專利名稱：一種康艾納米注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種康艾納米注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米中藥主要是指運(yùn)用納米技術(shù)制造的，粒徑小于100納米的中藥有效成分、有效部位、原藥及復(fù)方制劑。生物機(jī)體對(duì)藥物的吸收、代謝是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，中藥制劑產(chǎn)生的藥理效應(yīng)不能僅僅歸之于藥物特有的化學(xué)組成還與該制劑的物理狀態(tài)密切相關(guān)。因此，改變藥物制劑的物理狀態(tài)是新藥研制的一種有效方法。在改變物理狀態(tài)方面，改變藥物的單元尺寸是十分有效的。當(dāng)顆粒尺寸進(jìn)入納米量級(jí)時(shí)由于量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，納米粒子呈現(xiàn)出新奇的物理化學(xué)和生物學(xué)特性。這就是應(yīng)用納米技術(shù)于中藥研究可能使藥物活性和生物利用度提高乃至產(chǎn)生新的特性依據(jù)所在。
同傳統(tǒng)中藥相比，納米中藥具有以下特點(diǎn)①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適應(yīng)癥，中藥加工至納米尺寸時(shí)，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給藥途徑。
目前納米技術(shù)在中藥研究中存在以下的問題。第一，納米中藥的制備困難我國(guó)雖已制備一些納米級(jí)的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復(fù)雜，不同的成分由于其作用部位、作用機(jī)制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時(shí)納米中藥應(yīng)該有它自己的一套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其生產(chǎn)規(guī)范化。第二，納米中藥的毒副作用藥物制成納米微粒，其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)均發(fā)生了顯著的變化，這些變化對(duì)人體是否有毒副反應(yīng)均未有有關(guān)的研究報(bào)道。但由于納米材料的特殊性，除了可穿透皮膚，還會(huì)進(jìn)入細(xì)胞器內(nèi)，是否會(huì)直接參與或作為催化劑擾亂機(jī)體正常的化學(xué)反應(yīng)，均未見有關(guān)報(bào)道。此外，納米中藥還可以通過(guò)機(jī)體的屏障系統(tǒng)，那它是否會(huì)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，精子的生成及其活力、胎兒的發(fā)育等，這些問題均無(wú)法回避。第三，中藥在納米級(jí)粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團(tuán)聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩(wěn)定性帶來(lái)很大的困難。第四，成本提高由于現(xiàn)有技術(shù)水平及設(shè)備的限制，造成納米中藥在制備中的花費(fèi)比傳統(tǒng)中藥的制備要高出不少。
目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術(shù)對(duì)少數(shù)成分比較明確的單體有效成分進(jìn)行納米處理制成納米制劑，或?qū)⒃纤幹苯臃鬯槌杉{米級(jí)，對(duì)大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因?yàn)橹兴幱行С煞趾陀行Р课惶貏e是中藥復(fù)方中有效部位本身就是一個(gè)“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個(gè)難題，而且由于中藥成分比較復(fù)雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術(shù)是醫(yī)藥科研工作者的重要研究課題。
康艾注射液是由黃芪、人參、苦參素組成的中藥注射液，具有益氣扶正，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。用于原發(fā)性肝癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科腫瘤；各種原因引起的白細(xì)胞低下及減少癥。慢性乙型肝炎的治療。藥理研究表明康艾注射液具有以下的藥理作用(1)直接殺死癌細(xì)胞(縮小腫塊)(2)可切斷癌細(xì)胞NDA分子鏈的合成，抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)(控制和穩(wěn)定病情)；(3)增強(qiáng)體質(zhì)、提高癌細(xì)胞的侵蝕；(4)具有止痛、止吐、止瀉作用，以及快速升高白細(xì)胞效果；臨床數(shù)據(jù)表明康艾注射液對(duì)于原發(fā)性肝癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科腫瘤等有特效。
但康艾注射液由于含有苦參素，在臨床應(yīng)用中除了局部使用有輕度刺激外，劑量大時(shí)還會(huì)引起頭暈、便秘、惡心、過(guò)敏等不良反應(yīng)發(fā)生，而且苦參素類成分穩(wěn)定性差，需避光，在長(zhǎng)期貯存過(guò)程中苦參堿和氧化苦參堿會(huì)發(fā)生相互轉(zhuǎn)化，這些都影響了康艾注射液的質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，本發(fā)明研究人員經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)研究，將提取得到的康艾有效部位加適量載體采用本發(fā)明工藝方法制備成納米注射制劑，本發(fā)明方法簡(jiǎn)便，易于大生產(chǎn)，制備得到的制劑粒徑達(dá)到納米級(jí)，采用本發(fā)明方法制備的納米制劑載藥量大，穩(wěn)定性好，而且能顯著提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向性，藥理實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明康艾納米注射制劑療效更顯著，且刺激性小，安全性好。
本發(fā)明旨在提供一種穩(wěn)定、安全、療效好、具有靶向作用的康艾納米注射制劑。
本發(fā)明還提供了上述康艾納米注射制劑的制備方法。
本發(fā)明與康艾注射液比較，其特征在于采用本發(fā)明工藝將康艾有效部位制備成達(dá)到納米粒徑的制劑，采用本發(fā)明方法制備的納米制劑具有顯著的靶向性。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一、工藝制法(1)制劑處方重量份組成為康艾有效部位1.5-3份，載體6-15份。
(2)康艾有效部位的制備按照康艾注射液[WS-11222(ZD-1222)-2002]項(xiàng)下的制法進(jìn)行提取純化，人參和黃芩的最后濾液減壓濃縮并真空干燥，加苦參素混勻，得到本發(fā)明康艾有效部位。
(3)方法一、將康艾有效部位溶解于蒸餾水中，加入吐溫-80，攪拌均勻，再在不斷攪拌條件下加入藥物載體中，繼續(xù)攪拌30分鐘，用9-15μm玻砂漏過(guò)濾，濾液稀釋至4倍，成散射現(xiàn)象的乳狀液，再用0.45μm濾膜過(guò)濾，即得藥物混懸液。
方法二、將藥用載體同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；取康艾有效部位溶解于蒸餾水中，加入Pluronic F68或吐溫-80，攪拌均勻；在20℃時(shí)，將藥用載體溶液通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水溶液中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得藥物混懸液。
(4)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑。
本發(fā)明藥用載體為聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、甲基丙烯酸、殼聚糖、明膠等中的一種或幾種，本發(fā)明納米注射制劑可以為納米水針劑、納米粉針劑、納米輸液制劑。
本發(fā)明納米水針劑、納米輸液劑加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制劑的穩(wěn)定性，防止納米粒聚集。
本發(fā)明納米粉針制劑的賦形劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、葡聚糖中的一種或兩種。
本發(fā)明藥物載體還可以采用以下方法制備方法一、取處方量的康艾有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-20或60加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時(shí)間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
方法二、取處方量的康艾有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入適量相同溫度甘油和泊洛沙姆的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載40MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
方法三、按處方稱取乳化劑，加少量吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取脂質(zhì)加入處方量康艾有效部位，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時(shí)后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
以上方法所用脂質(zhì)可以為脂肪酸甘油酯類(包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、單硬脂酸甘油酯)及脂肪酸類(如硬脂酸、棕櫚酸)等。
所用乳化劑可以為磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等)、Pluronic F68、泊洛沙姆、聚山梨醇、膽酸鹽、四丁酚醛等。
本發(fā)明所用的以上載體制備工藝是我們經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)研究和優(yōu)選的結(jié)果，在研究過(guò)程中我們采用了很多納米技術(shù)工藝并進(jìn)行了比較，有的工藝難以制備成納米藥物，而有的工藝即便制備成納米藥物，也達(dá)不到本發(fā)明制劑的靶向效果。
二、質(zhì)量檢測(cè)儀器H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關(guān)光譜儀(英國(guó)Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺(tái)式高速離心機(jī)。
檢測(cè)依據(jù)參照《中華人民共和國(guó)藥典》2005版二部附錄XIX E指導(dǎo)原則項(xiàng)下的方法。
1、形態(tài)觀察及粒徑將本發(fā)明納米藥物在透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察，可見呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無(wú)粘連。根據(jù)納米藥物的顯微照片測(cè)定了500個(gè)，平均粒徑為40.5nm，最大粒徑為100nm，最小粒徑為20.0nm，且粒徑分布符合正態(tài)分布規(guī)律。
2、包封率和載藥量測(cè)定參照康艾注射液項(xiàng)下苦參素的含量測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定，并用下述公式計(jì)算包封率和載藥量包封率(％)＝(投藥量－游離藥物量)/投藥量×100％；載藥量(％)＝(投藥量－游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。結(jié)果以苦參素計(jì)平均包封率為92.6％，載藥量可達(dá)10％-25％。
3、穩(wěn)定性考察將本發(fā)明納米藥物分別置于小瓶?jī)?nèi)，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環(huán)境中放置，于0、1、2和3月觀測(cè)納米藥物的外觀、大小、再分散性等。結(jié)果均未見明顯變化，3種條件下的納米藥物再分散性保持良好，無(wú)聚合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果見表1。
表1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4、加速實(shí)驗(yàn)含量測(cè)定康艾注射液(吉林長(zhǎng)白山制藥股份有限公司)；本發(fā)明康艾納米注射制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室制備)；將以上制劑分別置40℃，RH75％條件下放置6個(gè)月，分別測(cè)定制劑中相對(duì)不穩(wěn)定的成分苦參素的含量，考察加速條件下康艾納米制劑含量的變化(以0月含量為100％計(jì)算)含量額定參照康艾注射液項(xiàng)下苦參素的含量測(cè)定方法。結(jié)果見表2。
表2制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)苦參素含量測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明在加速實(shí)驗(yàn)過(guò)程中康艾注射液的苦參素含量下降明顯，而采用本發(fā)明方法制備的康艾納米注射制劑變化較小，說(shuō)明本發(fā)明康艾納米制劑的制備方法顯著提高了制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，具有重要的實(shí)際意義。
三、藥理和靶向?qū)嶒?yàn)試藥與動(dòng)物康艾注射液(吉林長(zhǎng)白山制藥股份有限公司)；本發(fā)明康艾納米注射制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室制備)Wistar大鼠，體重180-220g；健康小鼠，體重18-22g；瘤株小鼠S180，小鼠肝癌Heps(廣州市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。
1.抗腫瘤試驗(yàn)1.1對(duì)小鼠移植性肝癌Heps的影響和靶向作用無(wú)菌抽取接種后第7d的肝癌Heps荷瘤小鼠腹水，加4倍量生理鹽水混勻，立即接種子小鼠右前肢腋窩處皮下，每只接種0.2ml，接種后24h隨機(jī)分組，每組10只，小鼠尾靜脈注射給藥，給藥劑量相當(dāng)于3g生藥/kg，給藥容積同為0.2ml/只，對(duì)照組給予等量生理鹽水，每日給藥1次，連續(xù)給藥10d，于末次給藥后24h脫頸處死小鼠，剝?nèi)∧[瘤稱重，取腫瘤細(xì)胞然后按組織∶生理鹽水為1∶1.5(W/V)的比例勻漿，離心10min(2000rpm)，取上清液用HPLC法測(cè)定苦參素(以氧化苦參堿計(jì))的含量。同時(shí)末次給藥后1h取血測(cè)定血清中的苦參素(以氧化苦參堿計(jì))濃度。結(jié)果見表3、表4。
表3對(duì)移植性肝癌Heps小鼠的影響

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與康艾注射液組比較ΔP＜0.01表4對(duì)移植性肝癌Heps的靶向作用

結(jié)果表明本發(fā)明康艾納米注射制劑能顯著抑制小鼠移植性肝癌Heps的生長(zhǎng)，具有比康艾注射液更好的藥理作用，本發(fā)明納米注射制劑與康艾注射液比較血清中藥物濃度相當(dāng)，而腫瘤細(xì)胞中有效成分含量顯著增加，表明本發(fā)明納米注射制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較好的靶向性。
1.2對(duì)小鼠S180腫瘤的抑制作用和靶向作用取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小時(shí)稱重，分組，每組10只，給藥組小鼠每日尾靜脈給藥一次，給藥劑量為3g生藥/kg，給藥容積同為0.2ml/只，對(duì)照組給予等量生理鹽水，共7天。停藥次日處死小鼠，稱體重并細(xì)心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱取瘤重，并計(jì)算抑瘤率，將稱重后的瘤塊按組織∶生理鹽水為1∶1.5(W/V)的比例勻漿，離心10min(2000rpm)，取上清液，用HPLC法測(cè)定腫瘤組織和血清中的苦參素(以氧化苦參堿計(jì))的含量。同時(shí)末次給藥后1h取血測(cè)定血清中的苦參素(以氧化苦參堿計(jì))濃度。結(jié)果見表5、表6。
表5對(duì)小鼠S180腫瘤生長(zhǎng)抑制作用

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與康艾注射液比較ΔP＜0.01表6對(duì)小鼠S180腫瘤的靶向作用

結(jié)果表明本發(fā)明康艾納米注射制劑能顯著抑制小鼠腫瘤S180生長(zhǎng)，具有比康艾注射液更好的藥理作用，本發(fā)明納米注射制劑與康艾注射液比較血清中藥物濃度相當(dāng)，而腫瘤細(xì)胞中有效成分顯著增加，表明本發(fā)明納米注射制劑具有較好的靶向性。
1.3對(duì)荷瘤S180小鼠死亡率和存活時(shí)間的影響取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，于接種腫瘤后一周，即第八天開始按1.1方法給藥，讓其自然死亡，待對(duì)照組動(dòng)物全部死亡后，比較死亡率，并比較90天各組動(dòng)物的存活時(shí)間差異，設(shè)給藥組與對(duì)照組，每組小鼠20只，結(jié)果見表7。
表7對(duì)小鼠死亡率和存活時(shí)間的影響


注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與康艾注射液組比較ΔP＜0.05結(jié)果表明本發(fā)明康艾納米注射制劑能顯著降低荷瘤小鼠死亡率，延長(zhǎng)荷瘤小鼠存活時(shí)間，與康艾注射液比較作用更顯著。
2.對(duì)小鼠白細(xì)胞減少癥的影響取體重18-22g的昆明種小鼠50只，隨機(jī)分5組，每組10只，雌雄各半，即正常對(duì)照組、環(huán)磷酰胺組、康艾注射液組、本發(fā)明康艾納米注射制劑組。除正常對(duì)照組外均給予環(huán)磷酰胺100g/kg腹腔注射，每日1次，連續(xù)3日，同時(shí)各給藥組分別靜脈給藥，給藥劑量相當(dāng)于生藥3g/kg，每天給藥2次，連續(xù)8天，分別于第4天和第8天由眼眶靜脈取血，鏡檢白細(xì)胞總數(shù)，結(jié)果見表8。
表8對(duì)小鼠白細(xì)胞減少癥的影響

注與正常對(duì)照組比較**P＜0.01，與康艾注射液組比較ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于環(huán)磷酰胺所致的白細(xì)胞減少癥，本發(fā)明康艾納米注射制劑組與康艾注射液比較具有更好的升高白細(xì)胞作用。
3.對(duì)四氯化碳所致大鼠急性肝損傷的影響取體重180-220g的Wistar大鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分成生理鹽水組、模型組、康艾注射液組、本發(fā)明組。參照文獻(xiàn)方法(李儀奎，等.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).上海上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991834)，除生理鹽水組外，模型及給藥各組均以15％四氯化碳橄欖油溶液，按2ml/kg體重，每隔一天皮下注射一次，連續(xù)注射4次。同時(shí)，生理鹽水組靜脈注射生理鹽水，給藥組靜脈注射康艾注射液和本發(fā)明康艾納米注射制劑，給藥劑量相當(dāng)于2.5g生藥/kg，連續(xù)7天，末次給藥24h后，采集血液，分離血清，測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(SGOT)及乳酸脫氨酶(LDH)，結(jié)果見表9，并取肝臟樣品，10％甲醛溶液固定，作病理學(xué)切片檢查。
表9對(duì)CCl4肝損傷的影響

注與生理鹽水組比較，**p＜0.01，與模型組組比較，ΔP＜0.05，ΔΔp＜0.01結(jié)果顯示本發(fā)明康艾納米注射制劑與康艾注射液比較具有更好的降低急性肝損傷大鼠血清SGOT及LDH含量的作用，本發(fā)明康艾納米注射制劑組SGPT含量也有顯著下降。病理學(xué)檢查也發(fā)現(xiàn)各給藥組均可顯著抑制四氯化碳所致大鼠肝臟炎性反應(yīng)，其中本發(fā)明康艾納米注射制劑組白具有比康艾注射液更顯著的作用。
4.血管刺激性考察取家兔8只，隨機(jī)均分2組，每組4只，分別于左耳把家兔置于固定器中，且頭用兔頭固定儀固定，用酒精將皮膚消毒后，于右側(cè)耳緣靜脈注射康艾注射液和本發(fā)明康艾納米注射制劑，于另一側(cè)對(duì)應(yīng)部位注射同一體積的生理鹽水作為對(duì)照，每日注射1次，連續(xù)1周，觀察兔耳緣靜脈反應(yīng)，每日觀察注射部位血管有無(wú)發(fā)紅、水腫、周圍有無(wú)滲血，觸摸血管有無(wú)變硬現(xiàn)象，左右耳比較觀察。于末次給藥后24h，將動(dòng)物處死，取下兩耳，進(jìn)行組織切片檢查，切片部位為進(jìn)針部位的向心端，距進(jìn)針部位1-4cm，分1-2.5cm和2.5-4cm兩段取樣。
觀察指標(biāo)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)觀察方法包括肉眼觀察和顯微鏡下病理觀察。觀察給藥血管及其周圍組織的變化，顯微鏡下觀察耳緣靜脈有無(wú)血栓形成、內(nèi)皮損傷及血管周圍組織的病理變化情況。對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分。①血管變化。肉眼觀察無(wú)明顯充血記0分，輕度充血發(fā)紅、紋路清晰記1分，充血發(fā)紅、紋路不清記2分，重度充血、呈紫紅色記3分；顯微鏡觀察血管內(nèi)皮及血管壁完整記0分，有內(nèi)皮損傷記1分，有血栓栓塞記2分，血管破裂記3分。②血管周圍組織變化。肉眼觀察無(wú)明顯水腫記0分，輕微水腫記1分，明顯水腫記2分，嚴(yán)重水腫記3分；顯微鏡觀察周圍組織正常記0分，水腫記1分，出血記2分，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)記3分。將每組4只家兔各項(xiàng)觀察指標(biāo)得分累加，計(jì)算各組平均得分值，見表10。
表10刺激性試驗(yàn)結(jié)果

由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知本發(fā)明康艾納米注射制劑與康艾注射液比較刺激性具有明顯改善。
5.溶血毒性考察2％紅細(xì)胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時(shí)為止。將所得的紅細(xì)胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗(yàn)方法取試管6支，按表中的配比量依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對(duì)照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時(shí)后，每隔1小時(shí)觀察1次，共觀察2小時(shí)。結(jié)果見表11。
表11溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果以第3試管為準(zhǔn)，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見有紅細(xì)胞破裂，說(shuō)明本品不溶血，安全性好。
6.急性毒性實(shí)驗(yàn)取Wistar大鼠80只，雌雄各半。禁食24h，隨機(jī)分4組，每組20只。濃縮成相同的生藥濃度，各組分別尾靜脈注射藥物，給藥劑量按生藥量折算相當(dāng)于150g生藥/kg，每天給藥3次，連續(xù)7天，觀察小鼠死亡情況，結(jié)果見表12。
表12急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明康艾納米注射制劑與康艾注射液比較安全性更好。
小結(jié)以上藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明康艾納米注射制劑藥理作用顯著好于康艾注射液，且本發(fā)明康艾納米注射制劑具有更好的靶向性和安全性。
四、制備實(shí)施例實(shí)施例1取人參100g，用90％乙醇回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.20(65℃)的清膏，備用。黃芪300g加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.20(65℃)的清膏，與人參清膏合并，加乙醇使含醇量達(dá)75％，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6-7，靜置12小時(shí)，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.15(65℃)的清膏，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6-7，靜置，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加注射用水至400ml，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6-7，100℃滅菌30分鐘，冷藏，抽濾。用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至6-7，加活性炭適量，攪勻，煮沸15分鐘，濾過(guò)，濾液減壓濃縮并真空干燥，與苦參素10g合并，混勻，得到本發(fā)明康艾有效部位。
實(shí)施例2(1)將康艾有效部位15g溶解于200ml蒸餾水中，加入吐溫-80 1g，攪拌均勻，再在不斷攪拌條件下加入聚氰基丙烯酸烷酯60g中，繼續(xù)攪拌30分鐘，用9-15μm玻砂漏斗過(guò)濾，濾液稀釋至600ml，成散射現(xiàn)象的乳狀液，再用0.45μm濾膜過(guò)濾，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g適量，加注射用水至20000ml，用氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇50g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
實(shí)施例3(1)將康艾有效部位20g溶解于100ml蒸餾水中，加入吐溫-80 1g，攪拌均勻，再在不斷攪拌條件下加入甲基丙烯酸80g中，繼續(xù)攪拌30分鐘，用9-15μm玻砂漏過(guò)濾，濾液稀釋至600ml，成散射現(xiàn)象的乳狀液，再用0.45μm濾膜過(guò)濾，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至全量，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖60g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
實(shí)施例4(1)將康艾有效部位30g溶解于150ml蒸餾水中，加入吐溫-80 2g，攪拌均勻，再在不斷攪拌條件下加入聚乳酸150g中，繼續(xù)攪拌30分鐘，用9-15μm玻砂漏過(guò)濾，濾液稀釋至700ml，成散射現(xiàn)象的乳狀液，再用0.45μm濾膜過(guò)濾，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖40g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
實(shí)施例5(1)將聚丙交酯-乙交酯70g同無(wú)水乙醇500ml混合，搖勻，得透明溶液；取康艾有效部位20g溶解于200ml蒸餾水中，加入Pluronic F68 1g，攪拌均勻；在20℃時(shí)，將聚丙交酯-乙交酯溶液通過(guò)硅膠管射入電磁攪拌的水溶液中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇60g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
實(shí)施例6(1)將聚丙交酯-乙交酯60g、明膠40g同500ml無(wú)水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；取康艾有效部位20g溶解于200ml蒸餾水中，加入吐溫-80 1g，攪拌均勻；在20℃時(shí)，將聚丙交酯-乙交酯和明膠的溶液通過(guò)細(xì)針頭射入電磁攪拌的水溶液中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入右旋糖酐30g和乳糖30g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
實(shí)施例7(1)取康艾有效部位20g、卵磷脂50g、單硬脂酸甘油酯40g，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-20 2g加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時(shí)間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入右旋糖酐30g和甘露醇30g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
實(shí)施例8(1)取康艾有效部位20g、卵磷脂60g、硬脂酸40g，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油2g和泊洛沙姆2g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載40MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖30g和甘露醇30g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
實(shí)施例9(1)取卵磷脂50g，加吐溫80 1g，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取三窬酸甘油酯60g，加入康艾有效部位20g，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時(shí)后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入右旋糖酐50g，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾粉針制劑500瓶。
權(quán)利要求
1.一種康艾納米注射制劑，其特征在于它是將人參、黃芩提取物和苦參素組成的康艾有效部位配以載體制成的納米級(jí)的注射制劑，其中康艾有效部位1.5-3重量份、載體6-15重量份。其特征還在于它具有靶向作用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種康艾納米注射制劑，其特征在于所述的納米級(jí)為20-100nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的康艾納米注射制劑，其制備方法為(1)主藥混懸液的制備方法一、將康艾有效部位溶解于蒸餾水中，加入吐溫-80，攪拌均勻，再在不斷攪拌條件下加入藥物載體中，繼續(xù)攪拌30分鐘，用9-15μm玻砂漏過(guò)濾，濾液稀釋至4倍，成散射現(xiàn)象的乳狀液，再用0.45μm濾膜過(guò)濾，即得藥物混懸液。方法二、將藥用載體同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；取康艾有效部位溶解于蒸餾水中，加入Pluronic F68或吐溫-80，攪拌均勻；在20℃時(shí)，將藥用載體溶液通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水溶液中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得藥物混懸液。(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明康艾納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明康艾納米粉針制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種康艾納米注射制劑及其制備方法，將康艾有效部位與適宜量的載體與其它輔料采用本發(fā)明工藝方法制成納米載體，并制備成水針劑、粉針劑和輸液劑，本發(fā)明制劑穩(wěn)定性好，具有靶向作用，藥理實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明納米注射制劑安全性好、具有更好的療效。
文檔編號(hào)A61K9/19GK1883556SQ20051007749
公開日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2005年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月24日
發(fā)明者張晴龍 申請(qǐng)人:張晴龍