專(zhuān)利名稱(chēng)：一種復(fù)方苦參納米注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方苦參納米注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米中藥主要是指運(yùn)用納米技術(shù)制造的，粒徑小于100納米的中藥有效成分、有效部位、原藥及復(fù)方制劑。生物機(jī)體對(duì)藥物的吸收、代謝是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，中藥制劑產(chǎn)生的藥理效應(yīng)不能僅僅歸之于藥物特有的化學(xué)組成還與該制劑的物理狀態(tài)密切相關(guān)。因此，改變藥物制劑的物理狀態(tài)是新藥研制的一種有效方法。在改變物理狀態(tài)方面，改變藥物的單元尺寸是十分有效的。當(dāng)顆粒尺寸進(jìn)入納米量級(jí)時(shí)由于量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，納米粒子呈現(xiàn)出新奇的物理化學(xué)和生物學(xué)特性。這就是應(yīng)用納米技術(shù)于中藥研究可能使藥物活性和生物利用度提高乃至產(chǎn)生新的特性依據(jù)所在。
同傳統(tǒng)中藥相比，納米中藥具有以下特點(diǎn)①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適應(yīng)癥，中藥加工至納米尺寸時(shí)，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給藥途徑。
目前納米技術(shù)在中藥研究中存在以下的問(wèn)題。第一，納米中藥的制備困難我國(guó)雖已制備一些納米級(jí)的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復(fù)雜，不同的成分由于其作用部位、作用機(jī)制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時(shí)納米中藥應(yīng)該有它自己的一套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其生產(chǎn)規(guī)范化。第二，納米中藥的毒副作用藥物制成納米微粒，其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)均發(fā)生了顯著的變化，這些變化對(duì)人體是否有毒副反應(yīng)均未有有關(guān)的研究報(bào)道。但由于納米材料的特殊性，除了可穿透皮膚，還會(huì)進(jìn)入細(xì)胞器內(nèi)，是否會(huì)直接參與或作為催化劑擾亂機(jī)體正常的化學(xué)反應(yīng)，均未見(jiàn)有關(guān)報(bào)道。此外，納米中藥還可以通過(guò)機(jī)體的屏障系統(tǒng)，那它是否會(huì)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，精子的生成及其活力、胎兒的發(fā)育等，這些問(wèn)題均無(wú)法回避。第三，中藥在納米級(jí)粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團(tuán)聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩(wěn)定性帶來(lái)很大的困難。第四，成本提高由于現(xiàn)有技術(shù)水平及設(shè)備的限制，造成納米中藥在制備中的花費(fèi)比傳統(tǒng)中藥的制備要高出不少。
目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術(shù)對(duì)少數(shù)成分比較明確的單體有效成分進(jìn)行納米處理制成納米制劑，或?qū)⒃纤幹苯臃鬯槌杉{米級(jí)，對(duì)大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因?yàn)橹兴幱行С煞趾陀行Р课惶貏e是中藥復(fù)方中有效部位本身就是一個(gè)“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個(gè)難題，而且由于中藥成分比較復(fù)雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術(shù)是醫(yī)藥科研工作者的重要研究課題。
復(fù)方苦參注射液是以苦參、白土苓為原料經(jīng)科學(xué)提煉而制成的注射劑，具有清熱利濕，涼血解毒，散結(jié)止痛的功效，用于癌性疼痛的出血。復(fù)方苦參注射液既有良好的抗癌效應(yīng)，又能有效緩解疼痛，研究表明復(fù)方苦參注射液不僅對(duì)癌性疼痛、癌性出血、改善患者生存質(zhì)量有效，還有使瘤體縮小的作用。但復(fù)方苦參注射液在臨床應(yīng)用中除了局部使用有輕度刺激外，還有頭暈、便秘、惡心、過(guò)敏等不良反應(yīng)發(fā)生的報(bào)道，有速發(fā)型和緩發(fā)型二類(lèi)，也有出現(xiàn)寒戰(zhàn)、高熱輸液反應(yīng)的。復(fù)方苦參注射液其所含成分穩(wěn)定性差，在長(zhǎng)期貯存過(guò)程中苦參堿和氧化苦參堿兩成分會(huì)發(fā)生相互轉(zhuǎn)化，這寫(xiě)都影響了復(fù)方苦參注射液的質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用。
專(zhuān)利(申請(qǐng)?zhí)?1102554)公開(kāi)了一種“納米復(fù)方苦參制劑藥物及其制備方法”，該方法將各藥物的納米原料按配比配制，且制備方法實(shí)用性較差。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，本發(fā)明研究人員經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)研究，將提取得到的復(fù)方苦參有效部位加適量載體采用本發(fā)明工藝方法制備成納米注射制劑，本發(fā)明方法簡(jiǎn)便，易于大生產(chǎn)，制備得到的制劑粒徑達(dá)到納米級(jí)，采用本發(fā)明方法制備的納米制劑載藥量大，穩(wěn)定性好，而且能顯著提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向性，藥理實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑療效更顯著，靶向性好，且刺激性小，安全性好。
本發(fā)明旨在提供一種穩(wěn)定、安全、療效好、具有靶向作用的復(fù)方苦參納米注射制劑。
本發(fā)明還提供了上述復(fù)方苦參納米注射制劑的制備方法。
本發(fā)明與復(fù)方苦參注射液比較，其特征在于采用本發(fā)明工藝將復(fù)方苦參制備成達(dá)到納米粒徑的制劑，采用本發(fā)明方法制備的納米制劑具有顯著的靶向性。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一、工藝制法(1)制劑處方重量份組成為復(fù)方苦參有效部位2-5份，載體10-20份。
(2)復(fù)方苦參有效部位的制備按照《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑分冊(cè)第十四冊(cè)復(fù)方苦參注射液項(xiàng)下的制法進(jìn)行提取醇沉，藥液回收乙醇后液壓濃縮并真空干燥，得到本發(fā)明復(fù)方苦參有效部位。
(3)方法一、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-20或60加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時(shí)間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
方法二、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入適量相同溫度甘油和泊洛沙姆的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載40MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
方法三、按處方稱(chēng)取乳化劑，加少量吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱(chēng)取脂質(zhì)加入處方量復(fù)方苦參有效部位，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時(shí)后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
方法四、取復(fù)方苦參有效部位，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解加入處方量的乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相，另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，即得主藥混懸液。
(4)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑。
本發(fā)明載體主要包括脂質(zhì)和乳化劑兩部分。
本發(fā)明所用的脂質(zhì)可以為脂肪酸甘油酯類(lèi)(包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、單硬脂酸甘油酯)及脂肪酸類(lèi)(如硬脂酸、棕櫚酸)等。
本發(fā)明所用乳化劑可以為磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等)、Pluronic F68、泊洛沙姆、聚山梨醇、膽酸鹽、四丁酚醛等。
本發(fā)明納米注射制劑可以為納米水針劑、納米粉針劑、納米輸液制劑。
本發(fā)明納米水針劑、納米輸液劑加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制劑的穩(wěn)定性，防止納米粒聚集。
本發(fā)明納米粉針制劑的賦形劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、葡聚糖中的一種或兩種。
本發(fā)明制劑所用納米載體還可以通過(guò)以下方法制備得到將復(fù)方苦參有效部位的油溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種)，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得。
本發(fā)明所用的以上載體制備工藝是我們經(jīng)大量實(shí)驗(yàn)研究和優(yōu)選的結(jié)果，在研究過(guò)程中我們采用了很多納米技術(shù)工藝并進(jìn)行了比較，有的工藝難以制備成納米藥物，而有的工藝即便制備成納米藥物，也達(dá)不到本發(fā)明制劑的靶向效果。
二、質(zhì)量檢測(cè)儀器H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關(guān)光譜儀(英國(guó)Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺(tái)式高速離心機(jī)。
檢測(cè)依據(jù)參照《中華人民共和國(guó)藥典》2005版二部附錄XIX E指導(dǎo)原則項(xiàng)下的方法。
1、形態(tài)觀察及粒徑將本發(fā)明納米藥物在透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察，可見(jiàn)呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無(wú)粘連。根據(jù)納米藥物的顯微照片測(cè)定了500個(gè)，平均粒徑為37.6nm，最大粒徑為68.5nm，最小粒徑為22.0nm，且粒徑分布符合正態(tài)分布規(guī)律。
2、包封率和載藥量測(cè)定參照復(fù)方苦參注射液項(xiàng)下苦參堿的含量測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定，并用下述公式計(jì)算包封率和載藥量包封率(％)＝(投藥量－游離藥物量)/投藥量×100％；載藥量(％)＝(投藥量－游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。結(jié)果以苦參堿計(jì)平均包封率為95.7.％，載藥量可達(dá)10％-25％。
3、穩(wěn)定性考察將本發(fā)明納米藥物分別置于小瓶?jī)?nèi)，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環(huán)境中放置，于0、1、2和3月觀測(cè)納米藥物的外觀、大小、再分散性等。結(jié)果均未見(jiàn)明顯變化，3種條件下的納米藥物再分散性保持良好，無(wú)聚合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4、加速實(shí)驗(yàn)含量測(cè)定復(fù)方苦參注射液(山西金晶藥業(yè)有限公司)；本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室制備)；將以上制劑分別置40℃，RH75％條件下放置6個(gè)月，分別測(cè)定制劑中苦參堿的含量，考察加速條件下復(fù)方苦參制劑含量的變化(以0月含量為100％計(jì)算)。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)含量測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明在加速實(shí)驗(yàn)過(guò)程中復(fù)方苦參注射液的苦參堿含量下降明顯，而采用本發(fā)明方法制備的復(fù)方苦參納米注射制劑變化較小，同時(shí)測(cè)定上述制劑的不溶性微粒，發(fā)現(xiàn)復(fù)方苦參注射液不溶性微粒數(shù)目與本發(fā)明復(fù)方苦參納米制劑比較在貯藏過(guò)程中不溶性微粒有顯著增加趨勢(shì)，而本發(fā)明復(fù)方苦參納米制劑數(shù)目少且貯藏過(guò)程中基本不變，說(shuō)明本發(fā)明復(fù)方苦參納米制劑的制備方法顯著提高了制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，具有重要的實(shí)際意義。
三、藥理和靶向?qū)嶒?yàn)試藥與動(dòng)物復(fù)方苦參注射液(山西金晶藥業(yè)有限公司)；本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室制備)；Wistar大鼠，體重180-220g；健康小鼠，體重18-22g；瘤株小鼠S180，小鼠肝癌H22(廣州市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。
1.對(duì)移植性肝癌H22的影響和靶向作用無(wú)菌抽取接種后第7d的肝癌H22荷瘤小鼠腹水，加4倍量生理鹽水混勻，立即接種于小鼠右前肢腋窩處皮下，每只接種0.2ml，接種后24h隨機(jī)分組，尾靜脈注射給藥，給藥劑量為8g生藥/kg，給藥容積同為0.2ml/只，對(duì)照組給予等量生理鹽水，每日給藥1次，連續(xù)給藥10d，于末次給藥后24h脫頸處死小鼠，稱(chēng)體重并細(xì)心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱(chēng)取瘤重，并計(jì)算抑瘤率，取腫瘤細(xì)胞然后按組織∶生理鹽水為1∶1.5(W/V)的比例勻漿，離心10min(2000rpm)，取上清液用HPLC法測(cè)定苦參堿的含量。同時(shí)末次給藥后1h取血測(cè)定血清中的苦參堿含量。結(jié)果見(jiàn)表3、表4。
表3對(duì)移植性肝癌H22小鼠的影響

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與陽(yáng)性對(duì)照組比較ΔΔP＜0.01表4對(duì)移植性肝癌H22的靶向作用

結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑能延長(zhǎng)移植性肝癌H22小鼠的生存時(shí)間，具有比復(fù)方苦參注射液更好的藥理作用，本發(fā)明納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較有效成分在血清中濃度相當(dāng)，而肝癌H22腫瘤細(xì)胞中顯著增加，表明本發(fā)明納米注射制劑對(duì)肝癌H22腫瘤細(xì)胞具有較好的靶向性。
2.對(duì)小鼠S180腫瘤作用2.1對(duì)小鼠S180腫瘤生長(zhǎng)抑制作用和靶向作用取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋?zhuān)缓笕?.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小時(shí)稱(chēng)重，給藥組小鼠每日尾靜脈給藥一次，給藥劑量為8g生藥/kg，給藥容積同為0.2ml/只，對(duì)照組給予等量生理鹽水，共7天。停藥次日處死小鼠，稱(chēng)體重并細(xì)心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱(chēng)取瘤重，并計(jì)算抑瘤率，將稱(chēng)重后的瘤塊按組織∶生理鹽水為1∶1.5(W/V)的比例勻漿，離心10min(2000rpm)，取上清液用HPLC法測(cè)定苦參堿的含量。同時(shí)末次給藥后1h取血測(cè)定血清中的苦參堿含量。結(jié)果分別見(jiàn)表5、表6。
表5對(duì)小鼠S180腫瘤生長(zhǎng)抑制作用

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與復(fù)方苦參注射液比較ΔΔP＜0.01表6對(duì)小鼠S180腫瘤的靶向作用

結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑能顯著抑制S180腫瘤生長(zhǎng)，具有比復(fù)方苦參注射液更好的藥理作用，本發(fā)明納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較有效成分在血清中濃度相當(dāng)，而S180腫瘤細(xì)胞中顯著增加，表明本發(fā)明納米注射制劑對(duì)S180腫瘤細(xì)胞具有較好的靶向性。
2.2對(duì)荷瘤S180小鼠死亡率和存活時(shí)間的影響取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋?zhuān)缓笕?.2ml注入小鼠左腋下皮下，于接種腫瘤后一周，即第八天開(kāi)始按1.1方法給藥，讓其自然死亡，待對(duì)照組動(dòng)物全部死亡后，比較死亡率，并比較90天各組動(dòng)物的存活時(shí)間差異，設(shè)給藥組與對(duì)照組，每組小鼠20只，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7對(duì)小鼠死亡率和存活時(shí)間的影響

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與復(fù)方苦參注射液組比較ΔP＜0.05結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑能顯著降低荷瘤小鼠死亡率，延長(zhǎng)荷瘤小鼠存活時(shí)間，與復(fù)方苦參注射液比較作用更顯著。
3.鎮(zhèn)痛作用3.1對(duì)小鼠熱板致痛作用的影響取小鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組10只，即生理鹽水組、復(fù)方苦參注射液組、本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑組，給藥劑量為8g生藥/kg，給藥容積相同為0.2ml/只，空白對(duì)照組給予等量生理鹽水，連續(xù)給藥3天，末次給藥后1h將各鼠分別固定于55±0.5℃的熱板儀中，以舔后足作為“疼痛”的反應(yīng)指標(biāo)，觀察給藥后小鼠對(duì)熱板痛的反應(yīng)時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表5。
3.2對(duì)醋酸引起的扭體反應(yīng)的影響取小鼠，雌雄各半，分組及給藥方法同3.1，連續(xù)給藥3天，末次給藥后1h，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/20g體重，觀察10min內(nèi)的小鼠扭體次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表8。
表8鎮(zhèn)痛試驗(yàn)結(jié)果

注與生理鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有較好的鎮(zhèn)痛作用，與復(fù)方其中本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑的鎮(zhèn)痛作用比復(fù)方苦參注射液的作用更為顯著。
4.止血作用4.1對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響取小鼠，雌雄各半，分組及給藥方法同3.1，連續(xù)給藥3天，于末次給藥后30min將小鼠尾尖端3mm處剪斷，待血液自行流出開(kāi)始計(jì)時(shí)，每隔30s用濾紙吸去血滴1次，直至血流自行停止(濾紙吸無(wú)血)為止，計(jì)算出血時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響

注與生理鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有顯著的止血作用，與復(fù)方苦參注射液組比較效果更好。
5.抗炎作用5.1對(duì)小鼠耳二甲苯致炎的影響取小鼠30只，雌雄各半，分組及給藥方法同3.1，連續(xù)給藥3天，于末次給藥后30min，將二甲苯0.02ml涂于小鼠左耳，1h后脫臼處死小鼠，剪下二耳，打孔稱(chēng)重，以左耳與右耳片重量差值為腫脹度，結(jié)果見(jiàn)表10。
表10對(duì)小鼠耳二甲苯致炎的影響結(jié)果

注與生理鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有良好的抗炎作用，與復(fù)方苦參注射液組比較其抗炎效果更好。
7.血管刺激性考察取家兔8只，隨機(jī)均分2組，每組4只，分別于左耳把家兔置于固定器中，且頭用兔頭固定儀固定，用酒精將皮膚消毒后，于右側(cè)耳緣靜脈注射復(fù)方苦參注射液和本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑，于另一側(cè)對(duì)應(yīng)部位注射同一體積的生理鹽水作為對(duì)照，每日注射1次，連續(xù)1周，觀察兔耳緣靜脈反應(yīng)，每日觀察注射部位血管有無(wú)發(fā)紅、水腫、周?chē)袩o(wú)滲血，觸摸血管有無(wú)變硬現(xiàn)象，左右耳比較觀察。于末次給藥后24h，將動(dòng)物處死，取下兩耳，進(jìn)行組織切片檢查，切片部位為進(jìn)針部位的向心端，距進(jìn)針部位1-4cm，分1-2.5cm和2.5-4cm兩段取樣。
觀察指標(biāo)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)觀察方法包括肉眼觀察和顯微鏡下病理觀察。觀察給藥血管及其周?chē)M織的變化，顯微鏡下觀察耳緣靜脈有無(wú)血栓形成、內(nèi)皮損傷及血管周?chē)M織的病理變化情況。對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分。①血管變化。肉眼觀察無(wú)明顯充血記0分，輕度充血發(fā)紅、紋路清晰記1分，充血發(fā)紅、紋路不清記2分，重度充血、呈紫紅色記3分；顯微鏡觀察血管內(nèi)皮及血管壁完整記0分，有內(nèi)皮損傷記1分，有血栓栓塞記2分，血管破裂記3分。②血管周?chē)M織變化。肉眼觀察無(wú)明顯水腫記0分，輕微水腫記1分，明顯水腫記2分，嚴(yán)重水腫記3分；顯微鏡觀察周?chē)M織正常記0分，水腫記1分，出血記2分，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)記3分。將每組4只家兔各項(xiàng)觀察指標(biāo)得分累加，計(jì)算各組平均得分值，見(jiàn)表11。
表11刺激性試驗(yàn)結(jié)果

由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較刺激性具有明顯改善。
8.溶血毒性考察2％紅細(xì)胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時(shí)為止。將所得的紅細(xì)胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗(yàn)方法取試管6支，按表中的配比量依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對(duì)照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開(kāi)始每隔15分鐘觀察1次，1小時(shí)后，每隔1小時(shí)觀察1次，共觀察2小時(shí)。結(jié)果見(jiàn)表12。
表12溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果以第3試管為準(zhǔn)，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見(jiàn)有紅細(xì)胞破裂，說(shuō)明本品不溶血，安全性好。
9.急性毒性實(shí)驗(yàn)取Wistar大鼠80只，雌雄各半。禁食24h，隨機(jī)分4組，每組20只。濃縮成相同的生藥濃度，各組分別尾靜脈注射藥物，給藥劑量按生藥量折算相當(dāng)于復(fù)方苦參注射液300g生藥/kg，每天給藥3次，連續(xù)7天，觀察小鼠死亡情況，結(jié)果見(jiàn)表13。
表13急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較安全性更好。
小結(jié)以上藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑藥理作用顯著好于復(fù)方苦參注射液，且本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有更好的靶向性和安全性。
四、制備實(shí)施例實(shí)施例1(1)取復(fù)方苦參有效部位20g、卵磷脂50g、單硬脂酸甘油酯50g，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-202g加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時(shí)間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
(2)制劑的備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例2(1)取復(fù)方苦參有效部位20g、豆磷脂50g、硬脂酸60g，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-603g加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時(shí)間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例3(1)取復(fù)方苦參有效部位30g、卵磷脂80g、單硬脂酸甘油酯90g，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油2g和泊洛沙姆5g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載50MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例4(1)取復(fù)方苦參有效部位50g、卵磷脂80g、三肉豆蔻酸甘油酯120g，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油3g和泊洛沙姆5g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載50MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例5(1)取復(fù)方苦參有效部位40g、Pluronic F68 75g、硬脂酸75g，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油3g和泊洛沙姆6g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載50MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例6(1)取卵磷脂80g，吐溫80 2g，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱(chēng)取三窬酸甘油酯80g加入復(fù)方苦參有效部位30g，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入右旋糖酐，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例7(1)取復(fù)方苦參有效部位20g，硬脂酸90g和丙酮200ml加入容器中，超聲使充分溶解，加入處方量的卵磷脂80g，微熱使溶成有機(jī)相，另取泊洛沙姆20g溶于250ml水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮到約500ml，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的100ml水相，繼續(xù)攪拌2h，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡聚糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例8(1)將復(fù)方苦參有效部位25g溶于聚丙交酯-乙交酯120g，同1000ml無(wú)水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液3000ml(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖和乳糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實(shí)施例9(1)將復(fù)方苦參有效部位30g溶于聚氰基丙烯酸烷酯140g、同1000ml無(wú)水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液3000ml(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖和葡聚糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方苦參納米注射制劑，其特征在于它是將苦參、白土苓提取得到的復(fù)方苦參有效部位配以載體制成的納米級(jí)的注射制劑，其中復(fù)方苦參有效部位2-5重量份、載體10-20重量份。其特征還在于它具有靶向作用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種復(fù)方苦參納米注射制劑，其特征在于所述的納米級(jí)為20-70nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方苦參納米注射制劑，其制備方法為(1)主藥混懸液的制備方法一、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-20或60加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時(shí)間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。方法二、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入適量相同溫度甘油和泊洛沙姆的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載40MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。方法三、按處方稱(chēng)取乳化劑，加少量吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱(chēng)取脂質(zhì)加入處方量復(fù)方苦參有效部位，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時(shí)后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。方法四、取復(fù)方苦參有效部位，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解加入處方量的乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相，另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在1000r/min攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系在1000r/min攪拌下快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，即得主藥混懸液。(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明粉針制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方苦參納米注射制劑，其制備方法為(1)主藥混懸液的制備將復(fù)方苦參有效部位溶于聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為pH值約6的0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液，兩相均為20℃，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用9-15μm玻砂漏斗過(guò)濾，即得。(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明納米粉針制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種復(fù)方苦參納米注射制劑及其制備方法，將復(fù)方苦參有效部位與適宜量的載體與其它輔料采用本發(fā)明工藝方法制成納米載體，并制備成水針劑、粉針劑和輸液劑，本發(fā)明制劑穩(wěn)定性好，具有靶向作用，藥理實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明納米注射制劑安全性好，且具有更好的療效。
文檔編號(hào)A61K9/10GK1883545SQ20051007749
公開(kāi)日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2005年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月24日
發(fā)明者張晴龍 申請(qǐng)人:張晴龍