽的轉(zhuǎn)化。合適的鹽是說明書第二頁公開的那些。組合物/制劑在一種備選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包括至少一種式I化合物或其藥用鹽的藥物組合物。
這些藥物組合物可例如以片劑，包衣片劑，糖錠劑，硬或軟明膠膠囊劑，溶液劑，乳劑，或懸浮劑的形式口服給藥。它們也可以栓劑的形式直腸給藥。然而，本發(fā)明的化合物尤其適于例如以注射液的形式胃腸外給藥。
包括式I化合物，其前藥或其藥用鹽的藥物組合物可以用本領(lǐng)域已知的方法制備，例如利用常規(guī)的混合，包囊，溶解，成粒，乳化，包埋，制糖錠，或凍干法?？捎弥委煻栊缘?，無機(jī)或有機(jī)載體配制這些藥物制劑。乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸(steric acid)或其鹽可用作片劑，包衣片劑，糖錠劑，硬明膠膠囊劑的這種載體。軟明膠膠囊劑的合適載體包括植物油，蠟或脂肪。根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，在軟明膠膠囊劑的情況下，沒有載體是通常需要的。制備溶液劑和糖漿的合適載體是水，多元醇，多糖，惰性糖和葡萄糖。注射液的合適載體是水，醇，多元醇，甘油，植物油，磷脂和表面活性劑。栓劑的合適載體是天然或硬化油，蠟，脂肪或半液態(tài)多元醇。
該藥物制劑還可含有防腐劑，增溶劑，穩(wěn)定劑，濕潤劑，乳化劑，甜味劑，著色劑，矯味劑，調(diào)整滲透壓的鹽，緩沖液，包衣劑，抗氧劑。它們也可含有其它治療上有價值的物質(zhì)，包括除式I化合物外的其它活性成分。劑量如上所述，本發(fā)明的化合物用于治療或控制細(xì)胞增殖疾病，尤其是腫瘤疾病。這些化合物和含有該化合物的制劑尤其有用于治療或控制實(shí)體瘤，如乳腺或結(jié)腸腫瘤。
本發(fā)明的化合物的治療有效量指有效預(yù)防、減輕或改善疾病的癥狀或延長被治療的對象的存活期的化合物的量。治療有效量的確定是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
本發(fā)明的化合物的治療有效量或劑量可在寬的范圍內(nèi)變化并且在每個特定的病例中按個體的要求進(jìn)行調(diào)整。一般地，在對體重約70Kg的成人口服或胃腸外給藥的情況下，約10mg到10000mg，優(yōu)選地約200mg到1000mg的日劑量應(yīng)該是合適的，盡管需要時，可超越該上限。日劑量可以單劑量或等份劑量給藥，或?qū)τ谖改c外給藥，其可以連續(xù)輸注形式給藥。
a)將0.5g(1.25mmol)的3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮[見Davis US專利5057614]，4.0ml的甲醛溶液(37％w/w)和2.0ml水組成的懸浮液在攪拌下加熱到125℃并且回流縮合14小時。冷卻反應(yīng)混合物并用水稀釋。過濾該紅色固體，用水洗滌并干燥。通過硅膠色譜和EtOAc/己烷的混合物作為洗脫劑純化該固體得到1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(mp＝209-211℃)。
b)向含有0.12g(0.68mmol)的偶氮二羧酸二乙酯，0.20g(0.46mmol)的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(得自上步)，和0.40g(1.43mmol)的磷酸二芐酯的冷的(10℃)THF的溶液中滴加5ml的含有0.128g(0.49mmol)的三苯膦的溶液。在20℃攪拌所得混合物14小時。蒸發(fā)所有的溶劑，并用硅膠色譜和EtOAc/己烷的混合物作為洗脫劑純化該殘留物得到磚紅色的固體磷酸二芐酯3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(mp＝105-109℃)。
c)用35mg 10％鈀/碳處理有5ml乙醇和0.5g的1，4-環(huán)己二烯的35mg(0.051mmol)的磷酸二芐酯3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(得自上步)的THF(5ml)溶液。加熱該混合物到45℃，此時有輕微的放熱。在50℃下10分鐘后，趁熱硅藻土過濾該反應(yīng)物，并用THF洗滌該濾餅。蒸發(fā)所有的溶劑，并將該殘留物重新溶解于THF，硅藻土過濾并用己烷研制得到14mg的磷酸單-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基]。
d)用稀釋的氫氧化鈉14mg(0.029mmol)處理磷酸單-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基](得自上步)在15毫升水中的溶液直到該溶液的pH達(dá)到7.1。過濾并凍干該溶液得到磷酸單-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基]鈉鹽。實(shí)施例2異煙酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯向二甲基氨基吡啶(1.5當(dāng)量)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(1.5當(dāng)量)的CH2Cl2溶液加入4-吡啶甲酸(1.2當(dāng)量)，并攪拌該反應(yīng)混合物幾分鐘。加入實(shí)施例1a制備的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮并在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物幾分鐘。用二氯甲烷稀釋該混合物，用含水的HCl，飽和的NaHCO3，水洗滌，MgSO4干燥并蒸發(fā)。柱色譜純化該殘留物得到異煙酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(產(chǎn)率-76％)。
b)在DMF中溶解3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮[參見EP專利03288026]并用Cs2CO3(49mg，0.15mmol)處理幾分鐘，加入上述步驟a)制備的氯甲基酯(33mg，0.15mmol)，并在室溫下攪拌30分鐘。水性處理，隨后通過閃式色譜純化得到癸酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(產(chǎn)率-58％)。實(shí)施例6用與上述實(shí)施例5b中的相同的方法制備下列化合物a)[2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(如實(shí)施例5a所述，從相應(yīng)的酸制備該原料氯甲基酯；通過制備性TLC純化)(產(chǎn)率-38％)；
b)2，2-二甲基丙酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(原料新戊酸氯甲基酯購自(Aldrich)(產(chǎn)率-91％))。實(shí)施例73-氨基-環(huán)己烷羧酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯三氟乙酸鹽a)按照類似于實(shí)施例5a的方式，從其本身通過已知的3-氨基-環(huán)己烷羧酸(Aldrich)的BOC保護(hù)的方法合成的N-叔丁氧羰基-3-氨基環(huán)己烷羧酸，制備氯甲基-N-叔丁氧羰基-3-氨基環(huán)己烷羧酸酯(產(chǎn)率87％)。
b)在DMF中溶解3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮[參見EP專利03288026]，并用Cs2CO3(0.15g，0.45mmol)處理幾分鐘。加入上述步驟a)制備的氯甲基酯(0.13g，0.45mmol)，并在室溫下攪拌50分鐘。水性處理，隨后通過閃式色譜純化得到[N-叔丁氧羰基-3-氨基環(huán)己烷羧酸]-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(產(chǎn)率-95％)。
c)在室溫下，用在CH2Cl2中的THF處理50分鐘，除去上述步驟b)的化合物的叔丁氧羰基保護(hù)基。用氮?dú)饬髡舭l(fā)THF和CH2Cl2。HPLC純化該殘留物得到3-氨基-環(huán)己烷羧酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯三氟乙酸鹽(產(chǎn)率-57％)。
b)加入磷酸二氫鈉一水合物(79mg，0.57mmol)的水溶液(1ml)到0℃下的磷酸二芐酯4-甲?；?苯基酯(0.89mg，2.32mml)(得自上述步驟a))的MeCN(10ml)溶液中。加入過氧化氫(0.24ml，2.4mmol，30％在水中的溶液)，隨后是亞氯酸鈉(315mg，3.5mmol)的水溶液(2ml)。在0℃下攪拌該反應(yīng)混合物1小時，然后溫至室溫2小時。加入硫代硫酸鈉(100mg)，劇烈攪拌該反應(yīng)混合物15分鐘。加入水并用EtoAc萃取該混合物。用水洗滌該有機(jī)萃取物，干燥(MgSO4)和濃縮得到淺黃色蠟狀固體磷酸二芐酯4-羧基-苯基酯(880mg，94％)。
c)加入磷酸二芐酯4-羧基-苯基酯(205mg，0.5mmol)(得自步驟b))的CH2Cl2(2ml)溶液到1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(Aldrich)(149mg，0.78mmol)和二甲基氨基吡啶的CH2Cl2(5ml)溶液中。5分鐘后，加入實(shí)施例1a所制的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(215mg，0.5mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液并在室溫下攪拌3小時。在CH2Cl2和水之間分配該所得的混合物并用水洗滌該有機(jī)萃取物。用CH2Cl2萃取含水層。合并有機(jī)萃取物，干燥(MgSO4)并濃縮。通過使用5％-10％EtoAc-CH2Cl2的硅膠色譜純化該殘留物，得到橙色泡沫狀物4-(二-芐氧基-磷酰氧基)-苯甲酸3-(1，6-二甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(179mg，44％)。
d)加入1，4-環(huán)己二烯(0.12ml，1.26mmol)(Aldrich)到4-(二-芐氧基-膦酰氧基)-苯甲酸3-(1，6-二甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(100mg，0.12mmol)(得自步驟c))和Pd/C(37mg，10％)(在THF(6ml)和乙醇(0.3ml)的混合物中)的混合物中。將該反應(yīng)混合物溫至55℃20分鐘。冷卻該反應(yīng)混合物至室溫，硅藻土過濾，用CH2Cl2洗滌并濃縮。在0℃下，在MeCN和水中溶解該殘留物。加入1N的氫氧化鈉(2.4ml，2.4mmol)并凍干該混合物。通過HPLC用5-50％MeCN-水進(jìn)一步純化該混合物。凍干得到橙色粉末4-膦酰氧基-苯甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯單鈉鹽(60mg，74％)。實(shí)施例15[[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基]甲氧羰基]-4-苯基-O-甲基聚乙二醇500a)在無水THF(100ml)溶解無水PEG-500單甲醚(18.36g，33mmol)，乙基-4-羥基苯甲酸酯(5.0g，30mmol)和三苯膦(17.34g，66mmol)，并在氬氣下冷卻至0℃。向其中緩慢加入在無水THF(10ml)中的偶氮二羧酸二乙酯(12.95ml，83mmol)。然后，將所得的混合物溫至50℃16小時。在氬氣下將該混合物冷卻至0℃，加入在無水THF(5ml)中的偶氮二羧酸二乙酯(6ml)。在50℃加熱該混合物24小時。蒸發(fā)溶劑并通過用1∶1 CH2Cl2-己烷，CH2Cl2，50％乙醚/-CH2Cl2，和乙醚的硅膠色譜純化該殘留物，得到9克粗制的乙基-4-O-甲基聚乙二醇500-苯甲酸酯油狀物，5.4g橙色油(3/2mol％三苯膦/產(chǎn)品)，和4.9g(約58％的總收率)橙色油(5/4mol％三苯膦/產(chǎn)品)。
b)加入6N NaOH(13.8ml，83mmol)到粗制的乙基-4-O-甲基聚乙二醇500-苯甲酸酯(4.90g，5/4mol％三苯膦/產(chǎn)品)(得自步驟a)在甲醇(10ml)和水(15ml)中的溶液中，并將所得的溶液加熱到65℃2小時。濃縮該溶液并在30％CH2Cl2/乙酸乙酯和水之間分配。冷卻該含水層到0℃并用1NHCl酸化到pH3.0。用CH2Cl2萃取該混合物，干燥(MgSO4)該有機(jī)萃取物。蒸發(fā)有機(jī)溶劑給出黃色蠟狀的殘留物粗制的4-O-甲基聚乙二醇500-苯甲酸(2.3g，49％三苯膦/產(chǎn)品)。(含有20-30％摩爾過量的PEG 500)。
c)在室溫下，將粗制的4-O-甲基聚乙二醇500-苯甲酸(679mg，1mmol)(得自步驟b))在無水THF(5ml)中的溶液加入到1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(300mg，1.56mmol)(Aldrich)和二甲基氨基吡啶(279mg，2.28mmol)的無水THF(5ml)溶液。5分鐘后，加入實(shí)施例1a所制的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(215mg，0.5mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液。在室溫下攪拌該混合物4小時。加入水并用CH2Cl2萃取該混合物。用水洗滌該有機(jī)萃取物，干燥(MgSO4)并濃縮。通過使用MeCN/水的HPLC純化該殘留物得到橙色油物[[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基]甲氧羰基]-4-苯基-O-甲基聚乙二醇500(490mg，47％)。實(shí)施例16碳酸烯丙基酯3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯在90ml THF中溶解200mg(0.47mmol)實(shí)施例1a制備的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮并用300mg(2.5mmol)的4-甲基氨基吡啶(DMAP)處理。向此5℃的溶液中加入90mg(0.75mmol)的氯甲酸烯丙基酯。趁冷滴加300mg(2.4mmol)的1，5-二氮雜二環(huán)(4，3，0)壬-5烯(DBN)(Aldrich)。在20℃下攪拌14小時。蒸發(fā)溶劑，并用硅膠色譜和EtOAc/己烷洗脫純化該混合物，得到碳酸烯丙基酯3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(熔點(diǎn)191-194℃)。實(shí)施例17(2-二甲基氨基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯在THF(10ml)中溶解(200mg，0.47mmol)實(shí)施例1a制備的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮。在冰浴中冷卻所得的紅色溶液。滴加二(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(0.56ml，0.56mmol，在THF中的1M溶液)到該溶液中，給出紅色懸浮液。10分鐘后，加入碳酸雙(對硝基苯基)酯(200mg，0.66mmol)。在0℃下攪拌所得的溶液20分鐘。加入在THF(2ml)中的二乙基氨基乙基胺(90mg，0.78mmol)。繼續(xù)攪拌2小時。蒸發(fā)該混合物，并通過閃式色譜純化該殘留物得到(2-二甲基氨基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯。實(shí)施例18[2-(2-羥基-乙氧基)-乙基]-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯用類似于實(shí)施例17的方法，從1-氨基-2-乙氧基-乙醇(Aldrich)制備此化合物(45mg，17％)。實(shí)施例19(2-羥基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯滴加n-BuLi(0.96ml，1.54mmol，1.6M的己烷中的溶液)到0℃下的實(shí)施例1a制備的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(600mg，1.54mmol)的THF(30ml)溶液中。十分鐘后，加入碳酸雙(對-硝基苯基)酯(600mg，1.96mmol)。在0℃下攪拌該溶液20分鐘。加入1-氨基乙醇(128mg，2.10mmol)的溶液。在0℃下攪拌所得的混合物30分鐘。加入含水的NH4Cl，并用EtOAc萃取該混合物。用鹽水洗滌該有機(jī)萃取物，MgSO4干燥。蒸發(fā)溶劑，并通過用1∶1-3∶2的EtOAc/己烷的硅膠色譜純化該殘留物，得到(2-羥基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(339mg，47％)。實(shí)施例20(2-膦酰氧基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯a)加入三苯膦(95mg，0.36mmol)和磷酸二芐酯(101mg，0.36mmol)到實(shí)施例19制備的(2-羥基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(150mg，0.289mmol)的THF(6ml)溶液中。在-78℃冷卻該混合物。在5分鐘內(nèi)滴加偶氮二羧酸二乙酯(0.057ml，0.36mmol)。除去冷卻浴，過夜攪拌該混合物。然后，蒸發(fā)該混合物。并通過用2∶1-4∶1的EtOAc/己烷的硅膠色譜純化該殘留物，得到[2-雙-芐氧基-磷酰氧基]-乙基]-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(121mg，54％)。
b)加入Pd/C(33mg，10％)和1，4-環(huán)己二烯(0.12ml，1.27mmol)到[2-雙-芐氧基-磷酰氧基]-乙基]-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(115mg，0.148mmol)在THF(5ml)和EtOH(0.25ml)的混合物中的溶液中。將該混合物加熱到50-55℃30分鐘。硅藻土過濾所得的混合物，THF洗滌，蒸發(fā)該濾液。在EtOH(10ml)和CH3CN(10ml)的混合物中溶解該殘留物。加入0.1N NaOH，并將pH調(diào)節(jié)到8.2。加入水(10ml)以溶解該沉淀物。真空除去有機(jī)溶劑，凍干該紅色溶液得到橙色粉末(2-膦酰氧基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯(59mg，62％)。實(shí)施例213-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(2-二乙基-乙基)-酰胺滴加雙(三甲基甲硅烷)酰胺鋰(0.55ml，0.55mmol，1M的THF中的溶液)到冷卻的3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮(200mg，0.5mmol)[參見EP專利03288026]的THF(7ml)溶液中。攪拌該所得的紅色懸浮液15分鐘。加入碳酸雙(對硝基苯基)酯(213mg，0.7mmol)。在0℃下攪拌該溶液0.5小時。加入在THF(2ml)中的二乙基氨基乙基胺(69.7mg，0.6mmol)，并持續(xù)攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑，并用閃式色譜純化該殘留物得到3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(2-二乙基-乙基)-酰胺(28mg，10％)。實(shí)施例223-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(6-二甲基氨基-己基)-酰胺用實(shí)施例21的方法，從二甲基氨基己胺制備此化合物(67mg，24％)。實(shí)施例233-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(4-羥基丁基)-酰胺滴加正丁基鋰(0.86ml，1.375mmol，1.6M的己烷中的溶液)到冷卻的3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-(1-甲基-6-硝基-3-吲哚基)-1H-吡咯-2，5-二酮(500mg，1.25mmol)[參見EP專利03288026]的THF(7ml)溶液中。攪拌該所得的紅色懸浮液15分鐘。加入碳酸雙(對硝基苯基)酯(532mg，1.75mmol)。在0℃下攪拌該溶液1小時。加入在THF(4ml)中的4-氨基丁醇(167mg，1.875mmol)，并持續(xù)攪拌2小時。蒸發(fā)溶劑，并用閃式色譜純化該殘留物得到橙色固體3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(4-羥基丁基)-酰胺(280mg，43％)。實(shí)施例24磷酸單-(4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基)酯鈉鹽a)加入三苯膦(0.86g，3.29mmol)和磷酸二芐酯(0.91g，3.29mmol)到實(shí)施例23制備的3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(4-羥基丁基)-酰胺(實(shí)施例23制備，1.41g，2.74mmol)的THF(50ml)溶液中。在-78℃冷卻該混合物。在5分鐘內(nèi)滴加偶氮二羧酸二乙酯(0.057ml，0.36mmol)。除去冷卻浴，2小時后，蒸發(fā)該混合物。通過用2∶1的EtOAc/己烷，然后EtOAc的硅膠色譜該殘留物得到磷酸二芐基酯4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基酯(1.76g，83％)。
b)加入Pd/C(0.5g，10％)和1，4-環(huán)己二烯(1.84ml，19mmol)到磷酸二芐基酯4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基酯(1.76g，2.27mmol)(來自上述步驟a))在THF(75ml)和EtOH(3.8ml)的混合物中的溶液中。將該混合物加熱到50-55℃30分鐘。TLC(EtOAc)顯示僅剩有痕量的磷酸二芐基酯4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基酯。硅藻土過濾所得的混合物，蒸發(fā)該濾液。在EtOH(100ml)和CH3CN(100ml)的混合物中溶解該殘留物，并用0.2N NaOH堿化到pH＝8.2。加入水(50ml)以溶解該沉淀物。真空除去有機(jī)溶劑，凍干該紅色溶液得到粗產(chǎn)物(1.2g)。HPLC(10％-90％CH3CN-H2O)純化該殘留物得到紅色粉末磷酸單-(4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基)酯鈉鹽(0.49g，34％)。實(shí)施例25O-[2-[[[2，5-二氫-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基]甲氧基]羰基]甲基]-O’-甲基聚乙二醇2000 將在四氫呋喃(120mL)中的平均分子量約2000(Aldrich)(4.4g，2.2mmol)的聚(乙二醇)甲酯溫至35-40℃，并向其中加入氫化鈉(0.6g，60％，15mmol)，并另外攪拌該混合物15分鐘。在5分鐘內(nèi)，分兩批加入溴乙酸叔丁酯(1.2g，約6.2mmol)，并在45-50℃下加熱該混合物4小時。冷卻該混合物到30℃，用乙醚(100mL)稀釋，趁熱硅藻土過濾，并用四氫呋喃洗滌濾餅。蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，硅膠色譜該殘留物。用三氟乙酸(75mL)處理類似制備的純化的叔丁酯(12.5g)，在室溫下攪拌90分鐘。蒸發(fā)該溶液，從冷乙醚中結(jié)晶得到9.0克甲氧基PEG2000乙酸。
用草酰氯(10mL)處理甲氧基PEG2000乙酸(9.0g，4.5mmol)在二氯甲烷(50mL)中的溶液，在輕微回流下加熱15分鐘，隨后加入痕量的二甲基甲酰胺(0.1mL)。繼續(xù)回流另外的15分鐘，加入甲苯(50mL)，蒸發(fā)除去揮發(fā)性物質(zhì)。將殘留物溶解在二氯甲烷(50mL)中，并加入到-50℃下的1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮(1.93g，4.5mmol)(實(shí)施例1a制備的)和4-二甲基氨基吡啶(1.1g，9mmol)在二氯甲烷(25mL)中的淤漿中。除去冷卻浴，在室溫下攪拌該混合物2小時，注入在二氯甲烷中的硅膠(200g)上。色譜純化并從四氫呋喃-乙醚中結(jié)晶提供紅色固體O-[2-[[2，5-二氫-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基]甲氧基]羰基]甲基]-O’-甲基聚乙二醇2000(收率63％)。
在各孔中加入MTT(3-(4-5甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑鎓；噻唑藍(lán))得到1mg/ml的終濃度。然后，在37℃下溫育該平板21/2-3小時。然后，除去含有MTT的培養(yǎng)基，向各孔中加入50μl的100％乙醇以溶解formazan。然后，用自動讀板儀(Bio-tek微板閱讀儀)讀出吸收度。用Reed和Munsch方程，參見Am.J.Hygiene Vol.27第493-497頁，1938計(jì)算IC50。
表1中給出了前述體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
表1中的各化合物的IC50≤1.00μm。
表1 式I的代表化合物的血漿轉(zhuǎn)化測定表明這些化合物的確在對治療用途合適的時間段內(nèi)產(chǎn)生藥理活性的代謝物。此外，對式I的某些代表化合物的穩(wěn)定性檢測還表明這些化合物在典型地用于靜脈內(nèi)給藥的治療藥物的類型的溶液中具有中等的到良好的穩(wěn)定性。下表II給出了這些血漿轉(zhuǎn)化和穩(wěn)定性檢測的結(jié)果。因此，這些化合物適于通過連續(xù)輸注的方式對患者給藥。
表2
*N/D＝未做
2.用20％的聚乙烯吡咯酮K30溶液(項(xiàng)目4)將來自步驟1的粉末混合物制粒。
3.在50℃干燥來自步驟2的顆粒。
4.令步驟3獲得的顆粒通過合適的研磨設(shè)備。
5.加入項(xiàng)目5到步驟4的研磨的顆粒中并混合3分鐘。
6.在合適的壓力機(jī)上壓制來自步驟5的顆粒。
2.加入項(xiàng)目4和5并混合3分鐘。
3.填充到合適的膠囊。實(shí)施例29注射液/乳劑
*化合物A代表本發(fā)明的化合物制備方法1.在項(xiàng)目2中溶解項(xiàng)目1。
2.加入項(xiàng)目3，4和5到項(xiàng)目6中并混合直至分散，然后均化。
3.將步驟1獲得的溶液加入步驟2獲得的混合物中并均化直至該分散液透明。
4.0.2um濾膜無菌過濾并裝瓶。實(shí)施例30注射液/乳劑
*化合物A代表本發(fā)明的化合物制備方法1.在項(xiàng)目2中溶解項(xiàng)目1。
2.加入項(xiàng)目3，4和5到項(xiàng)目6中并混合直至分散，然后均化。
3.將步驟1獲得的溶液加入步驟2獲得的混合物中并均化直至該分散液透明。
4.0.2um濾膜無菌過濾并裝瓶。
盡管已參照具體的和優(yōu)選的實(shí)施方案舉例說明了本發(fā)明，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員會理解通過常規(guī)的實(shí)驗(yàn)和實(shí)施本發(fā)明可進(jìn)行變更和改進(jìn)。因此，本發(fā)明并不受前述說明書的限制，但是受所附的權(quán)利要求書及其等價物的限定。
權(quán)利要求
1.下式的化合物 及其藥用鹽，其中R選自-CH2OPO3R1R2，-CH2OH，-CH2OCOR3，-CH2OCO2R3，-CH2OCONHR3，和-CONHR3；R1和R2選自H、Na和NH4并且是相同的，除非R1或R2是H，在這種情況下，另一個可以是不同的，或者備選地，R1和R2一起代表鈣；R3選自任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的烷基；任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的鏈烯基；任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的環(huán)烷基；雜環(huán)基，其中當(dāng)包括N作為雜原子時，該N任選地可被低級烷基和-COR7取代，芳基，其任選地被一個或多個選自CO2R4，羥基，烷氧基，聚乙二醇，OPO3R1R2，和烷基的取代基取代，其中所述烷基本身可被羥基、烷氧基、羧基和取代的氨基取代，條件是，當(dāng)芳基代表吡啶時，該氮可被低級烷基取代；R4選自H，Na，和低級烷基；R5和R6各自獨(dú)立地選自H，低級烷基，和-COR7，或者備選地，基團(tuán)-NR5R6一起形成5或6元的雜環(huán)環(huán)；和R7是任選地可被羧基，聚乙二醇，聚乙二醇，取代的氨基取代的低級烷基。
2.下式的化合物 及其藥用鹽，其中R選自-CH2OPO3R1R2，-CH2OCOR3，-CH2OCO2R3，-CH2OCONHR3，和-CONHR3；R1和R2選自H、Na和NH4并且是相同的，除非R1或R2是H，在這種情況下，另一個可是不同的，或者備選地，R1和R2一起代表鈣；R3選自任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的烷基；任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的鏈烯基；任選地被一個或多個選自-CO2R4，-NR5R6，聚乙二醇，-OPO3R1R2，羥基，烷氧基和芳基的取代基取代的環(huán)烷基；雜環(huán)基，其中當(dāng)包括N作為雜原子時，該N任選地可被低級烷基和-COR7取代，芳基，其任選地被一個或多個選自CO2R4，羥基，烷氧基，聚乙二醇，OPO3R1R2，和烷基的取代基取代，其中所述烷基本身可被羥基，烷氧基，羧基和取代的氨基取代，條件是，當(dāng)芳基代表吡啶時，該氮可被低級烷基取代；R4選自H，Na和低級烷基；R5和R6各自獨(dú)立地選自H，低級烷基，和-COR7，或者備選地，基團(tuán)-NR5R6一起形成5或6元的雜環(huán)環(huán)；和R7是任選地可被羧基，聚乙二醇，聚乙二醇，取代的氨基取代的低級烷基。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R選自-CH2OPO3R1R2和-CH2OCOR3。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中R是-CH2OCO-吡啶，其中該吡啶上的N原子被低級烷基取代。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中該吡啶上的N原子被甲基或乙基取代。
6.權(quán)利要求2的化合物，其中R1和R2獨(dú)立地選自H和Na。
7.權(quán)利要求2的化合物，其中R3是含有任選地可被-COR7取代的至少一個N原子的雜環(huán)基。
8.權(quán)利要求2的化合物，其中R3是被-OPO3R1R2取代的芳基，并且R1和R2獨(dú)立地選自H和Na。
9.權(quán)利要求2的化合物，其中R3是被選自-CO2Na，聚乙二醇和-CH2CH2N(CH2CH2)2的基團(tuán)取代的芳基。
10.權(quán)利要求2的化合物，其中R3是被-CO2Na取代的低級烷基。
11.權(quán)利要求2的化合物，其中基團(tuán)NR5R6一起形成5或6元的雜環(huán)環(huán)。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中基團(tuán)NR5R6選自哌啶或吡咯烷。
13.權(quán)利要求2的化合物，其中R5和R6各自獨(dú)立地選自H、甲基和乙基。
14.權(quán)利要求2的化合物，其中R7是被聚乙二醇取代的乙基。
15.權(quán)利要求2的化合物，其中R是-CH2OCOR3，并且R3是被具有分子量約750到約5000道爾頓的聚乙二醇取代的乙基。
16.權(quán)利要求2的化合物，其中聚乙二醇具有約750到約5000道爾頓的分子量。
17.化合物，選自磷酸單-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基]鈉鹽；1-羥甲基-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；異煙酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯；丁-2-烯二酸單-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基]酯；癸酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯；3-氨基-環(huán)己烷羧酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯三氟乙酸鹽；哌啶-4-羧酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯乙酸鹽；哌啶-4-羧酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯鹽酸鹽；2-氨基-2-甲基-丙酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯鹽酸鹽；1-甲基-3-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲氧基羰基]-吡啶鎓三氟乙酸鹽；和O-[2-[[4-[[[2，5-二氫-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基]甲氧基]羰基]-1-哌啶基]羰基]乙基]-O’-甲基聚乙二醇1000。
18.化合物，選自4-膦酰氧基-苯甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯單鈉鹽；[[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基]甲氧基羰基]-4-苯基-O-甲基聚乙二醇500；碳酸烯丙基酯3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯；(2-二甲基氨基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯；[2-(2-羥基-乙氧基)-乙基]-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯；(2-羥基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯；(2-膦酰氧基-乙基)-氨基甲酸3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基酯；3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(2-二乙基氨基-乙基)-酰胺；3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(6-二甲基氨基-己基)-酰胺；3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羧酸(4-羥基丁基)-酰胺；和磷酸單-(4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基)酯鈉鹽。
19化合物，選自磷酸單-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲基]鈉鹽，O-[2-[[2，5-二氫-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基)甲氧基羰基)乙基)-O’-甲基聚乙二醇2000，磷酸單-(4-{[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-羰基]-氨基}-丁基)酯鈉鹽，三氟乙酸1-甲基-3-[3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-2，5-二氫-吡咯-1-基甲氧基羰基]-吡啶鎓鹽；和O-[2-[[[2，5-二氫-3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧代-1H-吡咯-1-基]甲氧基]羰基]甲基]-O’-甲基聚乙二醇2000。
20.一種藥物組合物，含有有效量的權(quán)利要求1的化合物作為活性成分和藥用載體或賦形劑。
21.權(quán)利要求20的藥物組合物，其適于胃腸外給藥。
22.治療有效量的按照權(quán)利要求1的化合物治療細(xì)胞增殖性疾病的用途。
23.權(quán)利要求22的用途，其中該細(xì)胞增殖性疾病是腫瘤。
24.權(quán)利要求23的用途，其中的腫瘤是實(shí)體瘤。
25.權(quán)利要求23的用途，其中的實(shí)體瘤是乳腺癌，結(jié)腸癌或肺癌。
全文摘要
公開了具有式(I)的新型取代的吡咯類化合物。這些化合物及其藥用鹽適于以連續(xù)的輸注溶液對患者給藥和用于治療和/或控制細(xì)胞增殖性疾病,尤其是癌癥。也公開了含有上述化合物的藥物組合物及其治療和/或控制癌癥的用途。
文檔編號A61K31/404GK1378545SQ00813985
公開日2002年11月6日 申請日期2000年10月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月12日
發(fā)明者納德·佛投赫, 諾爾曼·孔, 埃米莉·愛軍·劉, 艾倫·約翰·勒韋伊, 約翰·吉爾福伊爾·吉爾·馬林 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司