專利名稱：活性天然產(chǎn)物b用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥和食品技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是涉及一種中藥提取物——活性天然產(chǎn)物用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品的用途，更具體地說(shuō)是涉及一種海洋真菌提取物一一 舌'性天然產(chǎn)物 B,艮口 4,6-Dihydroxy-3-methylene-10-propenyl-2-oxa-spiro[4,5] deC-8-ene-l，7-di0ne，用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
(一 )海洋真菌的研究概況1、概述海洋微生物以其生存于特殊的生物環(huán)境中而具有產(chǎn)生新型生物活性物質(zhì)的巨大潛力。幾十多年來(lái)，從海洋真菌中分離鑒定近600個(gè)結(jié)構(gòu)新穎的次級(jí)代謝產(chǎn)物，許多化合物顯示了良好的抗腫瘤、抗菌和抗病毒活性；另有一些化合物顯示出了獨(dú)特的生理活性，如抗老年癡呆。因此，海洋微生物是近年來(lái)的一個(gè)研究熱點(diǎn)。越來(lái)越多的研究表明，海洋微生物——尤其是那些跟海洋動(dòng)物或海洋植物存在共生或寄生等關(guān)系的微生物——能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)獨(dú)特并具強(qiáng)烈生理活性的代謝產(chǎn)物。而且海洋微生物繁殖快，可利用現(xiàn)代微生物技術(shù)，大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵，有廣闊的應(yīng)用前景。科學(xué)家們預(yù)計(jì)，開(kāi)發(fā)新的海洋藥物將寄希望于海洋微生物這一新的領(lǐng)域。2、海洋真菌海洋真菌(Marine Fungi)是生活在海洋中的能形成孢子且有真核結(jié)構(gòu)的微生物， 是一個(gè)既能在海水中繁殖和完成生活史、又能在海水培養(yǎng)基上良好生長(zhǎng)的真菌類群，又稱海水真菌。即具有真核結(jié)構(gòu)、能形成孢子、營(yíng)腐生或寄生生活的海洋生物(①J. Kohlmeyer and Ε. Kohlmeyer, Marine Mycology, Academic Press，New York，1979 ；(2) Τ. W. Johnson, F. K. Sparrow, Fungi in Oceans and Estuaries，J. Cramer，Weinheim，1961)。海洋真菌通常為菌絲狀和多細(xì)胞，只有酵母菌在發(fā)育階段中有單細(xì)胞出現(xiàn)。營(yíng)養(yǎng)方式除粘菌為攝食式外，多為吸收式。一些來(lái)源于海洋并能在海洋生境中生長(zhǎng)與繁殖者，稱為專性海洋真菌；另一些來(lái)源于陸地或淡水，但能在海洋生境中生長(zhǎng)與繁殖者，稱為兼性海洋真菌。它們適應(yīng)海水的酸堿度，耐高滲透壓能力較強(qiáng)，大多數(shù)棲于某種基物而生活，例如寄生于海藻和海生動(dòng)物，或者腐生于浸沉在海水中的木材上；少數(shù)自由生活，例如可生長(zhǎng)在含鹽的濕地和栲樹(shù)沼澤中。因此，真菌在海洋中的分布主要取決于寄主的分布。研究簡(jiǎn)史1869年法國(guó)M. C. de迪爾約等從海草中首先發(fā)現(xiàn)海洋真菌。1934年， F. K.斯帕羅研究了丹麥海域的藻狀菌類。1944年，E. S.巴洪和D.H.林德發(fā)表研究海洋木生真菌的論文。1961年，T. W.約翰森和F. K.斯帕羅的《海洋與河口真菌》論述了海洋真菌的分類與生物學(xué)特性。1978年E. B. G瓊斯主編的《水生真菌學(xué)進(jìn)展》論述了海洋真菌形態(tài)、 生理和生態(tài)方面的研究進(jìn)展。1979年J.科爾邁爾等的《海洋真菌學(xué)-高等真菌》，系統(tǒng)闡述了高等海洋真菌的研究成果。分類目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為真菌應(yīng)獨(dú)立成界(King-dom mycota) 0但對(duì)所屬門、綱等的劃分，至今還沒(méi)有一個(gè)較為公認(rèn)的方案。據(jù)現(xiàn)有記載，海洋真菌尚不足500種，僅相當(dāng)于陸地真菌種數(shù)(約5萬(wàn)種)的1%。包括絲狀高等海洋真菌209種，海洋酵母菌類177 種，低等海洋真菌藻狀菌類(Phycomycetes)約70種。在高等海洋真菌中，有子囊菌類 (Ascomycetes) 149 種、擔(dān)子菌類(Basidiomycetes) 4 種禾口半知菌類(Deuteromycetes) 56 種。海洋真菌可分為海藻寄生菌、木材腐生海水菌和匙孢囊目3類①海藻上的寄生種類有根腫菌屬、破囊壺菌屬、鏈壺菌屬、水霉屬、冠孢殼屬、隔孢球殼屬、球座菌屬、近枝鏈孢屬和變孢霉屬等；②常見(jiàn)的木材腐生海水菌有冠孢殼屬、海生殼屬、木生殼屬、橈孢殼屬、白冬孢酵母屬、擬珊瑚孢屬、腐質(zhì)霉屬和無(wú)梗孢屬等；③匙孢囊目寄生在紅藻上，分解鹵索的能力較強(qiáng)。匙孢囊屬提供了菌類起源于紅藻的證據(jù)，有人認(rèn)為它是海水中木材著生子囊菌的直接祖先。分布海洋真菌分布廣泛，從潮間帶高潮線或河口到深海，從淺海沙灘到深海沉積物中，均有其成員。海洋酵母菌和低等真菌附生于浮游生物和動(dòng)物體上，因而在大洋中也有分布；高等海洋真菌的生長(zhǎng)要求適宜的基物作為棲生場(chǎng)所，因此多集中分布在沿岸海域。由于海洋真菌營(yíng)腐生或寄生生活，所以其地理分布的特點(diǎn)是取決于寄主的地理分布范圍。但海水中溶解氧的濃度和海水水溫，也是影響海洋真菌存在與發(fā)展的重要因子。幾乎所有真菌都可在小于海水中氧化鈉濃度的條件下生長(zhǎng)，因此耐鹽性不能作為區(qū)分海洋真菌與陸地真菌的標(biāo)志。來(lái)源于水深超過(guò)500米海洋環(huán)境中的真菌，明顯地具有適應(yīng)高壓、低溫而生長(zhǎng)的能力?，F(xiàn)知的深海真菌只有5種，采集樣品的最大水深為5315米。生態(tài)習(xí)性大多數(shù)海洋真菌依賴棲住某種基物而生活，只有少數(shù)真菌不依賴基物而自由生活。依其棲生的習(xí)性，海洋真菌可分成5種基本的生態(tài)類型①木生真菌。在海洋水體中數(shù)量最多和分布最廣的高等真菌，營(yíng)腐生生活，善分解纖維素。在熱帶海域和淺海環(huán)境中分布更加廣泛。已知有子囊菌類76種，半知菌類四種， 擔(dān)子菌類2種。一類數(shù)量最多、分布最廣的高等海洋真菌。能強(qiáng)烈地分解木材和其他纖維物質(zhì)。它們?cè)跓釒ШＳ虻姆植驾^溫帶和極地廣泛，在淺海環(huán)境的分布較深海廣泛。在已知的107種海洋木生真菌中，子囊菌類占76種，半知菌類占四種，擔(dān)子菌類只有2種。②寄生藻體真菌。約占海洋真菌種數(shù)的1/3，其中以子囊菌類居多。有腐生、寄生和共生等類型。在海洋真菌中，約有1/3的種與藻類有聯(lián)系，其中以子囊菌類居多。有腐生、寄生和共生等類型。不同海藻的分布可直接影響該類真菌的分布，如在北大西洋的馬尾藻海中，真菌的種類和數(shù)量都很少，也極少發(fā)現(xiàn)被真菌侵染的海藻，這是由于馬尾藻(Sar as-sum spp)具有抗菌作用的單寧酸物質(zhì)。一般說(shuō)，腐爛海藻上酵母菌的數(shù)量要高于活藻體上和海水中的數(shù)量；附在紅藻和綠藻上的酵母菌數(shù)量，要高于褐藻上的。因?yàn)楹衷宸置诘姆宇愇镔|(zhì)能抑制海洋真菌的生長(zhǎng)。一些海洋真菌與特定海藻結(jié)合形成專性共生的結(jié)合體，即為海洋地衣。③紅樹(shù)林真菌。多半是腐生菌，其中子囊菌類23種，半知菌類17種，擔(dān)子菌類2 種。紅樹(shù)是熱帶亞熱帶潮間帶鹽澤地的植物(見(jiàn)紅樹(shù)林生物群落)。棲生在紅樹(shù)林的海洋真菌多半是腐生菌，其中有子囊菌類種，半知菌類17種，擔(dān)子菌類2種。浸在海水中的紅樹(shù)樞干、枝條和根部的表皮被穿孔動(dòng)物、風(fēng)浪或人為損傷后，極易被真菌侵入而造成腐爛。但埋在泥中的根部，則不易受真菌侵害。海洋真菌能分解紅樹(shù)葉片，為海洋提供大量的有機(jī)物碎屑。④海草真菌。數(shù)量很少，多棲居于葉部。數(shù)量較少，其中棲居葉部的真菌較棲根者為多。海草根中含有單寧酸和其他抑制生物生長(zhǎng)的物質(zhì)，只有那些能抵抗這類物質(zhì)的海洋真菌才能在海草根上適應(yīng)生長(zhǎng)。⑤寄生動(dòng)物體真菌。只限寄生在外骨骼和殼部處。只局限于寄生在外骨骼、殼等處。海洋真菌在分解動(dòng)物體中的纖維素、甲殼素、蛋白質(zhì)和碳酸鈣等過(guò)程中，起重要作用。低等海洋真菌是引起海洋魚(yú)類和無(wú)脊椎動(dòng)物病害的重要致病菌。海洋真菌常有如下特點(diǎn)①如果屬于子囊菌亞門，則主要為有分解纖維素活力的核菌綱的成員，子囊殼黑色，子囊孢子常具有含酸性多糖的附屬絲，有利于粘附在新基質(zhì)上。通常無(wú)分生孢子世代。②如果是不完全菌，則孢子為頂壁孢子型，多為暗色。海洋真菌和海洋細(xì)菌都參加海洋有機(jī)物的分解和無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物的再生過(guò)程，不斷為海洋植物提供有效營(yíng)養(yǎng)；但海洋真菌是海洋動(dòng)物的寄生菌和致病菌，有的能使海洋植物致病，甚至使港灣設(shè)施中的木質(zhì)結(jié)構(gòu)腐爛；某些海洋真菌能破壞聚氨基甲酸酯等高分子合成材料。意義海洋真菌與海洋細(xì)菌一樣，參與海洋有機(jī)物質(zhì)的分解和無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)物的再生過(guò)程，為海洋植物不斷提供有效營(yíng)養(yǎng)，在海洋食物鏈中占有重要位置。特別是在海洋沉積物中的真菌菌絲體和酵母菌體，為海洋原生動(dòng)物、底棲動(dòng)物等提供了餌料的來(lái)源。某些海洋真菌能產(chǎn)生抗菌素和其他生理活性物質(zhì)，是新藥開(kāi)發(fā)的巨大寶庫(kù)，在生態(tài)和應(yīng)用方面也有重要意義，如降解海洋環(huán)境中的污染物，促進(jìn)海洋自凈等；利用海洋真菌加工麥麩、甘蔗渣、稻草等，制成廉價(jià)的微生物碎屑混合物，用作水產(chǎn)養(yǎng)殖中的飼料。海洋真菌是某些海洋動(dòng)物的寄生菌和致病菌，如美國(guó)牡蠣生產(chǎn)區(qū)曾因真菌的侵害遭受嚴(yán)重?fù)p失。能引起某些海洋植物的病害，如北大西洋、太平洋沿岸和歐洲的海草曾被網(wǎng)粘菌屬真菌嚴(yán)重侵染。海洋木生真菌能腐爛港口設(shè)施、防波提及堰提中的木質(zhì)結(jié)構(gòu)和其他纖維材料。某些海洋真菌能破壞海水中的人工合成材料，如聚氨基甲酸酯材料被它們穿透后會(huì)膨脹裂壞。3、活性天然產(chǎn)物B的化學(xué)結(jié)構(gòu)與制備方法
海洋真菌Massarina tunicata的代謝產(chǎn)物B為首次從中國(guó)海海洋真菌中分離得到。真菌中活性產(chǎn)物B及甘露醇均有較高的含量，如果對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行更深入的研究，可將Massarina tunicata開(kāi)發(fā)為一種資源菌，進(jìn)一步加強(qiáng)在提高免疫功能、抗癌、抗衰老等作用方面的研究。海洋真菌#以6的代謝產(chǎn)物中，膽堿硫酸酯為首次從南中國(guó)海海洋真菌中分離得到；3，4，5_三羥基苯甲酸是首次從海洋真菌中發(fā)現(xiàn)。真菌#以6中膽堿硫酸酯及甘露醇均有較高的含量，如果對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行更深入的研究，可將#以6開(kāi)發(fā)為一種資源菌。膽堿硫酸酯(簡(jiǎn)稱C0S)廣泛存在于自然界中，它在土壤中硫的微生物轉(zhuǎn)換方面扮演重要的角色。多種植物、土壤真菌以及細(xì)菌都能利用膽堿和PA(3’-phosphoadenosine-5’-phosphos ulphate)作為底物，在硫轉(zhuǎn)換酶催化作用下合成COS，另一方面在膽堿硫酸酯水解酶的作用下COS可發(fā)生水解，成為生物體內(nèi)膽堿和硫酸基團(tuán)的來(lái)源之一。COS的另一個(gè)重要角色是作為抗?jié)B透化合物。3，4，5_三羥基苯甲酸(即沒(méi)食子酸)是一種多酚類化合物，由于分子中有一定量的R · OH基，能形成有抗氧化作用的氫自由基(H·)，有超氧陰離子(02_·)和羥基自由基(0H·)等自由基的活性，從而保護(hù)組織免受氧化作用的損害，以及提高免疫功能、 抗癌、抗衰老等作用。通過(guò)對(duì)海洋真菌Massarina sp.，strain CNT-016的深入研究，目前已發(fā)現(xiàn)螺環(huán)內(nèi)酉旨化合物 6-印i-5 ‘ -hydroxy-mycosporulone (參見(jiàn)M. A. Abdel-ffahab et al. / Phytochemistry 68(2007) 1212-1218)，但尚未進(jìn)行深入的生物活性研究，本發(fā)明的研究涉及到的化合物與其有類似母核，并進(jìn)行了抗真菌抗腫瘤活性及抗血管性老年癡呆研究。( 二)常規(guī)有效成分的提取分離方法1、溶劑提取法(1)原理溶劑提取法是根據(jù)被提取物原料例如中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來(lái)的方法。當(dāng)溶劑加到被提取物原料(例如中草藥，需適當(dāng)粉碎)中時(shí)，溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸通過(guò)細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返，直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑， 就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。被提取物原料成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為親水性有機(jī)溶劑及親脂性有機(jī)溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多，其極性大而疏于油；有的親水性基團(tuán)少，其極性小而疏于水。各類溶劑的性質(zhì)，同樣也與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。這樣，發(fā)明人就可以通過(guò)對(duì)被提取物原料例如中草藥成分結(jié)構(gòu)分析，去估計(jì)它們的此類性質(zhì)和選用的溶劑?？偟恼f(shuō)來(lái)，只要被提取物原料成分的親水性和親脂性與溶劑的此項(xiàng)性質(zhì)相當(dāng)，就會(huì)在其中有較大的溶解度，即所謂“相似相溶”的規(guī)律。這是選擇適當(dāng)溶劑自被提取物原料中提取所需要成分的依據(jù)之一。(2)溶劑的選擇運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇?。溶劑選擇適當(dāng)，就可以比較順利地將需要的成分提取出來(lái)。選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)①溶劑對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)雜質(zhì)溶解度?。虎谌軇┎荒芘c中藥的成分起化學(xué)變化；③溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用安全等。常見(jiàn)的提取溶劑可分為以下三類
①水水是一種強(qiáng)的極性溶劑。被提取物原料中親水性的成分，如無(wú)機(jī)鹽、糖類、分子不太大的多糖類、鞣質(zhì)、氨基酸、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸鹽、生物堿鹽及苷類等都能被水溶出。為了增加某些成分的溶解度，也常采用酸水及堿水作為提取溶劑。②親水性的有機(jī)溶劑也就是一般所說(shuō)的與水能混溶的有機(jī)溶劑，如乙醇(又稱 酒精)、甲醇(又稱木精)、丙酮等，以乙醇最常用。乙醇的溶解性能比較好，對(duì)被提取物原料細(xì)胞的穿透能力較強(qiáng)。親水性的成分除蛋白質(zhì)、粘液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。難溶于水的親脂性成分，在乙醇中的溶解度也較大。還可以根據(jù)被提取物質(zhì)的性質(zhì)，采用不同濃度的乙醇進(jìn)行提取。用乙醇提取比用水量較少，提取時(shí)間短，溶解出的水溶性雜質(zhì)也少。乙醇為有機(jī)溶劑，雖易燃，但毒性小，價(jià)格便宜，來(lái)源方便，有一定設(shè)備即可回收反復(fù)使用，而且乙醇的提取液不易發(fā)霉變質(zhì)。由于這些原因，用乙醇提取的方法是歷來(lái)最常用的方法之一。甲醇的性質(zhì)和乙醇相似，沸點(diǎn)較低(64°C)，但有毒性，使用時(shí)應(yīng)息。
③親脂性的有機(jī)溶劑也就是一般所說(shuō)的與水不能混溶的有機(jī)溶劑，如石油醚、 苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷等。這些溶劑的選擇性能強(qiáng)，不能或不容易提出親水性雜質(zhì)。但這類溶劑揮發(fā)性大，多易燃(氯仿除外)，一般有毒，價(jià)格較貴，設(shè)備要求較高，且它們透入植物組織的能力較弱，往往需要長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)提取才能提取完全。如果藥材中含有較多的水分，用這類溶劑就很難浸出其有效成分，因此，大量提取被提取物原料時(shí)，直接應(yīng)用這類溶劑有一定的局限性。(3)提取方法用溶劑提取被提取物原料成分，常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等。同時(shí)，原料的粉碎度、提取時(shí)間、提取溫度、設(shè)備條件等因素也都能影響提取效率，必須加以考慮。①浸漬提取法(簡(jiǎn)稱浸漬法)浸漬法系將被提取物原料粉末或碎塊裝入適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入適宜的溶劑(如乙醇、稀醇或水)，浸漬藥材以溶出其中成分的方法。本法比較簡(jiǎn)單易行，但浸出率較差，且如用水為溶劑，其提取液易發(fā)霉變質(zhì)，須注意加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎?。②滲漉提取法(簡(jiǎn)稱滲漉法)滲漉法是將被提取物原料粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過(guò)藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。當(dāng)溶劑滲進(jìn)藥粉、溶出成分比重加大而向下移動(dòng)時(shí)，上層的溶液或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行，故浸出效果優(yōu)于浸漬法。但應(yīng)控制流速，在滲渡過(guò)程中隨時(shí)自藥面上補(bǔ)充新溶劑，使藥材中有效成分充分浸出為止?；虍?dāng)滲滴液顏色極淺或滲涌液的體積相當(dāng)于原藥材重的10倍時(shí)，便可認(rèn)為基本上已提取完全。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀浸出液作為另一批新原料的溶劑之用。③煎煮提取法(簡(jiǎn)稱煎煮法)煎煮法是中國(guó)最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時(shí)最好時(shí)常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設(shè)備的藥廠，多采用大反應(yīng)鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個(gè)煎煮器通過(guò)管道互相連接，進(jìn)行連續(xù)煎浸。④加熱回流提取法應(yīng)用有機(jī)溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時(shí)，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。瓶?jī)?nèi)裝藥材約為容量的20% 60%，溶劑浸過(guò)藥材表面約1 2cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰3 6小時(shí)，放冷過(guò)濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時(shí)，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產(chǎn)中多采用連續(xù)提取法。⑤連續(xù)回流提取法應(yīng)用揮發(fā)性有機(jī)溶劑提取被提取物原料有效成分，不論小型實(shí)驗(yàn)或大型生產(chǎn)，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實(shí)驗(yàn)室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時(shí)才能提取完全。提取成分受熱時(shí)間較長(zhǎng)，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。2、分離和純化方法上述提取法所得到的被提取物原料提取液或提取物仍然是混合物，需進(jìn)一步除去雜質(zhì)，分離并進(jìn)行精制。(1)溶劑分離法一般是將上述總提取物，選用三、四種不同極性的溶劑，由低極性到高極性分步進(jìn)行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常為膠狀物，難以均勻分散在低極性溶劑中，故不能提取完全，可拌入適量惰性填充劑，如硅藻土或纖維粉等，然后低溫或自然干燥，粉碎后，再以選用溶劑依次提取，使總提取物中各組成成分，依其在不同極性溶劑中溶解度的差異而得到分離。利用被提取物原料化學(xué)成分，在不同極性溶劑中的溶解度進(jìn)行分離純化，是最常用的方法。(2)溶劑萃取法①萃取法溶劑提取萃取法又簡(jiǎn)稱萃取法，是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法。萃取時(shí)如果各成分在溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高；如果在水提取液中的有效成分是親脂性的物質(zhì)，一般多用親脂性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚進(jìn)行萃取，如果有效成分是偏于親水性的物質(zhì)，在親脂性溶劑中難溶解，就需要改用弱親脂性的溶劑，例如乙酸乙酯、丁醇等。還可以在氯仿、乙醚中加入適量乙醇或甲醇以增大其親水性。提取黃酮類成分時(shí)，多用乙酸乙脂和水萃取。提取親水性強(qiáng)的皂苷則多選用正丁醇、異戊醇和水作萃取。不過(guò)，一般有機(jī)溶劑親水性越大，與水作萃取的效果就越不好，因?yàn)槟苁馆^多的親水性雜質(zhì)伴隨而出，對(duì)有效成分進(jìn)一步精制影響很大。②逆流連續(xù)萃取法是一種連續(xù)的溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多的萃取管。管內(nèi)用小瓷圈或小的不銹鋼絲圈填充，以增加溶劑萃取時(shí)的接觸面。如果一種被提取物原料的水浸液需要用比水輕的苯、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，則需將水提濃縮液裝在萃取管內(nèi)，而苯、乙酸乙酯貯于高位容器內(nèi)。萃取是否完全，可取樣品用薄層層析、紙層析及顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢查。③逆流分配法逆流分配法又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法與溶劑逆流萃取法原理一致，但加樣量一定，并不斷在一定容量的溶劑中，經(jīng)多次移位萃取分配而達(dá)到混合物的分離。④液滴逆流分配法液滴逆流分配法又稱液滴逆流層析法。為近年來(lái)在逆流分配法基礎(chǔ)上改進(jìn)的溶劑萃取法。對(duì)溶劑系統(tǒng)的選擇基本同逆流分配法，但要求能在短時(shí)間內(nèi)分離成，并可生成有效的液滴。由于移動(dòng)相形成液滴，在細(xì)的分配萃取管中與固定相有效地接觸、摩擦不斷形成新的表面，促進(jìn)溶質(zhì)在溶劑中的分配，故其分離效果往往比逆流分配法好。(3)大孔吸附樹(shù)脂法大孔吸附樹(shù)脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來(lái)的一類有機(jī)高聚物吸附劑，具有良好的吸附性能，近十余年來(lái)逐漸被應(yīng)用于被提取物原料化學(xué)成分的提取分離和中藥新藥的開(kāi)發(fā)研制。大孔吸附樹(shù)脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。由于吸附和篩選原理， 有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附樹(shù)脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開(kāi)。這使得有機(jī)化合物尤其是水溶性化合物的提純得以大大簡(jiǎn)化。大孔吸附樹(shù)脂的骨架由苯乙烯和二乙烯苯縮聚而生成，由于改性劑的加入，大孔吸附樹(shù)脂的極性發(fā)生改變，按照樹(shù)脂的表面性質(zhì)，吸附樹(shù)脂一般分為非極性、中極性和極性三類。非極性吸附樹(shù)脂是由偶極矩很小的單體聚合物制得的不帶任何功能基的吸附樹(shù)脂。典型的例子是苯乙烯-二乙烯苯體系的吸附樹(shù)脂，如D101、XAD-l、DiaiOnHP-10大孔吸附樹(shù)脂。中極性吸附樹(shù)脂指含酯基的吸附樹(shù)脂，如丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯與雙甲基丙烯酸酯等交聯(lián)的一類共聚物。它是在非極性大孔吸附樹(shù)脂的基礎(chǔ)上，加入丙烯酸甲酯或丙烯腈縮聚而成，如中國(guó)中國(guó)經(jīng)常使用的AB-8大孔吸附樹(shù)脂。極性吸附樹(shù)脂是指含酰胺基、腈基、酚羥基等含氮、氧、硫極性功能基的吸附樹(shù)脂。 此外，有時(shí)把含氮、氧、硫等配體基團(tuán)的離子交換樹(shù)脂稱作強(qiáng)極性吸附樹(shù)脂，強(qiáng)極性吸附樹(shù)脂與離子交換樹(shù)脂的界限很難區(qū)別。極性大孔吸附樹(shù)脂可以由甲基丙烯酸甲酯、丙烯酰胺或亞砜類縮聚而成，如日本三菱化工的Diaion HP 2MG、美國(guó)Rohm-hass公司的XAD-10， XAD-9大孔吸附樹(shù)脂。與活性炭和其它吸附劑相比，大孔吸附樹(shù)脂具有很多的優(yōu)點(diǎn)，如對(duì)某種物質(zhì)的吸附選擇性較高；物理化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度較好；品種規(guī)格較多，可根據(jù)需要改變樹(shù)脂物理或化學(xué)結(jié)構(gòu)；吸附樹(shù)脂一般為球狀顆粒，流體阻力較小等等。因而被廣泛應(yīng)用于化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，近年來(lái)關(guān)于大孔吸附樹(shù)脂在天然產(chǎn)物提取分離中的應(yīng)用研究報(bào)道越來(lái)越多。大孔吸附樹(shù)脂對(duì)被提取物原料化學(xué)成分如生物堿、黃酮、皂苷、香豆素及其他一些苷類成分都有一定的吸附作用。對(duì)糖的吸附能力很差，對(duì)色素的吸附能力較強(qiáng)。(4)沉淀法是在被提取物原料提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀，以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。如鉛鹽沉淀法鉛鹽沉淀法為分離某些被提取物原料成分的經(jīng)典方法之一。由于醋酸鉛及堿式醋酸鉛在水及醇溶液中，能與多種被提取物原料成分生成難溶的鉛鹽或絡(luò)鹽沉淀，故可利用這種性質(zhì)使有效成分與雜質(zhì)分離。然后將鉛鹽沉淀懸浮于新溶劑中，通以硫化氫氣體，使分解并轉(zhuǎn)為不溶性硫化鉛而沉淀。(5)鹽析法鹽析法是在被提取物原料的水提液中，加入無(wú)機(jī)鹽至一定濃度，或達(dá)到飽和狀態(tài)，可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而與水溶性大的雜質(zhì)分離。常用作鹽析的無(wú)機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。(6)透析法透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過(guò)半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過(guò)半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。反之也可將大分子的雜質(zhì)留在半透膜內(nèi)，而將小分子的物質(zhì)通過(guò)半透膜進(jìn)入膜外溶液中，而加以分離精制。(7)結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法鑒定被提取物原料化學(xué)成分，研究其化學(xué)結(jié)構(gòu)， 必須首先將被提取物原料成分制備成單體純品。在常溫下，物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化合物， 可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM(jìn)行分離精制。一般地說(shuō)，被提取物原料化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì)，都具有結(jié)晶體的通性，可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來(lái)達(dá)到分離精制的目的。3、常用干燥方法(1)真空干燥是基于這樣一基本原理水的飽和蒸氣壓與溫度緊密相關(guān)，在真空狀態(tài)下，水的沸點(diǎn)降低，即在真空下操作也就是在低溫下操作，可避免在高溫下?tīng)I(yíng)養(yǎng)成分如維生素等的破壞，同時(shí)提高了干燥速度。真空干燥在食品、制藥、化工等行業(yè)有廣泛的應(yīng)用， 中國(guó)也開(kāi)發(fā)和引進(jìn)了各種真空干燥設(shè)備，其結(jié)構(gòu)形式多種多樣。常用的形式主要有箱式真空干燥器、雙錐式真空干燥器、帶式真空干燥器等。這些傳統(tǒng)的真空干燥裝置主要采用熱風(fēng)，蒸汽或電等加熱，利用熱傳導(dǎo)、對(duì)流或輻射原理將熱量從外部傳到物料內(nèi)部。真空干燥具有干燥溫度低，干燥室內(nèi)相對(duì)缺氧，可避免脂肪氧化，色素褐變等一系列優(yōu)點(diǎn)，適合于熱敏感性食品物料的干燥，此外設(shè)備成本、干燥費(fèi)用也相對(duì)較低。(2)噴霧干燥是流化技術(shù)用于液態(tài)物料干燥的一種方法。因是瞬間干燥，特別適用于熱敏性物料，故所得產(chǎn)品質(zhì)量好，保持原來(lái)的色香味，且易溶解。利用噴霧干燥來(lái)制備微囊的研究正在進(jìn)行，它是將心料混懸在衣料的溶液中，經(jīng)離心噴霧器將其噴入熱氣流中， 所得的產(chǎn)品是衣料包心料而成的微囊，這種微囊粉末可采用于直接壓片，也可制備膠囊劑、 糖漿劑或混懸劑。(3)冷凍干燥是將干燥液體物料冷凍成固體，在低溫減壓條件下利用冰的升華性能，使物料低溫脫水而達(dá)到干燥的一種方法。由于物料在高度真空及低溫條件下干燥，故對(duì)某些極不耐熱物品的干燥很適合。王大林報(bào)道了一種噴霧通氣凍干新技術(shù)，是利用冷的空氣或氮?dú)庾鳛榻橘|(zhì)，迅速流經(jīng)凍結(jié)物使水升華，噴霧凍干制得的產(chǎn)品微粒小、干燥快、時(shí)間短、均勻、流動(dòng)性好，并具良好的速溶性。近年來(lái)，對(duì)膏狀物料和粘稠物料干燥的研究取得了較大進(jìn)展，流態(tài)化技術(shù)、噴射技術(shù)、惰性載體技術(shù)，則是在此研究基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。旋轉(zhuǎn)閃蒸干燥機(jī)、熱噴射氣流干燥機(jī)、惰性載體干燥機(jī)均適合熱敏性物料和膏狀物料的干燥。這些新的研究成果用于中藥制劑生產(chǎn)，將大大改善中藥加工的技術(shù)水平，提高生產(chǎn)效率。(4)遠(yuǎn)紅外加熱干燥法是一項(xiàng)新的干燥技術(shù)，其干燥原理是將電能轉(zhuǎn)變?yōu)檫h(yuǎn)紅外輻射，從而被藥材的分子吸收，產(chǎn)生共振，引起分子和原子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)，導(dǎo)致物體變熱， 經(jīng)過(guò)熱擴(kuò)散、蒸發(fā)和化學(xué)變化，最終達(dá)到干燥的目的。遠(yuǎn)紅外干燥可節(jié)省電能20% 50%， 效果較好。(5)微波干燥法是一項(xiàng)20世紀(jì)60年代迅速發(fā)展起來(lái)的新技術(shù)，微波干燥實(shí)際上是通過(guò)感應(yīng)加熱和介質(zhì)加熱，使被干燥物中的水分和脂肪不同程度地吸收微波能量，并把它轉(zhuǎn)變?yōu)闊崃繌亩_(dá)到干燥的目的。微波干燥可殺滅微生物和霉菌，并具有消毒作用。目前中國(guó)生產(chǎn)的微波加熱成套設(shè)備有915mhz和M50mhz兩個(gè)頻率。(三)血管性癡呆的研究概況癡呆(Dementia)是由于腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性和持續(xù)性智能障礙綜合癥， 智能障礙包括不同程度的記憶、語(yǔ)言、視空間功能、人格異常及認(rèn)知能力降低。癡呆的主要類型是包括血管性癡呆癥(vascular dementia，或稱血管性老年癡呆癥，簡(jiǎn)稱VD)、老年癡呆癥中的老年性癡呆癥(Alzheimer’ s Disease，或稱阿爾茲海默癥，或稱阿爾茨海默癥，簡(jiǎn)稱AD)等。老年癡呆癥包括老年性癡呆癥、多重梗塞型癡呆癥(Multimfarct Dementia)、酒精性癡呆癥(Alcoholic Dementia)及正常腦壓水腦癥(Normal Pressure Hychocephalus)，其中老年性癡呆癥為老年癡呆癥中的主要類型。由于AD好發(fā)病于60歲以上老年人，所以習(xí)慣被稱為早老性癡呆癥。血管性癡呆癥是由腦血管性疾病引起的，主要由腦缺血缺氧導(dǎo)致。臨床上常見(jiàn)多梗死性癡呆、大面積腦梗死性癡呆、丘腦性癡呆及出血性腦血管并發(fā)癡呆及混合性癡呆等類型。臨床表現(xiàn)為抑郁、譫妄、失語(yǔ)等。病理改變?yōu)槎喟l(fā)性腔隙性病變或大面積梗死灶及動(dòng)脈粥樣硬化病變(參見(jiàn)神經(jīng)病學(xué)，第四版，人民衛(wèi)生出版社)。臨床治療可使用膽堿能抑制劑，擴(kuò)張血管、增加腦血流量，或者利用腦保護(hù)劑一抗氧化劑或自由基清除劑可以改善缺血、缺氧所引起的病理?yè)p傷減少腦細(xì)胞壞死和凋亡，保護(hù)腦組織。血管性癡呆者早期僅表現(xiàn)近記憶障礙，遠(yuǎn)記憶相對(duì)保持較好；隨病程的增加，遠(yuǎn)記憶能力逐漸喪失，智能衰退呈漸進(jìn)性加重。而老年性癡呆早期就表現(xiàn)出遠(yuǎn)近記憶障礙，智能衰退呈現(xiàn)出一種緩慢的進(jìn)展過(guò)程(郭明英，韓國(guó)玲，等.老年性癡呆與血管性癡呆智能障礙的比較研究.青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)· 2007,28(2) :125-127.)。血管性危險(xiǎn)因素在血管性癡呆和阿爾茲海默癥的發(fā)病中均扮演著重要角色，所以有理論認(rèn)為阿爾茲海默癥與血管性癡呆可能并非兩個(gè)獨(dú)立疾患。阿爾茲海默癥與血管性癡呆的共性研究已經(jīng)在危險(xiǎn)因素、發(fā)病機(jī)制、病理生理、影像學(xué)改變等各個(gè)方面廣泛地開(kāi)展。血管性癡呆癥是由多次腦卒中或長(zhǎng)期慢性腦缺血所致的大腦皮層獲得性高級(jí)功能的進(jìn)行性衰退性疾病。在歐美調(diào)查表明，55歲以上的老人中癡呆發(fā)生率約1. 1%，其中阿爾茲海默癥占首要位置(發(fā)生率約7. 7%o)，約為癡呆總?cè)藬?shù)的50% 60%，而VD居次(發(fā)生率約 1.5%。)，占10% 20%，而隨著年齡增長(zhǎng)，VD所占比例顯著增加(①Ott A,Breteler MMB, Harskamp F, Stijnen T, Hofman A. Incidence and risk of dementia :the Rotterdam study.Am. J. Epidemiol. ,1998,147(6) :574-580.；② Di Carlo A, Baldereschi M, Amaducci L, et al. Incidence of dementia, Alzheimer ' s disease, and vascular dementia in Italy. The ILSA Study. J. Am. Geriatr. Soc. , 2002 ；50 :41-48.)。中國(guó)最近的研究也表明，65歲以上的老人中AD發(fā)生率約3.5%，VD發(fā)生率1. 1% (Zhang ZX, Zahner GE, Roman GC, et al. Dementia subtypes in China-prevalence in Beijing, Xian, Shanghai, and Chengdu. Arch Neurol. 2005 ；62 (3) :447-453.)。由于目前還缺乏適用于診斷VD的認(rèn)知損害模式，對(duì)于AD和VD的診斷的鑒別以及“混合型”癡呆(AD+腦血管病，簡(jiǎn)稱AD+CVD)的診斷仍然具有一定的挑戰(zhàn)性(①丁素菊，李云霞.血管性癡呆的臨床診斷和治療.國(guó)外醫(yī)學(xué)腦血管疾病分冊(cè).2005，13(9) 676-680 ；② Erkinjuntti T Vascular dementia :challenge of clinical diagnosis. Int Psychogeriatr. 1997 ；9 :51-58.)，所以有人認(rèn)為血管性癡呆可能是老年人中最為常見(jiàn)的癡呆類型，主要是因?yàn)楹芏唷盎旌闲汀卑V呆(AD+CVD)可能被診斷為AD (①RonuSn GC. Vascular dementia may be the most common form of dementia in the elderly. J Neurol Sci. 2002，203-204 :7-10 ；②丁素菊.血管性癡呆.中國(guó)老年學(xué)雜志.2003 ;23 (4) 200-202.)。VD 的發(fā)生率在男女無(wú)明顯差異(Anderson K, Launer LJ, Dewey ME，et al. Genderdifferences in the incidence of AD and vascular dementia :the EURODEM studies. Neurology. 1999 ；53 :1992-1997.)，其最顯著的危險(xiǎn)因子是年齡[Hebert R.，Lindsay J.， Verreault R. , Rockwood K., Hill G. , Dubois MF. Vascular dementia incidence and risk factors in the Canadian study of health and aging. Stroke, 2000 ；31 (7) 1487-1493.]，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，在大于60歲的人群中，年齡每增加5歲VD的發(fā)病率就增加1倍。引起VD的兩個(gè)主要原因是腦卒中和缺血性心臟病(ischemic heart disease，簡(jiǎn)稱IHD)，而在老年人中這兩者都是常見(jiàn)病。僅就腦卒中而言，現(xiàn)在每年全球新增加卒中患者 1000 萬(wàn)，其中中國(guó)就有 200 萬(wàn)(① Feigin VL, Lawes CMM, Bennett DA, et al. Stroke epidemiology -.a review of population-based studies of incidence, prevalence, and case-fatality in the late 20th century. Lancet Neurol. , 2003, 2 (1) :43-53 ；②吳兆蘇，姚崇華，趙冬.中國(guó)人群腦卒中發(fā)病率、死亡率的流行病學(xué)研究.中華流行病學(xué)雜志， 2003 ；24(3) :236-239.),在老年人中發(fā)病率尤高，從而造成很多患者并發(fā)VD。中國(guó)全國(guó)性癡呆流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)資料也顯示隨著人口的老齡化、飲食結(jié)構(gòu)的改變，VD的發(fā)病呈遞增趨勢(shì)。隨著人口老化，心腦血管病的發(fā)病率逐年升高，并發(fā)VD患者也逐漸增多。VD不僅嚴(yán)重?fù)p害患者健康，給患者帶來(lái)長(zhǎng)期痛苦，影響患者的生命質(zhì)量，也給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)，引起了世界各國(guó)的普遍關(guān)注，它是老年醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)重要課題。普遍認(rèn)為年齡對(duì)VD的作用是通過(guò)多方面來(lái)影響的，例如腦的自身調(diào)節(jié)、細(xì)胞的新陳代謝、血腦屏障及自主功能方面的老化改變使腦血管易于受到損害，而腦損害的累計(jì)效應(yīng)也是原因之一。癡呆的診斷必須符合三個(gè)條件①癡呆；②腦血管病；③以上二者密切相關(guān)。癡呆和卒中在時(shí)間上密切聯(lián)系，通常卒中后3個(gè)月內(nèi)發(fā)生癡呆。主要癥狀為①腦組織病理形態(tài)改變；②記憶力下降。關(guān)于VD的治療，目前尚無(wú)肯定的治療方法可以改變整個(gè)病程，由于腦梗死后壞死的腦細(xì)胞不可能逆轉(zhuǎn)，主要是對(duì)供血不足的腦細(xì)胞的治療以緩解發(fā)作期癥狀、預(yù)防再損害等。常采用積極改善腦細(xì)胞供氧、改善微循環(huán)、預(yù)防新血栓與再梗死的方法等。改善腦循環(huán)治療常用的有雙氫麥角堿類、鈣離子拮抗劑、煙酸類、其他擴(kuò)血管藥物及抗血小板聚集藥物。膽堿酯酶抑制劑是近年發(fā)展較為迅速的癡呆治療藥物，如鹽酸多奈哌齊和重酒石酸卡巴拉汀。臨床上還經(jīng)常應(yīng)用腦保護(hù)治療藥物如鈣離子拮抗劑(尼莫地平和西吡靈)；自由基清除劑(維生素E、維生素C以及銀杏葉制劑)等。但從上述藥物目前臨床的應(yīng)用效果來(lái)看，療效一般，并且大部分都僅僅是對(duì)癥處理，并不能改善死亡率。目前一些中藥制劑如銀杏葉、燈盞花、刺五加等制劑大多存在活性成分不清、作用機(jī)制不明、質(zhì)量不穩(wěn)、毒副作用大等不足之處，難以滿足臨床需要。因此，目前世界各國(guó)對(duì)控制此病病程進(jìn)展尚無(wú)有效方法和藥物，VD的預(yù)防、治療和預(yù)后的藥物研究和開(kāi)發(fā)已成為各國(guó)非常重視的研究課題(①丁素菊.血管性癡呆.中國(guó)老年學(xué)雜志.2003 ；23 (4) =200-202 ；②陳舂雷，邱智輝，蘇世鑫，鄭忠誠(chéng)，陳培芬，葉志平.血管性癡呆的治療進(jìn)展.中國(guó)新醫(yī)學(xué)論壇.2007，7 (7) :59-62.)。因此，研究出一種有效的治療方法來(lái)阻止?jié)撛诘陌l(fā)病過(guò)程是很必要的，結(jié)合中國(guó)的傳統(tǒng)被提取物原料，從中發(fā)掘有效、低毒、價(jià)廉的治療血管性癡呆和老年性癡呆的藥物， 用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)和治療VD等方面的產(chǎn)品特別是藥物具有非常重要的意義，能夠產(chǎn)生顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。(四)抗真菌藥物的研究概況近年來(lái)真菌感染有逐漸增加的趨勢(shì)，它包括淺部和深部真菌病，后者發(fā)病多系機(jī)體免疫功能受損，常病情嚴(yán)重，危及生命，需全身應(yīng)用強(qiáng)效抗真菌藥物治療。該類藥物可分為外用和系統(tǒng)應(yīng)用兩類，外用藥物僅用于淺部真菌感染。人類的真菌感染可累及表皮、皮下和全身；一般可分為淺部感染(即局限在角層、 鱗狀粘膜或角膜)和深部感染(皮下和全身)兩大類。它們的治療藥物也有所不同，而有部分藥物既可用于淺部感染，又可用于深部感染。淺部真菌感染包括皮膚真菌病，皮膚、指 (趾)甲、毛發(fā)的感染，如體癬、股癬、手足癬、花斑癬、甲真菌病、皮膚黏膜念珠菌病和真菌性角膜炎等。據(jù)統(tǒng)計(jì)淺部真菌病約占全部皮膚病的1/4，特別是足部真菌感染，約占皮膚科就診病人的46%，而其中甲真菌病就占了約16% ；對(duì)于這些感染，主要采用局部用藥治療， 由于其感染的特點(diǎn)，藥物治療效果往往不很滿意，在某些情況，還需口服用藥。局部使用環(huán)吡酮胺指甲涂劑涂在指甲表面是治療甲真菌病的較好方法。深部真菌感染包括皮下組織和全身系統(tǒng)感染，包括念珠菌病、隱球菌病、曲霉病和毛霉菌病等。近年來(lái)由于廣泛應(yīng)用廣譜抗生素、皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、放射治療、化學(xué)治療、器官移植、導(dǎo)管手術(shù)以及艾滋病的增多，使發(fā)生侵襲性真菌感染機(jī)會(huì)增加，而導(dǎo)致深部真菌感染日益增多，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，近十多年來(lái)，深部真菌感染的發(fā)病率增高了 3 5倍。對(duì)于全身系統(tǒng)感染則需全身用藥，有時(shí)尚需聯(lián)合用藥。由于藥物的作用機(jī)制不同，特別需要注意它們的安全性和藥物相互作用問(wèn)題。在治療應(yīng)用方面，深部真菌感染主要選用兩性酶素B、伊曲康唑、酮康唑、氟康唑、 伏立康唑、泊沙康唑、卡泊芬凈和氟胞嘧啶，其他藥物則多用于淺部真菌感染，但多數(shù)具有較嚴(yán)重的毒副作用，如兩性霉素有腎臟毒性。在長(zhǎng)期藥物應(yīng)用的過(guò)程中病原菌也逐漸產(chǎn)生不同程度的耐藥性，迫切需要我們開(kāi)發(fā)新型療效好且毒副作用更小的抗真菌藥物。(五)抗腫瘤藥物的研究概況惡性腫瘤嚴(yán)重危害人們的健康，據(jù)RST統(tǒng)計(jì)，在全世界五十多多億人口中平均每年死于惡性腫瘤者達(dá)690萬(wàn)人，新發(fā)病例為870萬(wàn)例，且數(shù)字還在逐年增加。因此，各國(guó)政府、研究機(jī)構(gòu)及制藥公司長(zhǎng)期以來(lái)一直對(duì)腫瘤研究和抗腫瘤藥物予以高度重視，在抗腫瘤藥物的研究上，目前已取得了重大進(jìn)展。近年來(lái)，分子腫瘤學(xué)、分子藥理學(xué)的發(fā)展使腫瘤本質(zhì)正在逐步闡明；大規(guī)?？焖俸Y選、組合化學(xué)、基因工程等先進(jìn)技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用加速了藥物開(kāi)發(fā)進(jìn)程；抗腫瘤藥物的研究與開(kāi)發(fā)已進(jìn)入一個(gè)嶄新的時(shí)代。抗腫瘤藥物正從傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性藥物，向針對(duì)機(jī)制的多環(huán)節(jié)作用的新型抗腫瘤藥物發(fā)展。因此，研究開(kāi)發(fā)新型的抗腫瘤藥物成為迫切的需要。藥品銷售的數(shù)據(jù)表明，全球制藥企業(yè)50強(qiáng)在2007年的處方藥銷售額增長(zhǎng)為2. 8%，而其中抗腫瘤類藥物增長(zhǎng)最快，達(dá) 14%。2006年數(shù)據(jù)同樣表明，10類藥物中抗腫瘤藥物的銷售增長(zhǎng)居首位，達(dá)20.5%。這反映了對(duì)抗腫瘤藥物的持續(xù)、快速增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求。中國(guó)在制定中長(zhǎng)期科學(xué)發(fā)展規(guī)劃的基礎(chǔ)上，提出設(shè)立一批重大專項(xiàng)?！爸卮笮滤巹?chuàng)制”是從“十一五”到2020年間國(guó)家支持的重大項(xiàng)目之一。該項(xiàng)目將針對(duì)腫瘤、心血管病等多種嚴(yán)重危害人民的重大疾病，研制創(chuàng)新藥物。 很明顯，抗腫瘤新藥的研究與開(kāi)發(fā)，既是防治嚴(yán)重危害人民疾病的需要，也是我國(guó)持續(xù)發(fā)展和建設(shè)創(chuàng)新型國(guó)家的重要任務(wù)。“重大新藥創(chuàng)制”專項(xiàng)的設(shè)立，將對(duì)我國(guó)抗腫瘤新藥研發(fā)的進(jìn)程產(chǎn)生積極的影響。癌癥治療是醫(yī)學(xué)與生物學(xué)的重大難題。研制可根治腫瘤的藥物，仍然“任重道遠(yuǎn)”。 與世界先進(jìn)水平相比，中國(guó)在抗腫瘤新藥研究方面仍有不小差距?？鼓[瘤新藥的研究與開(kāi)發(fā)是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)，是一個(gè)長(zhǎng)期、復(fù)雜的過(guò)程，需要科技人員長(zhǎng)期專心致志地工作與積累。因此，需要為研究者提供穩(wěn)定的工作環(huán)境與條件；需要各方面專業(yè)人員和相關(guān)機(jī)構(gòu)通力合作；需要有利于推動(dòng)合作的政策保障措施和組織協(xié)調(diào)機(jī)制；需要有較大數(shù)量經(jīng)費(fèi)包括臨床前研究與臨床研究的經(jīng)費(fèi)的大力支持。當(dāng)前，抗腫瘤新藥研發(fā)正面臨良好的機(jī)遇。生物醫(yī)藥科學(xué)的發(fā)展，為研制新型抗腫瘤藥物提供了重要的理論基礎(chǔ)和新的技術(shù)支撐。中國(guó)醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，對(duì)包括癌癥在內(nèi)的重大疾病治療藥物提出了更高的要求，中國(guó)市場(chǎng)和世界市場(chǎng)的巨大需求能給研發(fā)單位帶來(lái)可觀的經(jīng)濟(jì)效益。中國(guó)設(shè)立“重大新藥創(chuàng)制”重大專項(xiàng)，將促進(jìn)中國(guó)新藥包括抗腫瘤新藥的研究與開(kāi)發(fā)。經(jīng)文獻(xiàn)檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)有活性天然產(chǎn)物B(p0lydatin，piceid)以及其組合物在直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抗真菌、抗腫瘤、血管性癡呆和老年性癡呆及其直接相關(guān)疾病方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)了一種中藥活性天然產(chǎn)物B抗真菌、抗腫瘤及抗血管性癡呆的新作用，即該提取物用于制備抗真菌產(chǎn)品、抗腫瘤產(chǎn)品及抗血管性癡呆產(chǎn)品，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。也就是說(shuō)，本發(fā)明通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等研究和理論探索，意在明確一種活性天然產(chǎn)物B在抗真菌、抗腫瘤及抗血管性癡呆應(yīng)用方面的活性，即本發(fā)明涉及一種活性天然產(chǎn)物B的新用途。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有上述活性天然產(chǎn)物B的藥物組合物作為制備抗真菌抗腫瘤產(chǎn)品及抗血管性癡呆產(chǎn)品的應(yīng)用。在該組合物中，本發(fā)明的活性天然產(chǎn)物B占 10% 90% (重量百分比)，優(yōu)選占50% 90% (重量百分比)。(一)本發(fā)明所采用的定義本發(fā)明所述的抗真菌抗腫瘤產(chǎn)品是包括抗真菌產(chǎn)品和抗腫瘤產(chǎn)品；本發(fā)明所述的抗真菌產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究病原真菌及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種，所述的病原真菌是指白念球菌、新生隱球菌、紅色毛癬菌和煙曲霉菌。本發(fā)明所述的抗腫瘤產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究腫瘤及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種，所述的腫瘤是指肝癌、乳腺癌和肺癌。本發(fā)明所述的抗血管性癡呆產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種。本發(fā)明所述的抗真菌抗腫瘤產(chǎn)品、抗血管性癡呆產(chǎn)品均是包括醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種，是包括藥物、試劑或食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。本發(fā)明所述的活性天然產(chǎn)物B所使用的藥材原料是指海洋真菌或海洋真菌粗提物，優(yōu)選海洋真菌Massarina tunicata或海洋真菌Massarina tunicata粗提物。
活性天然產(chǎn)物B是預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究抗真菌、抗腫瘤、抗血管性癡呆的活性成分，其使用方式是包括單獨(dú)使用或與其他化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合使用等中的一種，優(yōu)選單獨(dú)使用，均能夠用于制備抗真菌產(chǎn)品、抗腫瘤產(chǎn)品和抗血管性癡呆產(chǎn)品。供試樣品均是采取常規(guī)的制備方法獲得，所得到的活性天然產(chǎn)物B含量一般 <60%,但是通過(guò)純化，能夠得到純化后的活性天然產(chǎn)物B的純度能夠在95%以上，即本發(fā)明所定義的活性天然產(chǎn)物B。也就是說(shuō)，采用活性天然產(chǎn)物B為原料，或者是直接采用含有活性天然產(chǎn)物B的海洋真菌為原料，或者直接采用含有活性天然產(chǎn)物B的海洋真菌粗提物為原料，都能夠直接或間接用于制備抗真菌抗腫瘤產(chǎn)品和抗血管性癡呆產(chǎn)品?；钚蕴烊划a(chǎn)物B優(yōu)選以基本純的形式使用即本發(fā)明所定義的活性天然產(chǎn)物B，如活性天然產(chǎn)物B的純度> 95%。(二)技術(shù)構(gòu)思自主開(kāi)發(fā)創(chuàng)新藥物是中國(guó)目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)具有悠久的歷史， 在預(yù)防和治療疾病方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，因此從中藥中尋找有效的活性成分或發(fā)現(xiàn)其新的用途均是有效的快捷途徑，也是中國(guó)快捷創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢(shì)之所在。陸生微生物發(fā)酵產(chǎn)物一直是制藥工業(yè)的重要資源之一，但近年來(lái)隨著陸地資源的不斷開(kāi)發(fā)，尋找新的微生物或篩選新的活性代謝產(chǎn)物的難度越來(lái)越大，且抗藥性問(wèn)題日益嚴(yán)重，使得新藥的開(kāi)發(fā)面臨著嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。海洋微生物是近年來(lái)的一個(gè)研究熱點(diǎn)。海洋約占地球表面積的71%，蘊(yùn)藏著豐富的微生物資源.。越來(lái)越多的研究也表明，海洋微生物——尤其是那些跟海洋動(dòng)物或海洋植物存在共生或寄生等關(guān)系的微生物——能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)獨(dú)特并具強(qiáng)烈生理活性的代謝產(chǎn)物。而且海洋微生物繁殖快，可利用現(xiàn)代微生物技術(shù)，大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵，有廣闊的應(yīng)用前景?？茖W(xué)家們預(yù)計(jì)，開(kāi)發(fā)新的海洋藥物將寄希望于海洋微生物這一新的領(lǐng)域。從海洋微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物中尋找新的抗腫瘤活性代謝產(chǎn)物，為開(kāi)發(fā)新型抗腫瘤藥物提供先導(dǎo)化合物，通過(guò)對(duì)海洋真菌Massarina sp.，strain CNT-016的深入研究，目前己發(fā)現(xiàn)螺環(huán)內(nèi)酉旨化合物 6-印i-5' -hydroxy-mycosporulone (參見(jiàn)Μ· A. Abdel—Wahab et al. /Phytochemistry 68(2007) 1212-1218)，但尚未進(jìn)行生物活性研究，本發(fā)明研究涉及到的化合物與其有類似母核，并進(jìn)行了抗真菌抗腫瘤活性研究，開(kāi)展了細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。發(fā)明人通過(guò)對(duì)海洋真菌提取物進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，篩選并證明該海洋真菌提取物活性天然產(chǎn)物B的活性和用途，發(fā)明人從而推測(cè)活性天然產(chǎn)物B在預(yù)防、診斷、檢測(cè)、 保護(hù)、治療和研究抗真菌、抗腫瘤、抗血管性癡呆等方面活性的臨床藥效，也應(yīng)主要是通過(guò)活性部位該海洋真菌提取物特別是活性天然產(chǎn)物B的藥效來(lái)發(fā)揮的，研究結(jié)果也證明和證實(shí)了該海洋真菌提取物特別是活性天然產(chǎn)物B具有顯著的藥理活性。發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究的最新發(fā)現(xiàn)是活性天然產(chǎn)物B能夠抵抗β -淀粉樣蛋白致腦細(xì)胞損傷的作用，能夠抵抗過(guò)氧化氫致腦細(xì)胞損傷作用，提高東茛菪堿致癡呆小鼠模型的學(xué)習(xí)記憶功能，提高A β致癡呆小鼠模型學(xué)習(xí)記憶能力，抑制腦缺血再灌注小鼠模型腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化，增強(qiáng)腦缺血再灌注小鼠模型腦組織超氧化物歧化酶活性和減低腦缺血再灌注小鼠模型腦片細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。癡呆特別是血管性癡呆和老年性癡呆嚴(yán)重影響中國(guó)人口的健康和生存質(zhì)量，研制預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆和老年性癡呆等方面的產(chǎn)品，特別是藥物、診斷試劑和保健品等，具有顯著的社會(huì)效益、經(jīng)濟(jì)效益。(三)活性天然產(chǎn)物B的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)本發(fā)明的目的在于提供了一種具有潛在藥用價(jià)值的新化合物，闡明了該化合物的結(jié)構(gòu)，活性天然產(chǎn)物B結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.活性天然產(chǎn)物B在制備抗血管性癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性天然產(chǎn)物B的組合物在制備抗血管性癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性天然產(chǎn)物B的藥材原料在制備抗血管性癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的活性天然產(chǎn)物B 的藥材原料是海洋真菌或海洋真菌粗提物中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的活性天然產(chǎn)物B 的藥材原料是海洋真菌Massarina tunicata或海洋真菌Massarina tunicata粗提物中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性天然產(chǎn)物B的藥材原料的組合物在制備抗血管性癡呆產(chǎn)品中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的活性天然產(chǎn)物B 的藥材原料是海洋真菌或海洋真菌粗提物中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的活性天然產(chǎn)物B 的藥材原料是海洋真菌Massarina tunicata或海洋真菌Massarina tunicata粗提物中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗血管性癡呆產(chǎn)品是指直接用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究血管性癡呆及其直接相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的一種或多種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗血管性癡呆產(chǎn)品是包括藥物、試劑或食品中的一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗血管性癡呆產(chǎn)品是藥物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，該活性天然產(chǎn)物B的結(jié)構(gòu)式如下
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的活性天然產(chǎn)物 B的純度 95%。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的活性天然產(chǎn)物B的應(yīng)用，其特征在于，所述的活性天然產(chǎn)物 B的使用方式是包括單獨(dú)使用或與其他化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合使用中的一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及海洋真菌提取物——活性天然產(chǎn)物B的用途。經(jīng)體外研究試驗(yàn)顯示，活性天然產(chǎn)物B對(duì)白念球菌、新生隱球菌、紅色毛癬菌和煙曲霉菌等常見(jiàn)臨床病原真菌有一定抑制作用，能不同程度抑制肝癌、乳腺癌、肺癌等腫瘤細(xì)胞株的生長(zhǎng)，并能對(duì)大鼠多發(fā)性梗塞性腦缺血損傷等造成的病理?yè)p傷有較強(qiáng)的保護(hù)作用，能夠顯著改善癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，可用于制備抗血管性癡呆產(chǎn)品。本發(fā)明為臨床抗真菌、抗腫瘤、抗血管性癡呆癥及其直接相關(guān)疾病治療提供了一種新的藥物來(lái)源，對(duì)開(kāi)發(fā)利用我國(guó)的藥用資源具有重要價(jià)值。
文檔編號(hào)A61K31/365GK102293767SQ201110193628
公開(kāi)日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2009年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月31日
發(fā)明者馮建平, 徐麗莉, 游飛, 秦路平 申請(qǐng)人:杭州雙馬生物工程有限公司