專利名稱：槐屬苷的抗腫瘤作用及其藥物制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明是關于槐屬苷(Sophoricoside，染料木素-4’-葡萄糖苷)在抗腫瘤藥物方面的應用及其藥物制劑，屬于中藥領域。
槐屬苷(Sophoricoside)的化學結構式染料木素-4′-葡萄糖苷(genistein-4′-glucoside) R＝β-D-Glu
本發(fā)明的目的之一是提供了槐屬苷的藥物制劑；本發(fā)明的目的之二是提供了槐屬苷的抗腫瘤新用途。
本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的本發(fā)明的藥物制劑含有1％-99％的槐屬苷和99％-1％的賦形劑(包括其它配用的藥物)，優(yōu)選含有30％-80％的槐屬苷和70％-20％的賦形劑(包括其它配用的藥物)，最好含有60％-70％的槐屬苷和40％-30％的賦形劑(包括其它配用的藥物)。
按藥劑學方法，可以將本發(fā)明的槐屬苷制備成多種臨床藥物劑型作為抗腫瘤藥物，包括口服制或非腸道給藥的劑型。所說的口服制劑選于片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑中的任何一種；所說的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給劑型當中的一種。
本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的輔料是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑等。本發(fā)明的抗腫瘤藥物中的其它配伍用的藥物，指的是以有效劑量的槐屬苷為一定的藥物原料，再配伍其它已允許合用的中藥或化學藥品。
本發(fā)明的槐屬苷藥物制劑具有抗腫瘤作用，是通過以下的藥效學試驗得到證實的。實驗例1槐屬苷對體外腫瘤細胞的抑制作用細胞 人胃低分化粘液腺癌細胞(MGC-803)、人宮頸癌細胞(Hela)、人黑色素瘤細胞(A375-S2)、人小細胞肺癌(NCI-H446)、人乳腺癌細胞(MCF-7)、人結腸癌細胞(SWILLC)、人星形膠質瘤細胞(U251)、人胃癌細胞(SGC-7901)、人紅白血病細胞(K562)、人肝癌細胞(BEL-7402)、早幼粒白血病細胞(HL-60)等十一種細胞系均購自長春腫瘤醫(yī)院。
藥品及試劑槐屬苷(Sophoricoside)由吉林天藥科技股份有限公司天然藥物所中藥化學室提供，淡黃色粉末狀結晶；四甲基偶氮唑鹽(MTT)為Sigma公司產品；青霉素G鉀鹽為Sigma公司產品；硫酸鏈霉素Sigma公司產品；HEPES為Sigma公司產品；DMSO為Sigma公司產品；胰酶為Difco公司；新生牛血清(FBS)為北京元亨圣馬生物技術研究所產品；RPMI-1640培養(yǎng)基為Hyclone公司產品。
儀器CK2TRC-3熒光倒置顯微鏡，日本OLYMPUS產品；D-63450-CO2培養(yǎng)箱，德國Hera公司產品；FCANF129004酶標儀，澳大利亞TECAN公司產品。
實驗方法MTT法 十一種人的腫瘤細胞株按常規(guī)方法培養(yǎng)傳代，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。將細胞以1×105個/mL濃度接種于96孔板(100μL/孔)，培養(yǎng)12h后，實驗組加入各濃度槐屬苷(或5-FU作為陽性對照組)100μL/孔，陰性對照組加入培養(yǎng)液100μL/孔，每組各設4個平行孔，并分別設空白孔(即只加入藥液和培養(yǎng)液，不加細胞)以調零。槐屬苷組分別培養(yǎng)20、44(由于5-FU是抗代謝抗腫瘤藥物，故培養(yǎng)44h)、68h后，加入5mg/mLMTT 20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清，每孔加入DMSO150μL，混勻，酶標儀(λ＝492nm)測定吸光度(A492)，利用SPSS統(tǒng)計軟件，計算細胞死亡率，求取IC50。
實驗結果結果表明，經(jīng)SPSS軟件統(tǒng)計，槐屬苷對A375-S2、SGC-7901、BEL-7402、MCF-7、K562、Hela、MGC-803、NCI-H446、SWILLC、U251、HL-60等十一種腫瘤細胞均有不同程度的抑制作用，不同濃度槐屬苷對十一種腫瘤細胞的抑瘤率、IC50和5-FU對各細胞的IC50值詳見表1和2。從表1和表2中可以看出，槐屬苷對A375-S2、SGC-7901、MCF-7、Hela和MGC-803細胞的生長抑制作用較強，而對U251、SWILLC細胞的敏感性較差，表明槐屬苷對腫瘤細胞有一定的選擇性抑制作用。此外，比較槐屬苷和5-FU對各細胞的生長抑制曲線，從曲線斜率可見5-FU對細胞的作用較緩和(即曲線的坡度較小)，而槐屬苷對細胞的作用較急劇(即曲線的坡度較大)，槐屬苷和5-FU可能具有不同抗腫瘤的作用機制。
表1不同濃度的槐屬苷對十一種腫瘤細胞的抑瘤率

表2 MTT法測定槐屬苷和5-FU對十種腫瘤細胞的IC50

實驗例2槐屬苷對實體腫瘤細胞的抑制作用動物 昆明種小白鼠，動物合格證編號10-1023；C57BL/6純系小鼠，動物合格證編號10-1025。均由白求恩醫(yī)科大學實驗動物室提供，體重18-22g，雌雄兼用。
瘤株 S180、Hep·A22、ESC、Lewis均由中國醫(yī)學科學院藥物所引進，中藥所傳代保存瘤株。
藥品 環(huán)磷酰胺，南通第二制藥廠生產，批號980301-1。替加氟片(呋喃氟尿嘧啶片)濟南制藥廠生產，批號990412?；睂佘沼杉痔焖幙萍脊煞莨咎烊凰幬镅芯克峁?。
實驗方法 取荷瘤傳代鼠脫頸椎處死，固定于板上。用碘酊及酒精消毒動物皮膚切開皮膚，選擇腫瘤生長良好，無壞死或液化的瘤組織，按一定比例加入無菌生理鹽水，用組織勻漿器制成含2500萬以上/ml的細胞懸液，于小鼠腋窩皮下接種0.2ml/只，接種部位皮膚先用碘酊及酒精消毒。每個瘤株，每次試驗接種60只雄性鼠，重復試驗時改用雌性，接種后次日隨機分組，每組12只，試驗設高、中、低三個劑量及試驗對照組和陽性藥組，其中高、中、低劑量組分別給予槐屬苷0.8、0.4、0.2g/kg體重，陽性藥組按20mg/kg體重給予環(huán)磷酰胺，試驗對照組給相應體積的常水。灌胃給藥，每天一次，給藥10天后處死，稱體重，摘瘤稱重，計算抑瘤率，實驗結果見表3-6。
結果上述實驗結果表明槐屬苷對小鼠S180、Hep·A22、ESC及Lewis等實體瘤均有明顯的抑制作用，荷瘤小鼠給藥后，對體重增長無影響，表明該藥無明顯毒副作用。
表3槐屬苷對小鼠S180的抑制作用三次重復實驗結果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重實驗次數(shù) 組別 瘤重抑制率(％)(g/kg×天) (只) (g)(g)第 對照組1226.0±3.4 1.90±0.65一 環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 1122.7±3.6 0.75±0.3360.53***次 槐屬苷 0.8×10 1225.6±3.7 1.02±0.5146.32**試 槐屬苷 0.4×10 1225.8±3.6 1.10±0.4542.11**驗 槐屬苷 0.2×10 1225.9±3.2 1.28±0.6232.63*第 對照組 1226.1±3.9 1.90±0.62二 環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 1223.0±3.7 0.73±0.3061.58***次 槐屬苷 0.8×10 1225.9±3.8 0.96±0.4049.47***試 槐屬苷 0.4×10 1225.6±3.8 1.24±0.4934.74**驗 槐屬苷 0.2×10 1226.0±3.4 1.38±0.5427.37*第 對照組 1225.4±2.9 1.89±0.61三 環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 1222.4±2.7 0.78±0.2858.73***次 槐屬苷 0.8×10 1225.3±3.5 1.08±0.5242.86**試 槐屬苷 0.4×10 1225.0±3.2 1.10±0.44 41.80**驗 槐屬苷 0.2×10 1225.1±3.4 1.31±0.58 30.69*注與對照組比較，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05，以下表同表4 槐屬苷對小鼠Hep.A22的抑制作用三次重復實驗結果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重 瘤重抑制率實驗次數(shù) 組別 (g/kg×天)(只) (g) (g) (％)第對照組 1225.1±3.3 1.93±0.58一環(huán)磷酰胺 20mg/kg×101222.5±2.1 0.77±0.26 60.10***次槐屬苷 0.8×10 1224.5±3.5 0.95±0.40 50.78***試槐屬苷 0.4×10 1224.1±3.9 1.26±0.40 34.72**驗槐屬苷 0.2×10 1224.0±3.8 1.43±0.61 25.91第對照組 1225.0±3.0 1.92±0.61二環(huán)磷酰胺 20mg/kg×101221.9±3.0 0.71±0.31 63.02***次槐屬苷 0.8×10 1224.5±3.0 1.00±0.43 47.92***試槐屬苷 0.4×10 1224.2±3.4 1.15±0.52 40.10**驗槐屬苷 0.2×10 1225.1±4.3 1.40±0.58 27.08*第對照組 1225.2±4.5 1.95±0.64三環(huán)磷酰胺 20mg/kg×101122.6±3.1 0.75±0.31 61.54***次槐屬苷 0.8×10 1224.0±3.7 0.96±0.50 50.77***試槐屬苷 0.4×10 1225.8±3.1 1.26±0.57 35.38*驗槐屬苷 0.2×10 1225.5±4.2 1.37±0.56 29.74*表5槐屬苷對小鼠ESC的抑制作用三次重復實驗結果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重 瘤重抑制率實驗次數(shù) 組別(g/kg×天) (只)(g) (g) (％)第對照組12 24.6±4.0 2.02±0.67一環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 21.7±2.3 0.70±0.22 65.35***次槐屬苷 0.8×10 12 25.3±3.6 1.02±0.45 49.50***試槐屬苷 0.4×10 12 24.8±3.3 1.16±0.50 42.57**驗槐屬苷 0.2×10 12 24.6±3.7 1.43±0.61 29.21*第對照組12 25.3±3.5 2.11±0.65二環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 11 23.5±3.2 0.85±0.44 59.72***次槐屬苷 0.8×10 11 25.3±2.9 1.02±0.43 51.66***試槐屬苷 0.4×10 12 25.6±3.2 1.19±0.48 43.60**驗槐屬苷 0.2×10 12 26.2±3.0 1.33±0.57 36.97**第對照組12 25.3±3.1 2.01±0.71三環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 22.4±2.7 0.79±0.34 60.70***次槐屬苷 0.8×10 12 25.0±2.9 1.22±0.66 39.30**試槐屬苷 0.4×10 12 24.9±3.5 1.22±0.51 39.30**驗槐屬苷 0.2×10 12 25.1±3.5 1.44±0.61 28.36*
表6槐屬苷對C57小鼠Lewis的抑制作用三次重復實驗結果(X±SD)給藥劑量及天數(shù) 動物數(shù) 荷瘤鼠體重 平均瘤重 瘤重抑制率實驗次數(shù) 組別 (g/kg×天) (只)(g) (g) (％)第對照組12 22.4±2.4 1.69±0.54一環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 20.9±2.0 0.58±0.17 65.68***次槐屬苷 0.8×10 10 22.6±2.4 0.74±0.31 56.21***試槐屬苷 0.4×10 11 22.0±2.5 0.86±0.36 49.11***驗槐屬苷 0.2×10 12 22.7±2.1 0.98±0.37 32.01**第對照組12 22.3±2.0 1.77±0.60二環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 21.6±2.3 0.53±0.13 70.06***次槐屬苷 0.8×10 11 23.1±2.2 0.76±0.28 57.06***試槐屬苷 0.4×10 12 22.3±2.0 0.92±0.38 48.02***驗槐屬苷 0.2×10 11 22.9±2.1 1.05±0.50 40.68**第對照組12 22.9±2.3 1.65±0.55三環(huán)磷酰胺 20mg/kg×10 12 22.3±2.0 0.58±0.16 64.85***次槐屬苷 0.8×10 12 22.8±2.1 0.77±0.31 53.33***試槐屬苷 0.4×10 12 22.4±2.1 0.93±0.37 43.64**驗槐屬苷 0.2×10 12 22.5±2.0 1.05±0.43 36.36**上述離體試驗和整體試驗表明，槐屬苷對離體和整體腫瘤細胞均具有明顯的抑制作用。
具體實施例方式
實施例1片劑的制備槐屬苷1000g，藥用淀粉100g，混合均勻，用適量乙醇作為粘合劑制粒，干燥，經(jīng)整粒機整粒，壓片，每片0.25g，口服，每次1-2片，每日二次。實施例2膠囊劑的制備槐屬苷1000g，藥用淀粉100g，混合均勻，用乙醇作用為粘合劑制濕顆粒，干燥，過120目篩整粒，裝0#膠囊，每粒0.35g，每次口服1-2粒，每日二次。實施例3滴丸制的制備聚乙二醇4000300g，在水浴上熔化，加入槐屬苷原料200g，攪拌均勻，傾入保溫管中，調節(jié)恒溫裝置，使藥液在80-90℃下滴入冷卻過的液體石蠟中(溫度±4℃)，滴完后，將藥丸傾入濾紙上吸干石蠟油，再加入少量滑石粉，混勻，得槐屬苷滴丸10000粒?？诜淮嗡牧?，一日三次，飯后服用。實施例4注射劑的制備槐屬苷30g，丙二醇40ml，聚乙二醇400100ml，注射用水500ml，混合，水浴加熱30分鐘，加苯甲醇80ml，再用注射用水加至1500ml，在超聲波中處理10分鐘，再在水浴上加熱30分鐘，調PH值為5.5-6.5，過濾，灌封，滅菌即得。每支3ml，肌肉注射，一次3ml，一日2次。
權利要求
1.一種藥物制劑，其特征在于含有治療有效劑量的槐屬苷和一種或多種藥學上可接受的藥用賦形劑，或可與槐屬苷組方的其它藥物。
2.根據(jù)權利要求1所述的藥物制劑，其特征在于含有1％-99％的槐屬苷和99％-1％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
3.根據(jù)權利要求2所述的藥物制劑，其特征在于含有30％-80％的槐屬苷和70％-20％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
4.根據(jù)權利要求3所述的藥物制劑，其特征在于含有60％-70％的槐屬苷和40％-30％的藥用賦形劑或其它可組方的藥物。
5.根據(jù)權利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所說的藥物是口服制劑或非腸道給藥的劑型。
6.根據(jù)權利要求5所述的藥物制劑，其特征在于所說的口服制劑選自于片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑當中的任何一種。
7.根據(jù)權利要求5所述的藥物制劑，其特征在于所說的非腸道給藥劑型選自于注射劑、氣霧劑、栓劑或皮下給藥劑型當中的任何一種。
8.槐屬苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。
9.根據(jù)權利要求8的用途，其特征在于所說的抗腫瘤是指抑制腫瘤細胞和實體瘤的生長。
10.根據(jù)權利要求9的用途，其特征在于所說的腫瘤細胞和實體瘤分別為腫瘤細胞是人黑色素瘤細胞、人胃癌細胞、人肝癌細胞、人乳腺癌細胞、人紅白血病細胞、人宮頸癌細胞、人胃癌細胞、人小細胞肺癌、人結腸癌細胞、人神經(jīng)膠質瘤細胞和早幼粒白血病細胞；實體瘤是肉瘤180、肝癌腹水型、艾氏腹水癌或肺癌。
全文摘要
本發(fā)明公開了從槐角等植物中獲得的槐屬苷(Sophoricoside)在抗腫瘤方面的醫(yī)藥新用途，同時也公開了以槐屬苷為制藥原料制備成片劑、膠囊劑、滴丸、注射劑等臨床上可接受的藥物制劑。
文檔編號A61K31/7048GK1437951SQ0310241
公開日2003年8月27日 申請日期2003年1月27日 優(yōu)先權日2003年1月27日
發(fā)明者趙全成, 劉威, 曲文, 赫玉芳 申請人:吉林天藥科技股份有限公司