專利名稱：一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，特別涉及一種鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預(yù)防和治療雌激素缺失的更年期綜合癥以及骨質(zhì)疏松癥中藥物的用途。
背景技術(shù)：
更年期綜合癥是中老年婦女由于卵巢功能逐漸衰退、雌激素水平逐漸下降后伴之而來的包括潮熱、心悸、皮膚干燥、尿頻尿急、腰酸背痛等癥狀，與雌激素水平驟降密切相關(guān)。骨質(zhì)疏松癥則是中老年婦女體內(nèi)雌激素水平下降所引發(fā)的另一個常見疾病，主要是由于雌激素水平下降導(dǎo)致骨組織中存在的雌激素受體的激動作用減弱，引發(fā)骨代謝活躍和不平衡，成骨細(xì)胞活動被抑制而破骨細(xì)胞活動增強(qiáng)，造成骨形成不足，骨吸收亢進(jìn)，表現(xiàn)為骨密度下降，骨生物量降低等癥狀。近年對中老年婦女健康狀況調(diào)查發(fā)現(xiàn)，更年期綜合癥以及骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為影響更年期婦女身體健康和生活質(zhì)量的首要因素。如何通過調(diào)整更年期婦女體內(nèi)雌激素水平來改善更年期婦女健康狀態(tài)和生活質(zhì)量，是社會及中老年婦女自身的迫切要求。植物雌激素是一類天然來源的、能夠與雌激素受體結(jié)合、發(fā)揮弱雌激素作用的植物提取物，具有雌激素樣的雙向調(diào)節(jié)功能。植物雌激素主要分為異黃酮類、香豆雌酚和木質(zhì)素三大類。異黃酮作為其中重要的一類，近年來發(fā)現(xiàn)其對于雌激素相關(guān)癌癥、婦女更年期綜合癥、心血管病、骨質(zhì)疏松癥、早老年癡呆癥有較好的預(yù)防和治療作用，可有效避免人工合成雌激素如雷諾西芬、他莫西芬引發(fā)的子宮內(nèi)膜癌及乳腺癌。目前國內(nèi)報道幾種植物如葛根、人參等異黃酮提取物具有植物雌激素功能。鷹嘴豆(Semen Ciceris Ari ni)為豆科植物，因其籽實(shí)尖如鷹嘴，故名鷹嘴豆。在新疆廣泛栽培種植。在中亞地區(qū)，鷹嘴豆不僅是一種重要的食品，同時也是一種傳統(tǒng)的維吾爾醫(yī)常用藥材，具有補(bǔ)中益氣、溫腎壯陽、主消渴、解面毒、養(yǎng)顏、強(qiáng)骨、健胃、潤肺止咳等功效。用于體倦陽痿、腰膝酸痛、食欲不振、病后體虛、糖尿病及肺癰腫等病癥的預(yù)防和治療。 現(xiàn)代藥理研究證明，鷹嘴豆含有特殊的化學(xué)成分和顯著的生物活性，是一種具有廣泛藥理活性的中藥材，已報道的活性有降血糖鷹嘴豆70 %乙醇提取物和水提物分低(5g/kg)、中(10g/kg)、高(20g/ kg)3個劑量組給小鼠灌胃14天，可明顯降低小鼠血糖活性。推測跟其皂苷化學(xué)成分相關(guān)?？蛊诓捎盟岱ㄌ崛→椬於苟嗵呛?，按照照組及鷹嘴豆多糖低、中、高三個不同濃度劑量組灌胃25d，分別進(jìn)行負(fù)重游泳試驗(yàn)，并對其血清與肝臟的超氧化歧化酶 (Superoxide Dismutase SOD)活性、丙二醛(Maleic Dialdehyde MDA)含量及肌糖原、肝糖原、血清尿素氮、血乳酸水平等進(jìn)行測試。研究結(jié)果顯示鷹嘴豆多糖能延長小鼠的負(fù)重游泳時間，增強(qiáng)小鼠血清和肝臟的SOD活性，降低MDA含量，提高肝糖原、肌糖原儲備量，降低小鼠運(yùn)動后血清尿素和血乳酸水平。結(jié)果表明鷹嘴豆多糖具明顯的抗疲勞功能?？拱┭芯堪l(fā)現(xiàn)，鷹嘴豆中提取的粗黃酮物質(zhì)可顯著抑制胃癌細(xì)胞MGC-9增殖能力。此外，將鷹嘴豆肽以低50mg/kg · d、中100mg/kg · d、高劑量組200mg/kg · d組分別給皮下接種肝癌H22細(xì)胞的小鼠灌胃給藥，研究結(jié)果表明三個劑量均可抑制H22腫瘤的生長， 且沒有阻礙小鼠體重和免疫器官的增長。與腫瘤對照組相比，鷹嘴豆高劑量組可以顯著提高小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的能力、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞吞噬能力(P <0.05)，鷹嘴豆低、中劑量組對其也有一定的改善作用，但是沒有表現(xiàn)出劑量依賴效應(yīng)。降血脂將鷹嘴豆低劑量組(10g/kg/d)，鷹嘴豆高劑量組O0g/kg/d)，將鷹嘴豆粉與普通飼料混合，喂養(yǎng)小鼠12天后，測定其空腹血糖、血清膽固醇(Tc)、甘油三酯(TG)含量，結(jié)果表明鷹嘴豆對高血糖小鼠具有很好的降糖和降血脂作用，對預(yù)防糖尿病及其并發(fā)癥具有積極意義。預(yù)防老年癡呆鷹嘴豆異黃酮提取物低25mg/kg · d、中50mg/kg · d、高劑量組 100mg/kg · d可顯著提高D-半乳糖致衰老模型小鼠模型的腦組織的SOD活性，降低MDA水平，提高衰老小鼠腦組織清除自由基的能力，減少過氧化產(chǎn)物對腦組織的損傷，進(jìn)而改善腦老化的程度，發(fā)揮其抗衰老作用?？共《菌椬於寡克谹對艾滋病毒Hiv-I活性及CD淋巴細(xì)胞早期活化作用影響的研究表明鷹嘴豆芽素A具有抗HIV-I介導(dǎo)的細(xì)胞融合和HIV-I復(fù)制的活性及抑制CD淋巴細(xì)胞早期活化作用。到目前為止，還未見到國內(nèi)外有關(guān)鷹嘴豆芽異黃酮提取物的雌激素樣活性和作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑在治療中老年婦女更年期綜合癥或預(yù)防骨質(zhì)疏松的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，該?dān)椬於寡慨慄S酮提取物作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑在制備預(yù)防或治療更年期綜合癥及骨質(zhì)疏松癥中的藥物及保健品的用途，為鷹嘴豆功能因子的產(chǎn)業(yè)開發(fā)奠定基礎(chǔ)。本發(fā)明所述的一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，該?dān)椬於寡刻崛∥餅辁椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防和治療雌激素缺失的更年期綜合癥中的藥物的用途。該?dān)椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防雌激素缺失的更年期綜合癥中的保健品的用途。該?dān)椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防和治療雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥藥物中的用途。該?dān)椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥保健品中的用途。本發(fā)明所述的一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，其中鷹嘴豆芽提取物為鷹嘴豆異黃酮提取物，是通過發(fā)明專利201010614623. X鷹嘴豆豆芽有效部位及其制備方法和應(yīng)用中獲得的。該有效部位采用溶劑提取法即醇提法或水提法制備，具體操作按下列步驟進(jìn)行a、將鷹嘴豆用常規(guī)方法發(fā)芽并干燥，研磨成粉，過25目篩；b、將干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積濃度為10-100%的甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次1-3小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提物，其中超聲波提取溫度為20-40°C，回流提取溫度為60-80°C ；
C、或?qū)⑿迈r鷹嘴豆豆芽或干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積的純凈水，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次2-4小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮得到水提取物，其中超聲波提取溫度為20-60°C，回流提取溫度為60-100°C ；d、將步驟b的醇提物或步驟c的水提取物用含生藥量0.04g/mL，作為上柱供試液，將上柱供試液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脫，將水洗脫后的聚酰胺置于FL-3大孔樹脂上部，再以濃度10% -100%乙醇洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，即可得到鷹嘴豆豆芽有效部位總皂苷類、異黃酮類；e、再將有效部位總皂苷和異黃酮的含量分別以齊墩果酸和鷹嘴豆芽素A為標(biāo)準(zhǔn)品，用紫外分光光度法測定。本發(fā)明將發(fā)明專利201010614623. X獲得的鷹嘴豆芽異黃酮提取物進(jìn)行了預(yù)防和治療更年期綜合癥以及骨質(zhì)疏松癥中藥物或保健品的用途的研究，是基于實(shí)驗(yàn)及臨床研究而完成的。觀察鷹嘴豆芽異黃酮提取物對卵巢切除的SD成年雌性大鼠子宮發(fā)育、血清中雌性激素及骨相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果表明鷹嘴豆芽異黃酮提取物中、高劑量明顯提高了子宮濕重，增加了子宮內(nèi)膜厚度以及內(nèi)膜基層內(nèi)腺體數(shù)量，表現(xiàn)出對子宮雌激素樣作用。另外，鷹嘴豆芽異黃酮提取物能顯著改善血清中性激素的分泌狀況，提高了血清中17-β雌二醇的濃度， 同時降低了 FSH和LH分泌水平，表明鷹嘴豆芽異黃酮提取物可能對下丘腦-垂體-神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)具有一定的調(diào)控作用，提示鷹嘴豆芽異黃酮提取物對于調(diào)節(jié)中老年婦女絕經(jīng)后的內(nèi)分泌狀況以及改善與FSH、LH有關(guān)的潮熱、心悸、皮膚干燥等更年期癥狀具有重要的意義。對骨代謝的影響的研究發(fā)現(xiàn)，中高劑量的鷹嘴豆芽異黃酮提取物顯著增加骨密度和相對骨體積，增加了骨小梁厚度，降低了骨小梁之間間隙度，并且降低了破骨細(xì)胞數(shù)量，減少了骨吸，提示鷹嘴豆芽異黃酮提取物能夠緩解去卵巢引起的大鼠骨損失，增加骨承載力，減少破骨細(xì)胞的骨吸收，對預(yù)防骨質(zhì)疏松發(fā)生具有積極作用。


圖1為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(假手術(shù)組)，黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標(biāo)記蛋白增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。圖2為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(模型組)，黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標(biāo)記蛋白增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。圖3為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(雌二醇組)，，黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標(biāo)記蛋白增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。圖4為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(鷹嘴豆芽提取物高劑量組)， 黑色箭頭所指內(nèi)膜特異標(biāo)記蛋白增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。圖5為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(假手術(shù)組)，棕色區(qū)域?yàn)樵屑に厥荏w(PR)的表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。圖6為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(模型組)，棕色區(qū)域?yàn)樵屑に厥荏w(PR)的表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。圖7為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(雌二醇組)，棕色區(qū)域?yàn)樵屑に厥荏w(PR)的表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。圖8為本發(fā)明大鼠子宮免疫組化分析組織形態(tài)學(xué)圖(鷹嘴豆芽提取物高劑量組)，棕色區(qū)域?yàn)樵屑に厥荏w(PR)的表達(dá)，圖為100倍放大倍數(shù)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 (鷹嘴豆芽異黃酮提取物在制備預(yù)防和治療婦女雌激素缺失的更年期綜合癥的藥物中的用途)鷹嘴豆芽異黃酮提取物對雌性SD大鼠子宮以及雌激素水平的影響受試藥物戊酸雌二醇(Estradiol Valerate)，先靈(廣州)藥業(yè)有限公司出品， 批號(J20080036)，用玉米油制成懸浮液。鷹嘴豆異黃酮提取物由本實(shí)驗(yàn)室通過下列步驟完成a、將鷹嘴豆用常規(guī)方法發(fā)芽并干燥，研磨成粉，過25目篩；b、將干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積濃度為10-100%的甲醇或乙醇或異丙醇或丁醇，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次1-3小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，得到醇提物，其中超聲波提取溫度為20-40°C，回流提取溫度為60-80°C ；C、或?qū)⑿迈r鷹嘴豆豆芽或干燥的鷹嘴豆豆芽粉中加入2-10倍體積的純凈水，用超聲波或冷浸或加熱回流提取1-15次，每次2-4小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮得到水提取物，其中超聲波提取溫度為20-60°C，回流提取溫度為60-100°C ；d、將步驟b的醇提物或步驟c的水提取物用含生藥量0. 04g/mL,作為上柱供試液，將上柱供試液拌入聚酰胺粉末中，用水洗脫，將水洗脫后的聚酰胺置于FL-3大孔樹脂上部，再以濃度10% -100%乙醇洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，即可得到鷹嘴豆豆芽有效部位總皂苷類、異黃酮類；e、再將有效部位總皂苷和異黃酮的含量分別以齊墩果酸和鷹嘴豆芽素A為標(biāo)準(zhǔn)品，用紫外分光光度法測定。通過該方法獲得的異黃酮含量73. 36%，按其中所含天然植物雌激素的量進(jìn)行計(jì)算和使用，分別配成不同濃度溶液，所有藥物由玉米油配制，溫度4°C儲存?zhèn)溆?。受試動物十周齡雌性SD 二級大鼠，購于新疆地方病防治研究所實(shí)驗(yàn)動物中心 (合格證號20110222)，體重220(士 IOg)。分假手術(shù)組、模型組、雌二醇組、鷹嘴豆芽異黃酮提取物低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組8只。造模除假手術(shù)組外，其余各組從大鼠腹中線剖開腹部，摘除雙側(cè)卵巢，然后手術(shù)縫合，假手術(shù)組的大鼠重復(fù)手術(shù)步驟，但不摘除卵巢。給藥方法手術(shù)后，各組大鼠正常飲食2周，手術(shù)后第3周開始給藥，持續(xù)5周，正常組、模型組和假手術(shù)組每日以給藥組相同體積的玉米油灌胃，雌二醇組，每日灌胃給予雌二醇0.25mg/(kg.day)；鷹嘴豆芽異黃酮提取物低劑量組，灌胃200mg/(kg. day)；鷹嘴豆芽異黃酮提取物中劑量組，灌胃500mg/(kg.day)；鷹嘴豆芽異黃酮提取物高劑量組，灌胃 IOOOmg/ (kg. day)。指標(biāo)觀察1)子宮濕重觀察各組給藥5周后麻醉，剪開腹正中線，將子宮與周圍完全剝離， 稱重。2)免疫組化分析新鮮子宮組織用10%的PBS配制的福爾馬林溶液固定后制備石蠟切片，用HE染色及免疫組化法觀察組織形態(tài)及特異蛋白pS2和冊的表達(dá)情況。
3)激素測定各組給藥5周后麻醉，腹腔注射，腹主動脈取血，分離血清，一 20°C貯存，采用放免方法測血清中雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)及促黃體生成素(LH)含量。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)均以均值士標(biāo)準(zhǔn)差(means士s)表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用t檢驗(yàn)，P < 0. 05為差異顯著，P <0.01為差異極顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果鷹嘴豆芽異黃酮提取物對SD大鼠子宮重量的影響表1鷹嘴豆芽異黃酮提取物對去卵巢大鼠子宮發(fā)育的影響(means士s，η = 8)
權(quán)利要求
1.一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，其特征在于該?dān)椬於寡刻崛∥餅辁椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防和治療雌激素缺失的更年期綜合癥中的藥物的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于該?dān)椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防雌激素缺失的更年期綜合癥中的保健品的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于該?dān)椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防和治療雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥藥物中的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于該?dān)椬於寡慨慄S酮提取物在制備預(yù)防雌激素缺失的骨質(zhì)疏松癥保健品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鷹嘴豆芽提取物在防治雌激素缺失的藥物的用途，該?dān)椬於寡刻崛∥餅辁椬於寡慨慄S酮提取物作為雌激素受體調(diào)節(jié)劑在制備預(yù)防或治療更年期綜合癥及骨質(zhì)疏松癥中的藥物及保健品的用途，本發(fā)明經(jīng)試驗(yàn)表明鷹嘴豆芽異黃酮提取物能直接作用于子宮，顯著提高血清中雌二醇水平，能對下丘腦-垂體-神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)具有調(diào)控作用，顯著增加了卵巢切除的SD大鼠的股骨密度和相對骨體積，增加了骨小梁厚度，降低了骨小梁之間分離度，并且降低了破骨細(xì)胞數(shù)量，能夠緩解去卵巢引起的大鼠股骨的骨丟失，增加了股骨的承載力，對于調(diào)節(jié)中老年婦女絕經(jīng)后的內(nèi)分泌狀況以及改善潮熱、心悸、皮膚干燥等更年期癥狀及骨質(zhì)疏松癥發(fā)生具有重要的意義，為鷹嘴豆功能因子的產(chǎn)業(yè)開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
文檔編號A61K36/48GK102488740SQ201110414349
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月13日
發(fā)明者王潔, 阿吉艾克拜爾·艾薩, 阿布力米提·伊力, 陳花, 馬海蓉, 高彥華 申請人:中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所