專利名稱：一種改善斷奶仔豬腸道發(fā)育的針劑溶液的配制方法
一種改善斷奶仔豬腸道發(fā)育的針劑溶液的配制方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于GLP-2針劑溶液的配制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種改善斷奶仔豬腸道發(fā)育的針劑溶液的配制及使用方法。
背景技術(shù)：
對于手術(shù)后行全腸外營養(yǎng)(TPN)的新生仔豬通過頸靜脈滴注的方式給予胰高血糖素樣肽 _2 (Glucagon-like peptide-2, GLP-2)的外源補(bǔ)充,劑量為 500 pmol *kg_1 *h_1, 連續(xù)滴注7d。GLP-2溶液的配制是將humanGLP-2 (hGLP-2)溶解于含O. 1%的人血清白蛋白的O. 9%NaCl滅菌溶液中(Cottrell等,2005);相似的，B urrin等(2005和2008)試驗(yàn)使用連續(xù)靜脈注射的方式按O. 5 ml. kg' r1給TPN仔豬添加外源GLP-2。GLP-2溶液的配制是將hGLP-2 ^33溶解于含O. 5%人血清白蛋白的0.45g/L NaCl溶液中，使其終濃度分別為0.8，1. 6和3. 6 μ g/ml，因此，各處理組的添加劑量分別為2. 5，5.0，和10. O nmol. kg-1 (Burrin 等，2005)。
缺點(diǎn)是針對的動物對象需要限制其行動，還需要動手術(shù)安裝靜脈插管；一般試驗(yàn)條件難以滿足其嚴(yán)格的要求；具有明顯的應(yīng)用限制。發(fā)明內(nèi)容
對于GLP-2的溶解方法,根據(jù)前文我們可以看到，Burrin和Cottrell都采用了血清白蛋白作為承載體來溶解GLP-2這種多肽類物質(zhì)，但是他們的添加方法與我們有所差別，他們采用靜脈滴注的方式，當(dāng)然這不會對仔豬造成應(yīng)激反應(yīng)；然而，本發(fā)明為了克服上文中提到的靜脈滴注的缺陷，將采用注射的方式，若給予含血清白蛋白的GLP-2溶液，則會造成蛋白免疫應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為不安、彈跳和口吐白沫等癥狀，嚴(yán)重者導(dǎo)致動物休克。
因此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題為外源(皮下注射)給予GLP-2以改善動物腸道發(fā)育的方式方法的實(shí)用性、有效性和安全性這三方面的問題。
關(guān)于該針劑口服、皮下注射和肌肉注射的方式的選擇問題，一般口服藥品進(jìn)入全身的血液循環(huán)以前，先經(jīng)過胃腸道中消化液、粘膜、肝藥酶的破壞，有些藥物會被破壞一大半以上，而GLP-2屬于多肽類激素，其發(fā)揮作用的形式必須是33個氨基酸組成的全長序列蛋白，若采用口服方式，GLP-2i_33早已經(jīng)被胃腸蛋白酶、腸肽酶降解，故口服的制劑不可?。?而究竟是皮下還是肌肉注射，我們知道，肌肉注射是從肌肉層慢慢進(jìn)入血液，血管越豐富的部位藥物吸收就越快，而皮下注射是從皮下組織達(dá)到血液，如臨床上胰島素針劑則只能采取皮下注射方式。由于全長的有生物活性的GLP-2i_33進(jìn)入體內(nèi)會被體內(nèi)的二肽基肽酶IV (Dipeptidyl P印tidase-1V，DPP_IV)降解為沒有活性的GLP_23_33形式從而鈍化GLP-2的活性(Drucker等，1997)，且其半衰期很短，因此為了減緩GLP-2進(jìn)入體內(nèi)的速度，我們在仔豬上采用異源即hGLP-2通過皮下注射的方式給予外源GLP-2的補(bǔ)充以抵抗豬體內(nèi)DPP-1V 的降解，連續(xù)注射7d，每天早晚各I次。
本發(fā)明給出的改善斷奶仔豬腸道發(fā)育的針劑溶液的配制方法，其特征在于將hGLP-2凍干粉溶解于pH為7. 4的O. 01 mo I/L磷酸鹽緩沖溶液(PBS溶液)中，待完全溶解后,經(jīng)O. 22 μ m的濾膜過濾除菌。
除菌后可直接使用、一周內(nèi)使用可冷藏保存，或者分裝后于-20°C冷凍保存。
本發(fā)明的有益效果一是GLP-2的完全溶解；二是方便使用；三是沒有應(yīng)激，安全。 用PBS溶液實(shí)現(xiàn)GLP-2的溶解的制劑完全沒有出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，通過取腸樣進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析、 腸重及腸重指數(shù)的測定，試驗(yàn)期間仔豬的采食量、日增重和料肉比都得到了有效地改善，說明采用皮下注射含hGLP-2的PBS溶液是安全有效的。
具體實(shí)施方式
下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面的理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
本實(shí)施例給出的改善斷奶仔豬腸道發(fā)育的針劑溶液的配制方法，其特征在于將 hGLP-2凍干粉溶解于pH為7. 4的O. 01 mo I/L磷酸鹽緩沖溶液(PBS溶液，由市售的pH為 7. 4,0. 01 M的PBS粉劑加超純水配制而得)中，待完全溶解后，經(jīng)O. 22 μ m的濾膜過濾除菌。 配制完成后可直接使用，短期內(nèi)使用可冷藏保存，否則分裝后于-20°C冷凍保存并且不能反復(fù)凍融。
pH為7. 4的O. 01 mol/L磷酸鹽緩沖溶液也可自行配制，例舉配制方法如下用超純水按 1000 ml 的標(biāo)準(zhǔn)量配制準(zhǔn)確稱取 NaCl 8. O g、KCl O. 2 g、Na2HPO4 · 12H20 2. 90 g、 KH2PO4 0. 24 g，溶解于800 ml超純水中，用I mol/L的HCl和NaOH調(diào)節(jié)pH值至7. 4，定容到 1000 ml ο
具體如下
GLP-2的溶解技術(shù)本試驗(yàn)采用hGLP-2凍干粉來源于人工合成(美國康肽生物公司)，若按單只斷奶仔豬6. 8kg初始體重，每次皮下注射體積1. 5ml，連續(xù)7天，每天2 次，每天注射劑量為2nmol/kg初始體重計(jì)，則每次注射hGLP-2的摩爾數(shù)為(6. 8kgX2 nmol -kg^1) /2=6. 8 nmol ;每次滿足注射量應(yīng)溶解的hGLP-2的質(zhì)量應(yīng)該為[6. 8 nmol *相對分子質(zhì)量(即質(zhì)量分?jǐn)?shù)g/mol)]，注意單位的統(tǒng)一和換算；含hGLP-2的PBS溶液終體積為[1. 5ml*注射總次數(shù)]。稱取滿足η頭仔豬連續(xù)7天注射(每天早晚各I次，即14次)的 hGLP-2量[單次注射需要的質(zhì)量*n*14]，溶解于相應(yīng) 體積的PBS溶液中，待完全溶解后，經(jīng) 0.22 um濾膜過濾除菌，切不可高溫高壓滅菌。
為了確認(rèn)本發(fā)明配制方法配制的溶液注射方式的有效性，我們接下來開展了動物試驗(yàn)的驗(yàn)證工作。一方面，我們對采用含0. 1%牛清白蛋白的GLP-2 NaCl溶液的皮下注射方式進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果證實(shí)了我們的猜測，試驗(yàn)動物都表現(xiàn)出強(qiáng)烈的免疫應(yīng)激反應(yīng)，若采用這種外源添加方式，勢必是危險的；而我們用PBS溶液實(shí)現(xiàn)GLP-2的溶解的制劑則完全沒有出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，通過取腸樣進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析、腸重及腸重指數(shù)的測定(表1)，試驗(yàn)期間仔豬的采食量、日增重和料肉比都得到了有效地改善(表2)，說明采用皮下注射含hGLP-2的PBS 溶液是安全有效的，本發(fā)明給出的配制方法實(shí)用、安全、有效。
表I GLP-2對斷奶仔豬各段腸重的影響(kg)
Table I The effect of GLP-2 on weight of each intestinal segment in weaned piglet
權(quán)利要求
1.一種改善斷奶仔豬腸道發(fā)育的針劑溶液的配制方法，其特征在于將hGLP-2凍干粉溶解于PH為7. 4的0.01 mol/L的磷酸鹽緩沖溶液中，待完全溶解后，經(jīng)0.22 iim的濾膜過濾除菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于除菌后直接使用、短期內(nèi)冷藏保存或者分裝后于-20°C冷凍保存。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖溶液由市售的PBS粉劑加超純水配制而得。
全文摘要
本發(fā)明公開了屬于GLP-2針劑溶液的配制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種改善斷奶仔豬腸道發(fā)育的針劑溶液的配制方法。將hGLP-2溶解于pH為7.4的0.01 mol/L的PBS溶液中，待完全溶解后，經(jīng)0.22μm的濾膜過濾除菌，短期內(nèi)可冷藏保存。用PBS溶液實(shí)現(xiàn)hGLP-2的溶解的制劑行仔豬皮下注射完全沒有出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，通過取腸樣進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析、腸重及腸重指數(shù)的測定，試驗(yàn)2周期間仔豬的采食量、日增重和料肉比都得到了有效地改善，說明采用皮下注射含hGLP-2的PBS溶液是安全有效的。
文檔編號A61P1/00GK102988282SQ20121053147
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月11日
發(fā)明者賈剛, 鄧秋紅, 蔣義, 余長松 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)